人肺鱗癌细胞（NCI-H226）

人肺鱗癌细胞(NCI-H226)
细胞介绍：
此细胞株于1980年分离建立。
 
细胞培养步骤：
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准备 RPIVM-1640 培养基(RPMI-1640:GIBCO)，90%;胎【tāi】牛血【xuè】清，10%。
2. 培养条件【jiàn】：气相：空气，95%;二氧化碳【tàn】，5%。温度：37摄氏【shì】度，培养箱湿度为70%-80%。
3.冻存液：90%*培养基，10%DMSO,现【xiàn】用现【xiàn】配【pèi】。液氮储存。
 
2)细胞处理：
复苏细胞：将含有lmL细胞悬液的冻【dòng】存管【guǎn】在37°C水浴中迅速摇晃解冻，加入【rù】4mL培养基混【hún】合【hé】均匀。在1000RPM条件下离心4分【fèn】钟【zhōng】，弃去上清液，补加l-2mL培【péi】养【yǎng】基【jī】后吹【chuī】匀。然【rán】后将所有细胞悬液加入【rù】培养瓶中培养过【guò】夜（或将【jiāng】细胞悬液加入l〇cm皿中，加入约8ml培养基，培【péi】养过夜【yè】）。第二天换液并检 查细胞【bāo】密度。细胞传【chuán】代：如果细胞【bāo】密度达【dá】80%-90%，即可进行传代培【péi】养。

 
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去培养上清【qīng】，用不含【hán】钙【gài】、镁离子的PBS润洗【xǐ】细胞9-20次。力【lì】口2m丨消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶中，置于37°C培养箱中消化9-20分钟，然【rán】后在显微镜【jìng】下观察细胞【bāo】消化情况，若细胞大【dà】部分【fèn】变圆【yuán】并【bìng】脱落，迅速拿回【huí】操作台，轻【qīng】敲几【jǐ】下培养瓶后加少量培养基终止消化。按6-8ml/瓶补【bǔ】加【jiā】培【péi】养基，轻轻打匀后吸出，在【zài】1000RPM条件下【xià】离心4分钟，弃去上清液，补加【jiā】l-2mL培养液【yè】后吹匀。将细胞悬液按【àn】1: 2到【dào】1: 5的比例【lì】分到新的含【hán】8ml培养【yǎng】基的新皿中【zhōng】或者瓶中。

 
人肺鱗癌细胞(NCI-H226)对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法【fǎ】一：收集细【xì】胞，1000RPM条件【jiàn】下离心4分钟，弃【qì】去上清液，补加【jiā】l-2mL培养液后吹【chuī】匀，将细【xì】胞悬【xuán】液按1: 2到1: 5的比【bǐ】例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

方法二：可【kě】选【xuǎn】择半数换液方式，弃去半数培养基后，将剩余细胞【bāo】悬【xuán】起，将【jiāng】细胞悬液按【àn】1: 2到1: 3的比例分【fèn】到新的【de】含【hán】8ml培养基【jī】的新皿中或者瓶中。

  
细胞冻存：待细胞生【shēng】长状态良【liáng】好时，可进行细胞冻【dòng】存。贴壁细胞冻存【cún】时，弃去培【péi】养基后加【jiā】入少量【liàng】胰酶，细胞变圆脱【tuō】落后【hòu】，加【jiā】入约lml含血清【qīng】的培养基后 加入【rù】冻存管中，再添加1〇%DMSO后进【jìn】行冻存。悬浮细【xì】胞冻存时，应将细【xì】胞收集，1000RPM条件下【xià】离【lí】心4分【fèn】钟，少【shǎo】量保存上清液【yè】（防止【zhǐ】细胞吸走)，加入部分新鲜【xiān】培养【yǎng】基，加【jiā】入到【dào】冻存管中，在冻存管中加入1〇%DMSO后进行【háng】冻 存。

 
注意事项：
收到细胞后，若发现干冰己挥发干净【jìng】、冻存【cún】管【guǎn】瓶盖脱落、破损及细胞有污【wū】染，请【qǐng】立即【jí】与我们电【diàn】联。
所有动物细胞均视为【wéi】有潜在的生物【wù】危害性，必须【xū】在二级【jí】生物安【ān】全【quán】台内操作，并请【qǐng】注意防护，所有废液及接【jiē】触过此【cǐ】细胞的器【qì】皿需要灭菌后方能丢弃。

 
细胞特性：
1)来源：肺癌
2)形态：上皮细胞样
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
人肺鱗癌细胞(NCI-H226)运输和【hé】保存：可选择干【gàn】冰运输及【jí】发送复苏存活细胞方式：（1)干冰运输，收到后立即转入液氮【dàn】冻【dòng】存【cún】或直接复苏【sū】；（2)存【cún】活细胞

，收【shōu】到后【hòu】应【yīng】继续生长【zhǎng】，传代达到【dào】细【xì】胞生长状态良好时，再进行冻存。具体操作【zuò】见【jiàn】细胞培养步骤。
细胞用途：仅供使用。