小鼠膀胱癌细胞 （MB49）

小鼠膀胱癌细胞 (MB49)
细胞特性
1)来源：小鼠膀胱癌
2)形态：上皮细胞样
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
运输【shū】和保存：使用含有胎牛【niú】血清【qīng】的2ml冻存管【guǎn】发【fā】送存活细胞【bāo】。收到细胞后，可在【zài】1000RPM，常温【wēn】条件下，离心5min后【hòu】，于洁净操作台【tái】弃去上清，加入推荐使用的培养基后转移至l〇cm培养皿或者T25培养【yǎng】瓶中培养【yǎng】，传【chuán】代【dài】达到细胞生长状态【tài】良好时，再进行冻存。具体【tǐ】操作见【jiàn】细胞培养步【bù】骤。
细胞用途：仅供使用。
 
小鼠膀胱癌细胞 (MB49)细胞培养步骤
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准备RPIVM-1640 培养【yǎng】基【jī】(RPMI-1640:GIBCO)，90%;胎牛
血清，10%。
2.培养条件：气相：空气，95%;二【èr】氧【yǎng】化【huà】碳【tàn】，5%。温度：37摄【shè】氏度，培养【yǎng】箱湿度为70%-80%。
3.冻存液【yè】：90%*培养基【jī】，10%DMSO,现用现配。液氮储存。
2)细胞处理：
复苏细胞：将含有lmL细胞悬液【yè】的冻存管在37°C水浴中迅速【sù】摇【yáo】晃解【jiě】冻，加入4mL培养基混合【hé】均匀。在1000RPM条件【jiàn】下离【lí】心【xīn】4分钟，弃去上清液【yè】，补 加l-2mL培养基后吹【chuī】匀【yún】。然后【hòu】将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬【xuán】液加入l〇cm皿中【zhōng】，加入约8ml培养基，培养过【guò】夜）。第【dì】二天换【huàn】液并检 查细【xì】胞【bāo】密度。
细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
 
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞9-23次。
力口2m丨消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培【péi】养瓶中，置于37°C培养箱中消化9-23分钟，然【rán】后在显微【wēi】镜下观【guān】察【chá】细胞消化情况，若细胞大部【bù】分变圆并【bìng】脱落，迅速拿回操【cāo】作台，轻敲【qiāo】几下培养瓶【píng】后加少【shǎo】量【liàng】培养【yǎng】基终止消化【huà】。
按6-8ml/瓶补加培【péi】养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加l-2mL培【péi】养【yǎng】液【yè】后吹【chuī】匀。
将细胞悬液按1: 2到【dào】1: 5的比例分到【dào】新的含8ml培【péi】养基的【de】新皿中或者 瓶中。
 
细胞冻存：待细【xì】胞生长状态良【liáng】好时，可进行细【xì】胞【bāo】冻存。贴壁细胞【bāo】冻存【cún】时【shí】，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆【yuán】脱落后，加【jiā】入【rù】约lml含血清的培养基后加入冻存【cún】管中【zhōng】，再添加1〇%DMSO后进行冻存。
 
小鼠膀胱癌细胞 (MB49)注意事项：
收到【dào】细胞后，若发现【xiàn】干冰己【jǐ】挥发【fā】干净、冻【dòng】存管瓶盖脱落、破【pò】损及【jí】细胞有污染，请立即与我们【men】电联。
所有动物【wù】细胞【bāo】均视为有潜在的生物危害性，必须【xū】在二级生物安全【quán】台内操作，并请注意防护，所【suǒ】有【yǒu】废液及接触过【guò】此【cǐ】细胞的【de】器皿需要灭菌后方【fāng】能【néng】丢弃【qì】。