加利福利亚脑炎病毒PCR检测试剂盒

产品介绍：

产品名称：加利福利亚脑炎病毒PCR检测试剂盒

英【yīng】文名称：California Encephalitis VirusRTPCR

准备物品：

清【qīng】理液（A）                                   毫升【shēng】

染色液（t B）                                 微【wēi】升【shēng】

稀释液（C）                                   毫升【shēng】

溶解液（tD）                                  毫升【shēng】

产品说【shuō】明【míng】书                                     1份

注意事项：

1．基础程序；

2．扩增温度和延伸温度；

3．反应时间；

4．循环次数；

5．PCR 反应液的配制；

6．PCR技术的基本原理；

7．PCR的反应动力学；

8．PCR扩增产物；

9．PCR反应体系与反应条件。

反应五要素：

参加PCR反应【yīng】的物质【zhì】主要有五【wǔ】种即引物、酶、dNTP、模板【bǎn】和Mg2+

引物：引物是PCR特异性反应的关键，加利福利亚脑炎病毒PCR检测试剂盒PCR 产物的特异性【xìng】取决于引【yǐn】物与【yǔ】模板DNA互补【bǔ】的程度。理【lǐ】论上，只要知【zhī】道任何一段【duàn】模板DNA序列， 就能按其设计互补的【de】寡核【hé】苷【gān】酸【suān】链做引【yǐn】物【wù】，利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计【jì】引【yǐn】物应遵循以下原则：

①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。

②引物扩增跨【kuà】度： 以200-500bp为宜，特【tè】定条件下可【kě】扩增【zēng】长至10kb的片【piàn】段【duàn】。

③引物【wù】碱基：G+C含【hán】量以【yǐ】9-21%为宜【yí】，G+C太少【shǎo】扩增效果不佳，G+C过多易出现【xiàn】非特异条带。ATGC*随机分布【bù】，避免【miǎn】5个【gè】以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列【liè】。

④避免引【yǐn】物【wù】内部出现二级结构，避【bì】免两条引物间互补，特别是3'端的互补，否【fǒu】则会形成引物【wù】二聚体，产生【shēng】非特异【yì】的【de】扩增条带。

⑤引物3'端的碱基【jī】，特别是末【mò】及倒【dǎo】数第二个【gè】碱基，应严格要【yào】求配【pèi】对，以避免因末【mò】端碱基不配对而导致【zhì】PCR失败。

⑥引物中有或【huò】能【néng】加上【shàng】合适【shì】的酶【méi】切位点， 被扩增的靶序列【liè】*有适宜的酶切位点【diǎn】， 这对酶切【qiē】分析或分子克隆很有好处【chù】。

⑦引物的【de】特【tè】异性：引物【wù】应与核【hé】酸序列数【shù】据库【kù】的其它序列无明显同源性。

引物量：每条引物的浓【nóng】度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量产生【shēng】所需【xū】要的结果为好，引物浓【nóng】度偏【piān】高会引起错【cuò】配和【hé】非特【tè】异性扩增【zēng】，且可增【zēng】加引物之间形成二【èr】聚体的机会。