假结核棒杆菌PCR检测试剂盒

产品介绍：

产品名称：假结核棒杆菌PCR检测试剂盒

英文【wén】名称：Corynebacterium pseudotuberculosisPCR

准备物品：

清【qīng】理液（A）                                   毫升

染色液（t B）                                 微升【shēng】

稀释液（C）                                   毫【háo】升

溶【róng】解液（tD）                                  毫升

产【chǎn】品说明书                                     1份【fèn】

注意事项：

1．基础程序；

2．扩增温度和延伸温度；

3．反应时间；

4．循环次数；

5．PCR 反应液的配制；

6．PCR技术的基本原理；

7．PCR的反应动力学；

8．PCR扩增产物；

9．PCR反应体系与反应条件。

反应五要素：

参加【jiā】PCR反应的物质主要有【yǒu】五种即引物、酶【méi】、dNTP、模板【bǎn】和Mg2+

引物：引物是PCR特异性反应的关键，假结核棒杆菌PCR检测试剂盒PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补【bǔ】的程【chéng】度。理【lǐ】论上，只要【yào】知【zhī】道任何一段模板DNA序【xù】列， 就【jiù】能按其设计互补的寡核苷酸链做引物，利用PCR就【jiù】可将【jiāng】模板【bǎn】DNA在体外大【dà】量扩增【zēng】。设计引物应遵循【xún】以下原则：

①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。

②引物【wù】扩增跨度： 以200-500bp为【wéi】宜，特定【dìng】条件下可扩增长至10kb的片段【duàn】。

③引物碱基：G+C含量以9-21%为宜，G+C太少扩【kuò】增效【xiào】果【guǒ】不【bú】佳【jiā】，G+C过多易出现【xiàn】非【fēi】特异条带。ATGC*随机分布，避免5个以上【shàng】的嘌【piào】呤或嘧【mì】啶核【hé】苷酸的成串排列。

④避免引【yǐn】物内部出现二级结构【gòu】，避【bì】免两条引物间互【hù】补，特别是3'端的互补，否【fǒu】则会形成引【yǐn】物二聚体，产生非特【tè】异的【de】扩增条【tiáo】带。

⑤引【yǐn】物3'端的碱基，特【tè】别是末及倒数【shù】第二个【gè】碱基，应严格要求配对，以避免【miǎn】因末端碱【jiǎn】基不【bú】配对【duì】而导致PCR失【shī】败。

⑥引物中有或能【néng】加上合【hé】适【shì】的酶切位点， 被扩增的靶序列*有适宜【yí】的酶切位【wèi】点， 这【zhè】对酶【méi】切分析或分子克【kè】隆很【hěn】有好【hǎo】处。

⑦引物的特异性：引【yǐn】物应与核【hé】酸【suān】序列【liè】数据库的【de】其它序列无明显同源性。

引物量：每条【tiáo】引物【wù】的浓度0.1～1umol或10～100pmol，以*引【yǐn】物量【liàng】产生【shēng】所需【xū】要【yào】的结果为好，引【yǐn】物浓度【dù】偏高会引起错【cuò】配和非特异性扩【kuò】增【zēng】，且可增加引物之间形成二聚体的机会。