小鼠成纤维细胞 （L-929）

小鼠成纤维细胞 (L-929)
细胞介绍
1948年三月建立【lì】了NCTCclone929(小鼠【shǔ】结缔组织)，细胞【bāo】系L的克隆。细胞系L是早建立的连【lián】续培【péi】养细胞系之一，而clone929是早的克隆株【zhū】。从一只100日龄【líng】的【de】雄性C3H/An小【xiǎo】鼠的正常皮下疏松【sōng】结【jié】缔组织入脂肪组织中建立了亲【qīn】本细胞系L。第95代的细胞系L使【shǐ】用毛【máo】细管法【fǎ】分离单细胞【bāo】建立了 clone929。检测发现 鼠痘病毒【dú】阴性。
 
细胞特性
1)来源：组织：皮下结缔组【zǔ】织【zhī】；疏松【sōng】结【jié】缔组【zǔ】织及脂肪品系：C3H/An
2)形态：成纤维细胞
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
运输和保存：可选择【zé】干冰【bīng】运输及发送复【fù】苏【sū】存【cún】活细胞方式：（1)干冰运输，收到后立即转入液氮冻【dòng】存或直接【jiē】复【fù】苏；（2)存活细胞，收【shōu】到后应继续生长，传【chuán】代【dài】达到细【xì】胞生长【zhǎng】状态良好【hǎo】时，再进行冻【dòng】存。具体操【cāo】作见细胞培养步骤。
细胞用途：仅供使用。
 
小鼠成纤维细胞 (L-929)细胞培养步骤
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准备MEM培养【yǎng】基(MEM:GIBC0)，90%;马血【xuè】清(GIBC0,货 号【hào】 16050-122)，10%。
2.培养【yǎng】条件【jiàn】：气相【xiàng】：空气，95%;二氧【yǎng】化碳，5%。温度：37摄氏度，培【péi】养箱 湿度为70%-80%。
3. 冻存液：90%*培养【yǎng】基，10%DMSO,现用现【xiàn】配。液氮储存。
2)细胞处理：
复苏细胞：将含有lmL细胞【bāo】悬液的冻存管在37°C水浴中迅速摇晃【huǎng】解冻，加【jiā】入4mL培养【yǎng】基【jī】混合均【jun1】匀【yún】。在1000RPM条件下离心【xīn】4分钟【zhōng】，弃去上清液，补加【jiā】l-2mL培【péi】养基后吹匀。然后【hòu】将所有细胞悬液【yè】加入【rù】培养【yǎng】瓶中培【péi】养过夜（或将细胞悬【xuán】液加入【rù】l〇cm皿中，加入约8ml培养基【jī】，培【péi】养过夜）。第二天换【huàn】液并检 查细胞密度。
细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
 
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞9-23次。
力口2m丨消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶中，置于37°C培养箱【xiāng】中【zhōng】消化9-23分钟，然【rán】后在【zài】显微镜【jìng】下观察细【xì】胞消化情【qíng】况，若细胞【bāo】大部分变圆并【bìng】脱落，迅速拿回操作台，轻敲【qiāo】几下培养瓶后加少【shǎo】量【liàng】培养【yǎng】基终止消化【huà】。
按6-8ml/瓶补【bǔ】加【jiā】培养基，轻【qīng】轻打匀后吸出，在【zài】1000RPM条件下【xià】离心4分钟，弃去上清液，补【bǔ】加l-2mL培养【yǎng】液后吹匀。
将细胞悬液按【àn】1: 2到1: 5的比例分到【dào】新的含【hán】8ml培养基的新皿中或【huò】者瓶中。
 
细【xì】胞冻存【cún】：待细胞生【shēng】长状【zhuàng】态良【liáng】好时，可进行细胞冻存。贴【tiē】壁【bì】细胞【bāo】冻存时【shí】，弃去培养基后加入少【shǎo】量胰酶，细【xì】胞变圆脱落后【hòu】，加入约【yuē】lml含【hán】血清的【de】培养基后加入冻存管中，再添加1〇%DMSO后进行冻存【cún】。
 
小鼠成纤维细胞 (L-929)注意事项：
收到细胞后，若发【fā】现干冰己挥发干净【jìng】、冻存【cún】管瓶盖脱落、破损及细胞有【yǒu】污染，请立即【jí】与【yǔ】我【wǒ】们电联。
所有动物细胞均视【shì】为有潜在的【de】生物危害性，必须在【zài】二级生【shēng】物安全台【tái】内操作，并【bìng】请【qǐng】注【zhù】意防护【hù】，所【suǒ】有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。