小鼠黑色素瘤细胞（B16）

小鼠黑色素瘤细胞(B16)
细胞特性
1)来源：小鼠黑色素瘤
2)形态：成纤维细胞样，贴壁生长
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
运输和保存【cún】：使用T25瓶充【chōng】液发送活细胞。收到细胞后【hòu】，请先在【zài】显【xiǎn】微镜下检查细胞【bāo】生长状态，并将【jiāng】T25瓶置于培养箱约【yuē】6h或过【guò】夜后，再次检查【chá】细胞状【zhuàng】态。若状态良好，可按照以下细【xì】胞培养步骤进行细胞【bāo】后续处理操作。若发【fā】现可疑污染【rǎn】物，请【qǐng】及时与我们【men】取得电联【lián】。
细胞用途：仅供使用。
 
小鼠黑色素瘤细胞(B16)细胞培养步骤
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准备RPIVM-1640培养【yǎng】基(RPIVM-1640:GIBCO,添加 NaHC031.5g八, D-葡萄糖2.5g八，丙酮酸钠O.llg八)，90%;胎【tāi】牛血清，10%。
2. 培养条【tiáo】件：气相：空气，95%;二氧【yǎng】化碳，5%。温【wēn】度：37摄氏度【dù】，培养箱【xiāng】 湿度为70%-80%。
3.冻存【cún】液：90%*培【péi】养基，10%DMSO,现【xiàn】用现配。液氮储存。
2)细胞处理：
复苏【sū】细胞：将【jiāng】含有【yǒu】lmL细胞悬液【yè】的冻存管在37°C水浴中迅速摇晃解冻，加 入4mL培养基【jī】混合【hé】均匀。在1000RPM条件下离心4分【fèn】钟，弃【qì】去上清液【yè】，补 加l-2mL培【péi】养基【jī】后吹匀。然后将所有细【xì】胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将 细胞悬液加【jiā】入l〇cm皿【mǐn】中，加入约8ml培养基【jī】，培养过【guò】夜）。第【dì】二天换液并检 查细【xì】胞密【mì】度。
 
细胞传代：
如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞9-24次。
力口 2m丨消化液【yè】（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培【péi】养瓶中，置于37°C培【péi】
养【yǎng】箱【xiāng】中消化9-24分【fèn】钟，然【rán】后在显【xiǎn】微镜下观察细【xì】胞消化情况，若细【xì】胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻【qīng】敲几【jǐ】下培【péi】养【yǎng】瓶后加少量培养基终止【zhǐ】 消化。按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件【jiàn】下离心4分钟【zhōng】，弃去上清液，补加【jiā】l-2mL培养液后吹匀。将细胞悬液按1: 2到1: 5的【de】比【bǐ】例分到新的含【hán】8ml培【péi】养基【jī】的新皿中【zhōng】或【huò】者瓶中。
细胞冻存：待细【xì】胞生【shēng】长状【zhuàng】态良好【hǎo】时，可进行细胞冻存。贴【tiē】壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变【biàn】圆脱落【luò】后【hòu】，加入【rù】约lml含血清的培【péi】养基后【hòu】加入冻存【cún】管中，再添【tiān】加1〇%DMSO后进行【háng】冻存。
 
小鼠黑色素瘤细胞(B16)注意事项：
收到细【xì】胞后，若发现干【gàn】冰己挥【huī】发干【gàn】净【jìng】、冻存管瓶盖脱落、破损【sǔn】及细胞【bāo】有污染【rǎn】， 请立即与我们电联。
所有动物【wù】细胞均视为有【yǒu】潜【qián】在的生物危害【hài】性【xìng】，必须在二级生物安【ān】全【quán】台【tái】内操作， 并请注意防护，所有废液及接【jiē】触过此细【xì】胞的器皿需要灭菌后【hòu】方能丢弃。