肾胚瘤细胞（G-401）

肾胚瘤细胞(G-401)
细胞介绍：
G-401细胞【bāo】来源于韦【wéi】尔姆斯氏瘤【liú】，该细胞表达成【chéng】肾细胞生【shēng】长因子。
 
细胞培养步骤：
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准备 McCOY's 5A 培养【yǎng】基(McCOY's 5A，SIGMA,添加 NaHC03 2.2g/L)，90%;胎牛血清，10%。
2.培养条件【jiàn】：气【qì】相：空气，95%;二【èr】氧【yǎng】化碳，5%。温度【dù】：37摄氏度，培养箱 湿度为70%-80%。
3.冻存【cún】液：90%*培养基，10%DMSO,现用现配。液【yè】氮储【chǔ】存。
 
2)细胞处理：
复苏细【xì】胞：将含有lmL细胞悬【xuán】液【yè】的冻存管在37°C水【shuǐ】浴中迅速摇晃解冻【dòng】，加 入4mL培养【yǎng】基【jī】混【hún】合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补【bǔ】加l-2mL培养基后吹匀。然【rán】后将【jiāng】所有细【xì】胞悬液加入【rù】培养瓶中培养【yǎng】过夜（或将细胞【bāo】悬液加入【rù】l〇cm皿中，加入约8ml培【péi】养基，培养过夜）。第二【èr】天换液【yè】并检查细胞密【mì】度。
细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
 
肾胚瘤细胞(G-401)对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去培养上清，用不含钙、镁离【lí】子的PBS润洗细【xì】胞9-20次。力口2m丨【shù】消【xiāo】化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶【píng】中，置于37°C培养箱中【zhōng】消化9-20分钟，然【rán】后在显微镜【jìng】下观察细胞消【xiāo】化情【qíng】况，若细胞【bāo】大部 分【fèn】变圆并脱落，迅【xùn】速拿回【huí】操【cāo】作台，轻敲几下培养瓶后加少【shǎo】量培养基终止消化【huà】。按6-8ml/瓶补加【jiā】培养【yǎng】基，轻轻打匀【yún】后【hòu】吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加l-2mL培【péi】养液后吹【chuī】匀。将细胞【bāo】悬液按1: 2到【dào】1: 5的比例分【fèn】到新的含8ml培养【yǎng】基的新【xīn】皿中【zhōng】或者瓶中。
 
细【xì】胞冻存：待【dài】细胞【bāo】生【shēng】长状态【tài】良好【hǎo】时，可【kě】进行细胞冻存。贴【tiē】壁细胞冻【dòng】存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变【biàn】圆脱落后【hòu】，加入约lml含【hán】血【xuè】清的【de】培养基后加【jiā】入冻存管中，再添加1〇%DMSO后进行冻存。
 
注意事项：
收到细胞后，若发【fā】现干冰己挥【huī】发【fā】干净【jìng】、冻存管瓶盖脱落、破损【sǔn】及细【xì】胞有污染【rǎn】，请立即与我们【men】电联。
所有【yǒu】动【dòng】物细胞均视为有潜【qián】在的生物危【wēi】害性，必须在二级生物安全台内【nèi】操作，并请注意防护，所有废液及接触过【guò】此【cǐ】细胞【bāo】的器【qì】皿需要【yào】灭菌【jun1】后方能丢弃。
 
细胞特性：
1)来源：肾脏
2)形态：上皮细胞样，贴壁生长
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
肾胚瘤细胞(G-401)运输【shū】和保存：使【shǐ】用T25瓶【píng】充液发送【sòng】活细胞。收到细胞后，请先【xiān】在显微【wēi】镜下检查细【xì】 胞生长状态，并将【jiāng】T25瓶置于培养箱约6h或过【guò】夜后，再次检查细胞状态。若状态【tài】良好，可按照以下细【xì】胞培养步骤进【jìn】行细【xì】胞后续处理操作【zuò】。若发现【xiàn】可疑污染物，请【qǐng】及时【shí】与我们取得电联。
细胞用途：仅供使用。