小鼠视网膜神经节细胞（RGC-5）

小鼠视网膜神经节细胞(RGC-5)
细胞特性
1)来源：小鼠
2)形态：上皮细胞样
3)含量：>lxl06个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
运输和保存：使用含有胎牛【niú】血【xuè】清的2ml冻存管发送存活细胞【bāo】。收到细胞后，可【kě】在1000RPM，常温条【tiáo】件【jiàn】下【xià】，离【lí】心5min后，于洁净【jìng】操作台弃【qì】去【qù】上清，加【jiā】入推【tuī】荐使用的【de】培养基后转【zhuǎn】移至l〇cm培【péi】养皿【mǐn】或者【zhě】T25培养瓶中培养，传代达到细胞生长状态良好时【shí】，再进行【háng】冻存。具体操作见细胞培养步骤。
细胞用途：仅供使用。
 
小鼠视网膜神经节细胞(RGC-5)细胞培养步骤
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.F-12(GIBCO)，90%;北美胎【tāi】牛血【xuè】清【qīng】(United States，GIBCO，货号16000-044)，10%。
2.培【péi】养条件【jiàn】：气相：空气，95%;二【èr】氧化【huà】碳，5%。温度【dù】：37摄氏度，培养箱湿度【dù】为70%-80%。
3.冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
 
2)细胞处理：
复苏细胞：将含有【yǒu】lmL细胞悬液的冻存管【guǎn】在37°C水浴中【zhōng】迅【xùn】速摇晃解冻，加入4mL培【péi】养基混【hún】合均匀【yún】。在1000RPM条件下离心4分钟【zhōng】，弃去上清液，补加l-2mL培养【yǎng】基后【hòu】吹匀【yún】。然后将所【suǒ】有细胞悬液加入培养瓶中培【péi】养【yǎng】过夜（或【huò】将细胞悬液【yè】加入l〇cm皿中，加入约【yuē】8ml培养基，培【péi】养【yǎng】过【guò】夜）。第二天换液并【bìng】检 查细胞密度。
细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
 
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞9-21次。
力【lì】口 2m丨消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于【yú】培养【yǎng】瓶中，置【zhì】于37°C培
养箱中消化9-21分钟，然后在显微镜下观察细胞【bāo】消化情况【kuàng】，若细胞大部分【fèn】变圆并脱落【luò】，迅速【sù】拿回【huí】操【cāo】作台，轻敲【qiāo】几【jǐ】下培养瓶【píng】后【hòu】加少量培养基终止消化。
按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻【qīng】打匀后吸【xī】出，在【zài】1000RPM条件下离心4分【fèn】钟，弃去上清液，补【bǔ】加l-2mL培养液后【hòu】吹匀。
将【jiāng】细【xì】胞悬液按1: 2到1: 5的比例【lì】分到新的含8ml培【péi】养【yǎng】基的新皿中或者瓶中【zhōng】。
 
细【xì】胞冻存：待细胞【bāo】生长状态良好时，可【kě】进行细胞冻存。贴壁细胞冻【dòng】存时，先【xiān】要消化处理【lǐ】并进行【háng】细胞计数。消化方法【fǎ】按照细胞传代方法的9-21步骤进行，后的重【chóng】悬液使用血清。加DMSO至终【zhōng】浓【nóng】度【dù】为10%，加入【rù】DMSO后【hòu】迅速混 匀，按每lml的数量分配到冻存【cún】管【guǎn】中。本公【gōng】司按每个冻存管细【xì】胞数目大于 1X106个细胞冻存。
 
小鼠视网膜神经节细胞(RGC-5)注意事项：
收到细胞后，若发现干冰己挥发干净【jìng】、冻【dòng】存【cún】管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即【jí】与我【wǒ】们【men】电联。
所有动【dòng】物细胞均视为【wéi】有潜在的生物危害性，必须【xū】在二级生物安全【quán】台【tái】内操作，并请【qǐng】注意防护，所有【yǒu】废【fèi】液及【jí】接【jiē】触过此细胞的器皿需要灭【miè】菌后方能丢弃。