小鼠T淋巴细胞 （CTLL-2）

小鼠T淋巴细胞 (CTLL-2)
细胞介绍
该细【xì】胞是【shì】源自C57BL/6的细胞毒性的【de】T淋巴细胞，其生长【zhǎng】依赖IL-2。
 
细胞特性
1)来源：T细胞
2)形态：悬浮生长
3)含量：>lxl06个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
运输和保存【cún】：使【shǐ】用含有胎牛血【xuè】清的2ml冻【dòng】存管发送存活细胞【bāo】。收到细胞后，可在1000RPM，常【cháng】温条件下，离心【xīn】5min后，于洁净操作台弃去上清【qīng】，加入【rù】推荐 使用【yòng】的培养基后转【zhuǎn】移至【zhì】l〇cm培养皿或者T25培养瓶中培养【yǎng】，传【chuán】代达到细胞【bāo】生长状【zhuàng】态良好时，再进行冻存【cún】。具体操作见细【xì】胞【bāo】培养步【bù】骤。
细胞用途：仅供使用。
 
小鼠T淋巴细胞 (CTLL-2)细胞培养步骤
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准备 RPIVM-1640 培养基(RPMI-1640:GIBCO)，80%;补充 2mM的L-谷氨酰胺，ImM的【de】丙酮酸【suān】钠【nà】；另【lìng】外【wài】添加250U/mlrmlL-2(recombinantmouseInterleukin 2)，添加ConA的T-STIM (BDPharmingen,货号354115)，10%;胎牛血清，10%。
2.培养条【tiáo】件：气【qì】相：空气，95%;二氧化【huà】碳【tàn】，5%。温度：37摄氏度，培养【yǎng】箱 湿【shī】度为70%-80%。
3.冻【dòng】存液：90%*培养基，10%DMSO,现用【yòng】现【xiàn】配。液氮储存。
2)细胞处理：
复苏细胞：将含有【yǒu】lmL细胞悬液的冻存管在【zài】37°C水浴中迅速摇晃解冻【dòng】，加入【rù】4mL培养【yǎng】基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去【qù】上清液【yè】，补加l-2mL培养基后吹匀。然【rán】后将所【suǒ】有细胞悬液加入培养【yǎng】瓶中培养过夜（或将 细【xì】胞悬液【yè】加入l〇cm皿中，加入约8ml培养【yǎng】基，培养【yǎng】过夜）。第二【èr】天换液并检 查细胞密度。
细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法【fǎ】一：收集【jí】细胞【bāo】，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去【qù】上清液，补加【jiā】l-2mL培养液后吹句，将【jiāng】细【xì】胞悬【xuán】液按1: 2到1: 5的比例分到新的含8ml培 养基的新皿中【zhōng】或【huò】者瓶中。
方法二【èr】：可选【xuǎn】择半数换液方式，弃【qì】去半数培养基后，将剩余细【xì】胞悬起，将【jiāng】细 胞悬液按【àn】1: 2到【dào】1: 3的比例分到新的含8ml培养基的新皿【mǐn】中或者【zhě】瓶中。
 
细胞【bāo】冻【dòng】存：待细胞生长状【zhuàng】态良好时，可进行细胞冻【dòng】存。悬浮细【xì】胞冻存时【shí】，应【yīng】 将细胞收集【jí】，1000RPM，常温条件下离心5分钟【zhōng】，少量保存上清液（防止细【xì】 胞吸走)，加入【rù】部分【fèn】新鲜培养基【jī】，吹打【dǎ】均匀后，加【jiā】入到【dào】冻存管中，在冻存【cún】管 中加入10%DMSO摇匀后进行冻存。
 
小鼠T淋巴细胞 (CTLL-2)注意事项：
收【shōu】到细胞后，若发现干冰己挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破【pò】损及细【xì】胞【bāo】有污染，请【qǐng】立【lì】即与我们电联。
所【suǒ】有【yǒu】动物【wù】细【xì】胞均视【shì】为有潜【qián】在的【de】生物危害性，必须在二级生物安全台内操作【zuò】，并请注意防【fáng】护，所有废【fèi】液及【jí】接触过此细胞【bāo】的器皿需要灭菌后方能丢弃。