小鼠单核巨噬细胞（J774A.1）

小鼠单核巨噬细胞(J774A.1)
细胞介绍
该【gāi】细【xì】胞来源于BABL/cN小鼠，有抗体依赖的吞噬作用【yòng】，生长【zhǎng】受硫酸葡聚糖、PPD和LPS的【de】抑制；可产【chǎn】生IL-1(3和大量的溶【róng】菌酶【méi】。
 
细胞特性
1)来源：BABL/cN小鼠淋巴
2)形态：单核细胞/巨噬细胞样
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
运输和保存：可选择【zé】干冰【bīng】运输及发送复【fù】苏存活细胞方式：（1)干冰运输，收到后立【lì】即【jí】转【zhuǎn】入液氮【dàn】冻存或直接复苏；（2)存【cún】活细胞，收到后【hòu】应继续【xù】生长，传代【dài】达【dá】到细胞【bāo】生【shēng】长状态良好【hǎo】时，再进行冻存。具体操作【zuò】见细胞培【péi】养步骤。
细胞用途：仅供使用。
 
细胞培养步骤
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准备DMEM培【péi】养基(DMEM，GIBCO);北美胎【tāi】牛血清(United States，GIBCO，货【huò】号 16000-044)，10%;双【shuāng】抗1%。
2. 培养条件：气相：空气，95%;二氧【yǎng】化碳，5%。温度：37摄【shè】氏度，培养【yǎng】箱【xiāng】 湿度为【wéi】70%-80%。
3.冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
2)细胞处理：
1.复【fù】苏【sū】细胞：将含有lmL细胞悬液的【de】冻存管在37°C水浴中迅速摇晃【huǎng】解冻，加入4mL培养【yǎng】基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟【zhōng】，弃【qì】去【qù】上清液【yè】，补【bǔ】加l-2mL培养【yǎng】基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入【rù】培养瓶中培【péi】养过夜（或将 细胞【bāo】悬液【yè】加入【rù】l〇cm皿【mǐn】中【zhōng】，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液【yè】并【bìng】检 查【chá】细胞密度。
2.细胞传代：如果细胞【bāo】密【mì】度【dù】达80%-90%，即可进行传代培养。
 
小鼠单核巨噬细胞(J774A.1)对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞9-23次。
力【lì】口 2m丨消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于【yú】培养瓶中，置于37°C培【péi】
养箱中消【xiāo】化9-23分钟【zhōng】，然后在显微镜下观察细胞消化【huà】情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回【huí】操作台，轻敲几下培养瓶【píng】后加【jiā】少量【liàng】培【péi】养【yǎng】基终止消化。
按6-8ml/瓶【píng】补加培【péi】养基，轻轻打【dǎ】匀后吸出【chū】，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补【bǔ】加l-2mL培养液后【hòu】吹匀【yún】。
将细【xì】胞悬液按1: 2到1: 5的比【bǐ】例分到新的含8ml培养基的【de】新皿中【zhōng】或【huò】者
3.细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。
 
下面T25瓶为例；
细胞冻存时，弃去培养基【jī】后，PBS清洗瓶【píng】底9-23次后加入lml胰【yí】酶，细胞变圆【yuán】脱落后，加【jiā】入2ml*培【péi】养基终【zhōng】止【zhǐ】消【xiāo】化，可使用血球计【jì】数板【bǎn】计数。
1000RPM离心5分钟去掉上清。用血清重悬浮，加【jiā】DMSO至终浓【nóng】度【dù】为【wéi】10%。加入【rù】DMSO后迅速混匀，按每lml的数量分配到冻【dòng】存管中【zhōng】，注【zhù】意【yì】冻存管做好【hǎo】标识。本公司按每个冻【dòng】存管【guǎn】细胞数目大于【yú】1X106个细【xì】胞冻存。
将冻存管置于【yú】程序【xù】降温盒中，放入【rù】-80度冰箱，至少2个小【xiǎo】时以后转入液氮灌储存。记录【lù】冻存管【guǎn】位置【zhì】以便下次【cì】拿取。
 
小鼠单核巨噬细胞(J774A.1)注意事项：
收到细胞【bāo】后，若发现干冰己【jǐ】挥发干净、冻存管瓶盖脱【tuō】落、破【pò】损及细【xì】胞有污【wū】染，请立即【jí】与我们电联。
所有【yǒu】动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级【jí】生物安【ān】全【quán】台内操作，并请注意防护，所有废液及接【jiē】触过此细【xì】胞的器皿【mǐn】需【xū】要灭菌【jun1】后方【fāng】能【néng】丢弃【qì】瓶中。