猪札如病毒札幌病毒PCR检测试剂盒

产品介绍：

产品名称：猪札如病毒札幌病毒PCR检测试剂盒

英【yīng】文名称：Porcine Sapovirus（PoSaV）（）RTPCR

准备物品：

清【qīng】理【lǐ】液（A）                                    毫升

染【rǎn】色液（t B）                                  微【wēi】升

稀释液【yè】（C）                                    毫升

溶解液（tD）                                   毫【háo】升

产品说明书                                      1份【fèn】

注意事项：

1．基础程序

2．扩增温度和延伸温度

3．反应时间

4．循环次数

5．PCR 反应液的配制

6．PCR技术的基本原理

7．PCR的反应动力学

8．PCR扩增产物

9．PCR反应体系与反应条件。

反应五要素：

参【cān】加PCR反应的物质主要有五种即【jí】引物、酶、dNTP、模板和Mg2+

引【yǐn】物：引物【wù】是PCR特【tè】异性反应的关键【jiàn】，PCR 产【chǎn】物的【de】特异性取【qǔ】决于引物与模板DNA互补的程度。理论上，只【zhī】要知道【dào】任何一段【duàn】模板【bǎn】DNA序【xù】列， 就能【néng】按其设计互补的寡核【hé】苷酸链做引物，利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增【zēng】。设计【jì】引物应遵循以下【xià】原则：

① 引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。

② 引物扩增跨度： 以200-500bp为宜，特定条件下【xià】可【kě】扩增【zēng】长至10kb的【de】片段。

③ 引物碱【jiǎn】基：G+C含【hán】量以9-21%为宜，G+C太少扩增效果不【bú】佳，G+C过多易出【chū】现非特【tè】异条带【dài】。ATGC*随机分布，避免5个以上的【de】嘌呤或嘧【mì】啶核苷【gān】酸的成串排【pái】列。

④ 避免引物内部出现【xiàn】二【èr】级【jí】结【jié】构，避免两条【tiáo】引物间互补【bǔ】，特别【bié】是【shì】3'端的互补，否则【zé】会形成引物二聚体，产生非特【tè】异的扩增条带。

⑤ 引【yǐn】物3'端的碱基，特别【bié】是【shì】末及倒数第二【èr】个碱基，应严格要求配【pèi】对，以避免因末端碱基【jī】不配对而导致PCR失【shī】败。

⑥ 引物中有或【huò】能加【jiā】上合适的酶切【qiē】位点， 被扩增的【de】靶序列【liè】*有适宜的酶切位点， 这对酶切分【fèn】析或【huò】分子克隆很有好处【chù】。

⑦ 引物【wù】的特异性：引物应与核【hé】酸序列数据库的其它【tā】序【xù】列无明【míng】显同源性。

猪札如病毒札幌病毒PCR检测试剂盒 引物【wù】量：每条【tiáo】引物【wù】的浓【nóng】度【dù】0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量产【chǎn】生【shēng】所需要【yào】的结果为好，引物浓度偏高会【huì】引起错配和非特异性扩增，且可增加【jiā】引物之间形成二聚体的机会。