小鼠胚胎干细胞 （E14）

小鼠胚胎干细胞 (E14)
细胞特性
1)来源：小鼠，胚胎内细胞团
2)形态：球形克隆
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
细胞接受后的处理：
1.收到细胞后，请检查是否漏液，如果漏液，请拍照片发给我们。
2.请【qǐng】先在显微镜下确认细胞【bāo】生长【zhǎng】状态，去掉【diào】封【fēng】口膜并将T25瓶置于37°C培养约2-3h〇
3.弃去T25瓶中的培养基，添加6ml本公司附带的*培养基。
4.如【rú】果细胞【bāo】长满（90%以上）请及【jí】时进行细【xì】胞【bāo】传代【dài】，传代培养用6ml本公司附【fù】带的*培养基【jī】。
5.接到细胞【bāo】次日，请检【jiǎn】查细【xì】胞是否污染，若发【fā】现污染或疑【yí】似污染，请及【jí】时与我们取得【dé】电联。
细胞用途：仅供使用。
 
小鼠胚胎干细胞 (E14)本公司的细胞培养操作规程，供参考
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.mES *培养液配方【fāng】（600 ml):DMEM (Invitrogen 12430)497ml，ES级【jí】FBS
(biochrom S4115)90ml,Glutamax(Invitrogen 35050)6ml,NEAA(Invitrogen11140)6ml，UF(MilliporeESG1107)6〇yl(终浓度为【wéi】1000U/ml)，0-Mer (Invitrogen21985)1.5ml〇
2. 培养条件【jiàn】：气【qì】相：空气【qì】，95%;二【èr】氧化碳，5%。温度：37°C，培【péi】养箱湿度 为 70%-80%。
3.冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
2)细胞处理：
复苏【sū】细胞：将含【hán】有lmL细【xì】胞悬液的冻【dòng】存【cún】管迅速【sù】放入37°C水【shuǐ】浴【yù】中（水面要低【dī】于冻存管盖部）摇晃解【jiě】冻，移入【rù】事先【xiān】准【zhǔn】备好的含有4mL培养【yǎng】基的15ml离心【xīn】管【guǎn】中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃【qì】去上清液【yè】，加入lmL培养【yǎng】基【jī】后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有【yǒu】5ml培养基【jī】的培养瓶中培养过夜。 第二天换液并检查细胞密度。
细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
 
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞9-23次。
力【lì】口 2m丨【shù】消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于【yú】培养瓶中【zhōng】，置于37°C培养箱中【zhōng】消化9-23分钟，然【rán】后【hòu】在显微镜下观察细胞消化情况【kuàng】，若细胞大【dà】部分变圆并脱落，迅【xùn】速拿回操【cāo】作台，轻敲几下培养瓶【píng】后加入3ml此细胞的培【péi】养【yǎng】基终止消化。
轻轻吹打后吸出，移入15ml离心管中，在1000RPM条件下离心【xīn】4分钟，弃去上清液，加入【rù】lmL培【péi】养【yǎng】液后吹匀【yún】。
移入到事先准【zhǔn】备好的含有【yǒu】5ml培养基的【de】T-25培养瓶中或含有【yǒu】14ml培养 基【jī】的T-75培养瓶中【zhōng】培养。
 
细胞冻存：待细胞生长状态良【liáng】好时，可进行【háng】细胞【bāo】冻存【cún】。贴【tiē】壁细【xì】胞冻【dòng】存时，先要消化处理并【bìng】进行细胞计数。消化【huà】方【fāng】法按照【zhào】细胞传代方法【fǎ】的【de】9-23步骤进行，后的【de】重悬液使用血清。悬浮细胞直接计数后【hòu】离心，用血清【qīng】重悬【xuán】浮【fú】，加DMSO至终浓度为10%。加入【rù】DMSO后【hòu】迅速混匀，按每lml的数量分配到【dào】冻存【cún】管 中。本公司【sī】按每个冻存管细胞数目大于1X106个细胞冻存。
 
小鼠胚胎干细胞 (E14)注意事项：
收到细胞后，若发现干冰己【jǐ】挥发干【gàn】净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞【bāo】有污【wū】染， 请【qǐng】立即【jí】与我【wǒ】们电联。
所有动【dòng】物【wù】细胞均视为有潜在的【de】生物危害【hài】性，必须在【zài】二级生物安全台内操【cāo】作【zuò】， 并请注意防【fáng】护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后【hòu】方【fāng】能【néng】丢弃。