马隐秘杆菌PCR检测试剂盒

产品介绍：

产品名称：马隐秘杆菌PCR检测试剂盒

英文名称：Arcanobacterium equiPCR

准备物品：

清理【lǐ】液（A）                                   毫升【shēng】

染色液（t B）                                 微升

稀释液（C）                                   毫【háo】升【shēng】

溶解【jiě】液（tD）                                  毫升

产品说明书【shū】                                     1份

注意事项：

1．基础程序；

2．扩增温度和延伸温度；

3．反应时间；

4．循环次数；

5．PCR 反应液的配制；

6．PCR技术的基本原理；

7．PCR的反应动力学；

8．PCR扩增产物；

9．PCR反应体系与反应条件。

反应五要素：

参加PCR反应的物【wù】质主要有五种即【jí】引物、酶【méi】、dNTP、模板和Mg2+

引物：引物是PCR特异性反应的关键，马隐秘杆菌PCR检测试剂盒PCR 产【chǎn】物的【de】特异性取【qǔ】决于引物与模板DNA互补【bǔ】的程【chéng】度。理论上，只要知道任何一【yī】段模板DNA序列， 就【jiù】能按其设计【jì】互补的【de】寡核【hé】苷【gān】酸链【liàn】做【zuò】引物，利用【yòng】PCR就可将模板DNA在体【tǐ】外大量扩增。设计引物应【yīng】遵循以下原则：

①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。

②引物【wù】扩增跨度： 以200-500bp为【wéi】宜【yí】，特定条件下可扩增长至10kb的【de】片段。

③引物碱基：G+C含量以9-21%为宜，G+C太少【shǎo】扩增效果不【bú】佳，G+C过【guò】多易出【chū】现非特异条带。ATGC*随机分布，避【bì】免5个【gè】以上【shàng】的嘌【piào】呤或嘧啶核【hé】苷酸【suān】的成串排列。

④避【bì】免引物【wù】内部出现二级【jí】结构，避【bì】免两【liǎng】条引物【wù】间互补，特别是3'端的互补【bǔ】，否则会【huì】形成引物【wù】二聚体，产生非特异的扩增条带。

⑤引物3'端的碱基，特别是【shì】末及【jí】倒数第二【èr】个碱基，应严格要求配对【duì】，以避【bì】免因末端碱基不配【pèi】对而导致PCR失【shī】败【bài】。

⑥引【yǐn】物中有或能加上【shàng】合适的酶【méi】切位点， 被扩增【zēng】的靶序【xù】列*有【yǒu】适宜的酶切【qiē】位点， 这对酶切【qiē】分【fèn】析或分子克隆很有【yǒu】好处。

⑦引物的【de】特异性：引物应与核酸序列数据库【kù】的其它【tā】序列无【wú】明显同【tóng】源性【xìng】。

引【yǐn】物量：每条引【yǐn】物的浓【nóng】度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量产生【shēng】所需要的结【jié】果为【wéi】好，引物浓度偏高会引起错【cuò】配和非特异性扩增【zēng】，且可增加引物之间【jiān】形【xíng】成二【èr】聚【jù】体的机会。