马腺病毒PCR检测试剂盒

产品介绍：

产品名称：马腺病毒PCR检测试剂盒

英【yīng】文名称：Equine Adenovirus(EAdV)PCR

准备物品：

清理液（A）                                   毫【háo】升【shēng】

染色液（t B）                                 微升

稀释液（C）                                   毫升【shēng】

溶解液（tD）                                  毫升

产【chǎn】品说明【míng】书                                     1份

注意事项：

1．基础程序；

2．扩增温度和延伸温度；

3．反应时间；

4．循环次数；

5．PCR 反应液的配制；

6．PCR技术的基本原理；

7．PCR的反应动力学；

8．PCR扩增产物；

9．PCR反应体系与反应条件。

反应五要素：

参【cān】加PCR反应【yīng】的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板【bǎn】和Mg2+

引物：引物是PCR特异性反应的关键，马腺病毒PCR检测试剂盒PCR 产物【wù】的特异性【xìng】取决【jué】于引物与模板DNA互补的程度【dù】。理【lǐ】论【lùn】上【shàng】，只【zhī】要知道【dào】任何一段模板DNA序列， 就能按其设计互补的寡【guǎ】核苷酸链做引物，利【lì】用PCR就可【kě】将模【mó】板【bǎn】DNA在体外大量扩增。设计【jì】引物应遵循以下原则：

①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。

②引【yǐn】物扩增跨度： 以200-500bp为宜【yí】，特定条件下可扩增长至10kb的片段【duàn】。

③引物【wù】碱基：G+C含量以9-21%为宜，G+C太少扩增效果不佳，G+C过【guò】多【duō】易出现非特【tè】异【yì】条【tiáo】带。ATGC*随机分布，避免5个以【yǐ】上的嘌呤【lìng】或【huò】嘧啶核苷酸的成串【chuàn】排列。

④避免【miǎn】引物内【nèi】部出现二级结构【gòu】，避免两条【tiáo】引物间互补，特别是3'端的互补，否则会形成引【yǐn】物二聚体【tǐ】，产生非特异的扩增条带。

⑤引物【wù】3'端【duān】的【de】碱基，特【tè】别是末及倒数第二个碱【jiǎn】基，应严格要求配对，以【yǐ】避免因末端碱基不配对而导【dǎo】致PCR失败【bài】。

⑥引【yǐn】物中有或能加上合适的【de】酶切【qiē】位点， 被扩增的【de】靶序【xù】列*有适【shì】宜的酶切【qiē】位点， 这对酶切分析或【huò】分子克隆很有好处【chù】。

⑦引物的特【tè】异【yì】性【xìng】：引物应与核酸序列数据库的其【qí】它序列无明【míng】显同【tóng】源性。

引物量：每条引物【wù】的浓度0.1～1umol或10～100pmol，以【yǐ】*引物量产【chǎn】生所需要的【de】结果为好，引【yǐn】物浓度偏【piān】高会【huì】引起错配和非特异性扩【kuò】增，且【qiě】可增加引物之【zhī】间形成二聚体的机会。