鸡胚致死孤儿病毒PCR检测试剂盒

产品介绍：

产品名称：鸡胚致死孤儿病毒PCR检测试剂盒

英文【wén】名称【chēng】：Chicken Embro Lethal Orphan Virus(CELOV)PCR

准备物品：

清【qīng】理液（A）                                   毫升

染色液（t B）                                 微升

稀【xī】释液（C）                                   毫【háo】升

溶【róng】解液（tD）                                  毫升【shēng】

产品说【shuō】明书                                     1份【fèn】

注意事项：

1．基础程序；

2．扩增温度和延伸温度；

3．反应时间；

4．循环次数；

5．PCR 反应液的配制；

6．PCR技术的基本原理；

7．PCR的反应动力学；

8．PCR扩增产物；

9．PCR反应体系与反应条件。

反应五要素：

参加PCR反应【yīng】的物质主要有五种【zhǒng】即引物、酶、dNTP、模【mó】板【bǎn】和Mg2+

引物：引物是PCR特异性反应的关键，鸡胚致死孤儿病毒PCR检测试剂盒PCR 产物的特异性取决于引物与模【mó】板DNA互补的程【chéng】度【dù】。理【lǐ】论上，只要知【zhī】道【dào】任何一段模板DNA序列， 就【jiù】能按其设计互补的寡【guǎ】核苷酸链做【zuò】引物，利【lì】用【yòng】PCR就可将【jiāng】模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵【zūn】循以下原【yuán】则：

①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。

②引物扩【kuò】增跨度【dù】： 以200-500bp为宜，特【tè】定条件下可扩【kuò】增长至10kb的【de】片段。

③引物碱基【jī】：G+C含量以【yǐ】9-22%为宜，G+C太少扩增效果不佳，G+C过多易出现非特异条带。ATGC*随机分【fèn】布【bù】，避免5个【gè】以上的【de】嘌呤或【huò】嘧啶核苷酸的成串排【pái】列【liè】。

④避【bì】免【miǎn】引物内部出现二【èr】级结构，避免两条引【yǐn】物间【jiān】互补，特别是3'端的互补，否则会形成引物二聚【jù】体，产生非特异的扩增【zēng】条带【dài】。

⑤引物3'端【duān】的碱基【jī】，特别是【shì】末及倒【dǎo】数第二个碱基【jī】，应【yīng】严格要求配对，以避免因末端【duān】碱基不配对而导致PCR失【shī】败【bài】。

⑥引物中有【yǒu】或能加上合适的【de】酶切位点， 被【bèi】扩增【zēng】的靶序列*有适宜的酶切位点， 这对【duì】酶切分析或分【fèn】子【zǐ】克【kè】隆很【hěn】有好处【chù】。

⑦引物的【de】特异性：引物应与【yǔ】核酸序【xù】列数【shù】据库的其它序列无明显同源【yuán】性【xìng】。

引物【wù】量：每条引物【wù】的浓度【dù】0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量【liàng】产生所需【xū】要【yào】的【de】结果为好，引物浓度偏【piān】高会【huì】引起错配【pèi】和非特异性【xìng】扩增【zēng】，且可增加引物之间形成二聚【jù】体的机会。