小鼠结肠癌细胞（MC-38）

小鼠结肠癌细胞(MC-38)
细胞特性
1)来源：结肠癌
2)形态：上皮细胞样
3)含量：>lxl06个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
运【yùn】输和保存：使用含有胎牛血清的2ml冻存管发送存活细胞。收到细胞【bāo】后，可【kě】在1000RPM，常温条件下，离心5min后，于洁净操作台弃【qì】去上【shàng】清【qīng】，加【jiā】入推荐使用的培养基后转移至l〇cm培养皿【mǐn】或者T75培养【yǎng】瓶【píng】中培养【yǎng】，传【chuán】代达【dá】到【dào】细胞生长状【zhuàng】态【tài】良好时，再进【jìn】行冻存。具体操【cāo】作见细胞培【péi】养步骤。
细胞用途：仅供使用。
 
细胞培养步骤
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准备【bèi】 DMEM 培养基(DMEM，GIBCO)，90%;胎牛血【xuè】清【qīng】，10%。
2.培养条件【jiàn】：气相：空气，95%;二氧化碳，5%。温度：37摄氏【shì】度，培养箱 湿度【dù】为70%-80%。
3.冻存【cún】液：90%*培养基，10%DMSO,现用现【xiàn】配。液氮【dàn】储存。
 
2)细胞处理：
复【fù】苏【sū】细【xì】胞：将含有lmL细胞【bāo】悬液的冻存管在37°C水【shuǐ】浴【yù】中迅速摇晃【huǎng】解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下【xià】离【lí】心4分钟，弃【qì】去上清液，补加l-2mL培养【yǎng】基后吹匀。然【rán】后将所【suǒ】有细胞悬液加【jiā】入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬【xuán】液【yè】加入l〇cm皿中，加入约【yuē】8ml培养基，培养【yǎng】过夜）。第二天换液并【bìng】检 查细胞密度【dù】。
细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
 
小鼠结肠癌细胞(MC-38)对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞9-23次。
力口2m丨消化液【yè】（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶中【zhōng】，置【zhì】于37°C培
养箱中消化9-23分钟，然后在显【xiǎn】微镜下观察细【xì】胞【bāo】消化情况【kuàng】，若细胞【bāo】大部 分【fèn】变圆并脱落，迅速拿【ná】回操【cāo】作台，轻【qīng】敲几下培养瓶后加少量培养基终【zhōng】止消化。
按6-8ml/瓶补【bǔ】加培养基，轻轻打匀后吸出【chū】，在1000RPM条件下【xià】离【lí】心【xīn】4分钟，弃去上清【qīng】液，补加l-2mL培养液【yè】后吹匀。
将细胞悬液按1: 2到1: 5的【de】比【bǐ】例【lì】分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
 
细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行【háng】细胞冻存。贴壁【bì】细胞【bāo】冻存时【shí】，弃去【qù】培养基后加入少量胰【yí】酶，细【xì】胞变【biàn】圆脱落【luò】后，加入约lml含血【xuè】清的培养基【jī】后加入冻存管中，再添加1〇%DMSO后进行冻存。
 
小鼠结肠癌细胞(MC-38)注意事项：
收【shōu】到【dào】细胞【bāo】后，若发现干冰己【jǐ】挥发干净、冻存管瓶盖脱【tuō】落、破损及细胞【bāo】有污染，请立即与【yǔ】我【wǒ】们电联。
所有动物细胞均视为有【yǒu】潜在的【de】生物危害性，必【bì】须在【zài】二【èr】级【jí】生物安【ān】全台内操作，并请注意防护，所有废液及【jí】接触过此细胞的器皿需要【yào】灭菌后【hòu】方能丢【diū】弃。