加州立克次体PCR检测试剂盒

产品介绍：

产品名称：加州立克次体PCR检测试剂盒

英文名称：Ajellomyces capsulate PCR

准备物品：

清理【lǐ】液（A）                                   毫升

染色液（t B）                                 微升

稀释液（C）                                   毫【háo】升

溶解液（tD）                                  毫【háo】升

产品说明【míng】书                                     1份【fèn】

注意事项：

1．基础程序；

2．扩增温度和延伸温度；

3．反应时间；

4．循环次数；

5．PCR 反应液的配制；

6．PCR技术的基本原理；

7．PCR的反应动力学；

8．PCR扩增产物；

9．PCR反应体系与反应条件。

反应五要素：

参加PCR反应的物质主【zhǔ】要有五【wǔ】种即引【yǐn】物、酶、dNTP、模板和【hé】Mg2+

引物：引物是PCR特异性反应的关键，加州立克次体PCR检测试剂盒PCR 产物的【de】特异性取决于【yú】引物与【yǔ】模板DNA互【hù】补的程度【dù】。理【lǐ】论上，只【zhī】要知道任何一段【duàn】模板DNA序列， 就【jiù】能按【àn】其设计【jì】互补的寡核苷酸链做引物，利用PCR就可将模【mó】板DNA在体外大量【liàng】扩增。设计引物应遵循以下原则：

①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。

②引物扩【kuò】增跨度： 以【yǐ】200-500bp为宜，特定条件下可扩增长至10kb的【de】片段。

③引物碱基：G+C含量以9-21%为【wéi】宜，G+C太少扩【kuò】增效【xiào】果【guǒ】不【bú】佳，G+C过多易出【chū】现非特异条带。ATGC*随【suí】机分布【bù】，避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷【gān】酸的【de】成串排列。

④避免引物内【nèi】部出现【xiàn】二【èr】级结构，避免两【liǎng】条引物间【jiān】互补【bǔ】，特别是3'端的互补，否则会形成【chéng】引物二聚体【tǐ】，产【chǎn】生非特异的扩增条带。

⑤引物3'端的碱基，特别【bié】是末及倒数第二个碱基【jī】，应【yīng】严格【gé】要求配对，以避免因末端碱基【jī】不配对而导致【zhì】PCR失败【bài】。

⑥引物中有或能【néng】加上合【hé】适的酶切位【wèi】点， 被扩增的靶序列【liè】*有适宜的酶切位点， 这【zhè】对酶切分析或【huò】分【fèn】子【zǐ】克隆很有好【hǎo】处。

⑦引物的特异性：引物应与核酸【suān】序列数据【jù】库【kù】的其它序【xù】列无明显同【tóng】源性。

引物量：每条引物的浓度0.1～1umol或10～100pmol，以【yǐ】*引物量产生所【suǒ】需要的【de】结【jié】果为好【hǎo】，引物浓度偏【piān】高会引【yǐn】起错配和非特异性扩增，且可增加【jiā】引物【wù】之间形成【chéng】二聚体的机会。