人巨核细胞白血病细胞 （Dami）

人巨核细胞白血病细胞 (Dami)
细胞介绍：
从一【yī】个巨核细胞白血病患者【zhě】的【de】血液建立了一【yī】株新【xīn】的【de】人类巨【jù】核细胞(Dami)。此细胞悬浮生长【zhǎng】为主【zhǔ】，倍【bèi】增时间9-23小时【shí】。至少89%的细胞可与血小板糖蛋白(GP) lb and llb/NIa及血型糖蛋白【bái】单克【kè】隆抗【kàng】体反应。不与【yǔ】抗淋巴【bā】腺、单核【hé】细胞、粒性白细 胞、巨噬细胞抗原的抗【kàng】体反【fǎn】应。Dami细胞为研究巨核【hé】细胞【bāo】生化及分化提供【gòng】了极 好的模型【xíng】。
 
细胞培养步骤：
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准备 RPIVM-1640 培养基(RPIVM-1640:GIBCO,添加 NaHC03 1.5g/L, D-葡【pú】萄【táo】糖2.5g八，丙酮酸钠O.llg八【bā】)，90%;胎【tāi】牛血清，10%。
2.培养【yǎng】条【tiáo】件：气相：空气，95%;二氧化碳，5%。温【wēn】度：37摄氏度，培【péi】养【yǎng】箱湿度为70%-80%。
3.冻存【cún】液：90%*培养基，10%DMSO,现用现配。液氮储存。
 
2)细胞处理：
复苏细胞：将含有【yǒu】lmL细胞悬液的冻存管在37°C水【shuǐ】浴【yù】中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均【jun1】匀。在【zài】1000RPM条件【jiàn】下离心4分钟，弃去上清【qīng】液【yè】，补加l-2mL培养基后吹匀。然后将【jiāng】所有细胞【bāo】悬液加【jiā】入培养【yǎng】瓶【píng】中培养【yǎng】过夜（或将细【xì】胞悬液【yè】加【jiā】入【rù】l〇cm皿中，加【jiā】入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检 查细胞【bāo】密度。
细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
 
人巨核细胞白血病细胞 (Dami)对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞【bāo】9-23次。力【lì】口2m丨【shù】消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于【yú】培【péi】养瓶【píng】中，置于37°C培养【yǎng】箱【xiāng】中【zhōng】消化9-23分【fèn】钟，然后在显微镜下观察【chá】细胞【bāo】消化情【qíng】况，若细胞大部 分变圆【yuán】并脱落，迅速【sù】拿回操作【zuò】台，轻敲几【jǐ】下培养【yǎng】瓶【píng】后加少量培养基终止【zhǐ】消化。按6-8ml/瓶补加【jiā】培养基【jī】，轻【qīng】轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟【zhōng】，弃去【qù】上清液，补加【jiā】l-2mL培养液后吹匀。将细胞悬液按【àn】1: 2到1: 5的比例分到新的【de】含8ml培养基的【de】新皿中或者瓶中。
 
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM条件下【xià】离心4分【fèn】钟，弃【qì】去上清液【yè】，补加l-2mL培养液【yè】后吹【chuī】匀，将细胞悬液按1: 2到1: 5的【de】比例分到新的含8ml培【péi】养基的新皿中或者瓶中。
方法二：可选【xuǎn】择半数换液方式，弃去半数【shù】培养基【jī】后，将剩【shèng】余细【xì】胞悬起，将细胞悬液【yè】按1: 2到1: 3的比例分到新的【de】含8ml培养基【jī】的新【xīn】皿中或者【zhě】瓶中。
细【xì】胞【bāo】冻存：待细【xì】胞生长状态良好时，可【kě】进行细胞冻存【cún】。贴壁细胞冻存时，弃【qì】去培养【yǎng】基后加入少量【liàng】胰酶【méi】，细胞变圆脱落后，加入约lml含血清的培养基【jī】后【hòu】加【jiā】入冻存管中【zhōng】，再添加1〇%DMSO后进行冻【dòng】存。悬浮细胞【bāo】冻存【cún】时，应【yīng】将细胞【bāo】收集，1000RPM条件【jiàn】下离心4分钟，少量【liàng】保存上【shàng】清液【yè】（防止细胞吸走)，加入部分新鲜培养基【jī】，加入【rù】到冻存管【guǎn】中【zhōng】，在冻存管中加【jiā】入1〇%DMSO后进行冻存。
 
注意事项：
收【shōu】到细胞后【hòu】，若发【fā】现干冰己挥发干净、冻存管瓶盖脱落【luò】、破损及细胞有污【wū】染【rǎn】，请立即与我们电联。
所有动【dòng】物细胞均视为有潜在的【de】生物危【wēi】害性，必须在二级【jí】生物安【ān】全【quán】台内操作，并请注意防【fáng】护【hù】，所有废液及【jí】接【jiē】触过此细胞【bāo】的器皿需要灭菌后方能【néng】丢弃。
 
人巨核细胞白血病细胞 (Dami)细胞特性：
1)来源：巨核细胞白血病
2)形态：巨核细胞
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
运【yùn】输和保【bǎo】存：可选择干冰运输及【jí】发送【sòng】复苏存活细胞方式：（1)干冰运输【shū】，收到后立即【jí】转入液氮冻【dòng】存或【huò】直接复【fù】苏；（2)存活细【xì】胞，收到后【hòu】应继续生长【zhǎng】，传代达到细胞生长状态良好时【shí】，再进行冻存。具体操作见【jiàn】细胞培【péi】养步骤。
细胞用途：仅供使用。