小鼠脑微血管内皮细胞（bEnd.3）

小鼠脑微血管内皮细胞(bEnd.3)
细胞介绍
细胞转染了表达多瘤病毒中T抗原的NTKmT逆转录病毒载体。
 
细胞特性
1)来源：BALB/c小鼠脑
2)形态：内皮细胞样
3)含量：>lxl06个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
运输和保【bǎo】存：使【shǐ】用含【hán】有胎牛血清的2ml冻【dòng】存管发送存活【huó】细胞。收到细胞后，可在【zài】1000RPM，常温条件下，离心5min后，于【yú】洁净操作【zuò】台【tái】弃去上清，加【jiā】入推荐使用的培养基后转移至l〇cm培【péi】养皿或者【zhě】T25培养【yǎng】瓶中培【péi】养，传代达到细胞生长状态良好【hǎo】时，再进行冻存。具体操作见细胞培【péi】养步【bù】骤。
细胞用途：仅供使用。
 
小鼠脑微血管内皮细胞(bEnd.3)细胞培养步骤
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准【zhǔn】备DMEM培【péi】养基(DMEM，GIBCO)，90%;胎【tāi】牛血清，10%。
2.培养条件【jiàn】：气相：空气，95%;二氧【yǎng】化碳，5%。温度：37摄氏度，培养【yǎng】箱 湿【shī】度为70%-80%。
3.冻存液：90%*培养【yǎng】基，10%DMSO,现用现配。液【yè】氮储【chǔ】存。
2)细胞处理：
 
复苏细胞：将含有lmL细胞悬液【yè】的冻存管【guǎn】在37°C水浴中迅速摇晃解冻，加 入4mL培养基混合【hé】均【jun1】匀。在1000RPM条件下离心【xīn】4分【fèn】钟，弃去上清液，补加l-2mL培【péi】养基后吹匀。然后将所【suǒ】有细胞悬【xuán】液加入培养瓶【píng】中培养过【guò】夜（或将细胞【bāo】悬液【yè】加入l〇cm皿【mǐn】中，加入约【yuē】8ml培养基，培【péi】养过夜）。第【dì】二天换【huàn】液并检 查细【xì】胞密度。
细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
 
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞9-22次。
力【lì】口2m丨消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶中，置于37°C培养箱【xiāng】中消【xiāo】化9-22分钟，然后在显微【wēi】镜下观察细胞消化情况，若细【xì】胞【bāo】大部分变圆并【bìng】脱落【luò】，迅速拿回【huí】操作台，轻敲几下【xià】培养瓶后加少【shǎo】量培养基终【zhōng】止【zhǐ】消化。
按6-8ml/瓶【píng】补【bǔ】加培养基，轻轻打匀后吸【xī】出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上【shàng】清【qīng】液，补【bǔ】加【jiā】l-2mL培养液后吹匀。
将细胞悬液按1: 2到【dào】1: 5的比例【lì】分到新的含【hán】8ml培【péi】养基的【de】新皿中或者瓶中。
细胞冻【dòng】存：待细胞生长状态良【liáng】好时，可【kě】进行细胞冻【dòng】存。贴壁细胞冻存【cún】时，弃 去培养【yǎng】基后加入少量【liàng】胰酶，细胞变圆【yuán】脱落后，加入约lml含【hán】血清【qīng】的培养基后加【jiā】入冻存【cún】管中，再【zài】添加1〇%DMSO后进行冻存。
 
小鼠脑微血管内皮细胞(bEnd.3)注意事项：
收到细胞后【hòu】，若发现干冰己挥发【fā】干净、冻存管瓶【píng】盖脱落、破损及细胞【bāo】有污染，请立即【jí】与我【wǒ】们电联。
所【suǒ】有动【dòng】物细胞均视为有潜在的【de】生物危害性，必须在【zài】二级生物安全台【tái】内操作，并请注意防护，所有废液及【jí】接触过此细胞的【de】器【qì】皿需【xū】要【yào】灭【miè】菌【jun1】后方能丢弃。