小鼠成肌细胞 （C2C12）

小鼠成肌细胞 (C2C12)
细胞介绍
这是D.Yaffe和0.Saxe丨建立的小【xiǎo】鼠成【chéng】肌细胞株的亚克隆(由H.Blau等人构建【jiàn】)。 C2C12细胞株分化很快，形成可【kě】伸缩【suō】的肌【jī】管并特征性的【de】肌蛋【dàn】白。用【yòng】骨形成蛋白2(BMP-2)处【chù】理，导致分【fèn】化途径【jìng】从成肌细胞转换成成【chéng】骨细【xì】胞。检测表明【míng】肢骨【gǔ】发育 畸形病毒(鼠痘)阴性。
 
细胞特性
1)来源：组织：肌肉品系：C3H细胞类型：成肌细胞
2)形态：成肌细胞
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
运【yùn】输【shū】和保存【cún】：可选择干冰运输【shū】及发送【sòng】复苏存【cún】活细【xì】胞方式：（1)干【gàn】冰【bīng】运输，收到【dào】后【hòu】立即转入液氮冻存或直接复苏；（2)存活细胞【bāo】，收到后应继续【xù】生长，传代达【dá】到细胞生长【zhǎng】状态良好【hǎo】时，再进行冻存。具体操作见细胞培养步【bù】骤。
细胞用途：仅供使用。
 
小鼠成肌细胞 (C2C12)细胞培养步骤
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准备 DMEM 培【péi】养基(DMEM，GIBC0)，90%;胎牛血清，10%。
2. 培养条【tiáo】件：气相【xiàng】：空气【qì】，95%;二氧化碳，5%。温度：37摄氏度，培养箱 湿度为70%-80%。
3.冻存液：90%*培养【yǎng】基，10%DMSO,现【xiàn】用现【xiàn】配。液【yè】氮储存。
 
2)细胞处理：
复苏细胞：将【jiāng】含有lmL细胞悬【xuán】液的冻【dòng】存管在37°C水浴中迅【xùn】速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟【zhōng】，弃【qì】去上清液，补加l-2mL培养基后吹【chuī】匀。然后将所【suǒ】有细【xì】胞悬液加入【rù】培养瓶中培【péi】养过夜（或将【jiāng】 细【xì】胞【bāo】悬液加入l〇cm皿中，加入约【yuē】8ml培养基【jī】，培养【yǎng】过夜）。第二天换液并检 查细胞【bāo】密【mì】度。
细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞9-23次。
力口2m丨消【xiāo】化液【yè】（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶中，置于37°C培
养箱【xiāng】中【zhōng】消化9-23分钟，然后在显微【wēi】镜下观察细胞消化情况【kuàng】，若细胞大部【bù】分变【biàn】圆并脱落，迅速拿回操【cāo】作【zuò】台【tái】，轻敲几【jǐ】下培养瓶后加少【shǎo】量培养【yǎng】基终止消化。
按6-8ml/瓶【píng】补加培【péi】养基，轻轻打匀后吸【xī】出，在1000RPM条件下离【lí】心4分 钟，弃【qì】去上清液【yè】，补加l-2mL培养液后吹匀。
将【jiāng】细胞【bāo】悬液按【àn】1: 2到1: 5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者【zhě】 瓶中。
细胞冻存：待【dài】细胞生长状态良【liáng】好时，可【kě】进行细胞冻存。贴壁【bì】细胞【bāo】冻存时，弃 去培【péi】养基后加【jiā】入少量【liàng】胰【yí】酶，细胞变圆脱落后，加入约lml含血清【qīng】的培养基【jī】后 加入冻存管中，再添加1〇%DMSO后进行冻存。
 
小鼠成肌细胞 (C2C12)注意事项：
收【shōu】到细胞后，若【ruò】发现干【gàn】冰己挥发干净、冻存【cún】管瓶盖脱落、破损【sǔn】及细胞有污染，请立即与我们电【diàn】联。
所【suǒ】有【yǒu】动物【wù】细胞均视为【wéi】有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全【quán】台内操作，并请注意防护，所有【yǒu】废【fèi】液及接触过此细胞的器【qì】皿需要灭菌后方【fāng】能【néng】丢【diū】弃。