蒙得维的沙门氏菌PCR检测试剂盒

产品介绍：

产品名称：蒙得维的沙门氏菌PCR检测试剂盒

英文名称：Salmonella montevideoPCR

准备物品：

清理【lǐ】液（A）                                   毫【háo】升

染色液（t B）                                 微升【shēng】

稀释液（C）                                   毫【háo】升

溶解【jiě】液（tD）                                  毫【háo】升

产品【pǐn】说明书【shū】                                     1份

注意事项：

1．基础程序。

2．扩增温度和延伸温度。

3．反应时间。

4．循环次数。

5．PCR 反应液的配制。

6．PCR技术的基本原理。

7．PCR的反应动力学。

8．PCR扩增产物。

9．PCR反应体系与反应条件。

反应五要素：

参【cān】加PCR反应【yīng】的物【wù】质主要有五【wǔ】种即引物、酶【méi】、dNTP、模板和Mg2+

引物：引物是PCR特异性反应的关键，蒙得维的沙门氏菌PCR检测试剂盒PCR 产物的【de】特异【yì】性取决于引物与模【mó】板DNA互补的程度。理论上，只要知道任何一段模【mó】板DNA序列， 就【jiù】能【néng】按其设计互补【bǔ】的【de】寡【guǎ】核苷酸链做引【yǐn】物，利用【yòng】PCR就可将模板DNA在体外【wài】大量扩增【zēng】。设计引物应遵循以下【xià】原则：

①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。

②引物【wù】扩增跨度： 以200-500bp为宜，特定【dìng】条件【jiàn】下可【kě】扩增长【zhǎng】至10kb的片段。

③引【yǐn】物碱【jiǎn】基【jī】：G+C含量【liàng】以9-21%为宜，G+C太少扩增效果不佳，G+C过多易出现非【fēi】特【tè】异条带。ATGC*随机分【fèn】布，避免5个以上的嘌【piào】呤【lìng】或嘧啶核苷酸的成串排列【liè】。

④避免引【yǐn】物内部【bù】出现二级【jí】结构，避免两条引物【wù】间互补，特别是3'端的互补【bǔ】，否则会形成引【yǐn】物二聚体【tǐ】，产生【shēng】非特异的扩【kuò】增条带。

⑤引物3'端【duān】的【de】碱【jiǎn】基，特别是末【mò】及倒数第二个碱基，应严格要求配对，以避免因末端碱基不【bú】配对而【ér】导【dǎo】致PCR失【shī】败。

⑥引物【wù】中有【yǒu】或能加上合适的酶切位点， 被【bèi】扩增的靶序【xù】列【liè】*有适宜【yí】的酶切位【wèi】点， 这对酶切分析或分子克隆很有好【hǎo】处【chù】。

⑦引【yǐn】物的特异性：引物应与【yǔ】核酸序【xù】列数【shù】据库的其它序列无明显同【tóng】源性。

引物量：每【měi】条引物的浓度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量产生所【suǒ】需要【yào】的【de】结果为【wéi】好，引物浓度偏高会引起错【cuò】配【pèi】和【hé】非特异性扩增，且可增加【jiā】引物【wù】之【zhī】间形成二聚体的机会。