小鼠黑色素瘤细胞（B16BL6）

小鼠黑色素瘤细胞(B16BL6)
细胞特性
1)来源：小鼠，皮肤
2)形态：黑色素细胞
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
细胞接受后的处理：
1.收到细胞后，请检查是否漏液，如果漏液，请拍照片发给我们。
2.请【qǐng】先在显微镜下确【què】认细【xì】胞生长状【zhuàng】态，去掉封口膜并【bìng】将T25瓶置于【yú】37°C培养约 2-3h〇
3.弃去T25瓶中的培养基，添加6ml本公司附带的*培养基。
4.如果细【xì】胞长【zhǎng】满（90%以上）请【qǐng】及时进行细【xì】胞传代，传【chuán】代培养用6ml本公司附 带的*培【péi】养基【jī】。
5.接到细【xì】胞次日，请检查细【xì】胞是否污染，若发现污染【rǎn】或疑似污染，请及时【shí】与我【wǒ】 们【men】取得电联。
 
小鼠黑色素瘤细胞(B16BL6)细胞用途：仅供使用。
本公司的细胞培养操作规程，供参考
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准备 RPIVM-1640 培养基（RPMI-1640，GIBCO)，90%;小【xiǎo】牛血清，10%。
2.培养条件：气【qì】相：空气，95%;二氧【yǎng】化碳，5%。温度：37°C，培养箱湿度为 70%-80%。
3.冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
2)细胞处理：
复苏细胞：将【jiāng】含有lmL细胞悬液【yè】的【de】冻存管迅速放【fàng】入37°C水浴中（水【shuǐ】面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移【yí】入事先【xiān】准备好的含有4mL培养基【jī】的15ml离心管【guǎn】中混合均匀。在1000RPM条【tiáo】件【jiàn】下离心4分钟，弃【qì】去上清液，加入lmL培养基后吹匀。然【rán】后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的【de】培【péi】养【yǎng】瓶【píng】中培养过夜。第二【èr】天换液并检查细胞密度。
 
细胞传代：
如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去【qù】培养上【shàng】清，用不【bú】含钙【gài】、镁离子的PBS润洗【xǐ】细胞9-20次【cì】。力口2m丨消【xiāo】化【huà】液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶中，置于37°C培养箱中【zhōng】消化9-20分钟【zhōng】，然后【hòu】在显【xiǎn】微镜下【xià】观察【chá】细胞消【xiāo】化情况【kuàng】，若细胞大部分【fèn】变圆【yuán】并脱落，迅速拿回操作台，轻敲【qiāo】几下培【péi】养瓶后【hòu】加【jiā】入【rù】3ml此细胞的 培【péi】养基终止消化【huà】。轻轻吹打后吸出【chū】，移入15ml离心【xīn】管中，在1000RPM条件下离心4分钟【zhōng】，弃去上清液，加入lmL培养液【yè】后吹【chuī】匀。移入【rù】到【dào】事先准备好的含有5ml培【péi】养基的T-25培【péi】养瓶中或含有14ml培养 基的【de】T-75培养瓶中培养。细【xì】胞【bāo】冻存【cún】：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时，先要【yào】消化处【chù】理并【bìng】进行细胞计数。消化方法【fǎ】按照细胞【bāo】传【chuán】代【dài】方法的9-20步骤【zhòu】进行，后的【de】重悬液使【shǐ】用血清【qīng】。悬【xuán】浮细【xì】胞直接计数后离心，用血清重【chóng】悬浮，加DMSO至终浓度为10%。加入DMSO后迅速混匀【yún】，按每lml的数【shù】量分配到冻存管中。本公司按【àn】每个冻存管细胞数目大【dà】于1X106个细胞冻【dòng】存。
 
小鼠黑色素瘤细胞(B16BL6)注意事项：
收【shōu】到细胞后，若发现干冰己挥发干净、冻存管【guǎn】瓶盖脱落【luò】、破【pò】损及【jí】细胞【bāo】有污染，请立即【jí】与我【wǒ】们电联。
所有动【dòng】物细胞【bāo】均【jun1】视为【wéi】有潜在的生物危【wēi】害性，必须在【zài】二级生物安全台内操【cāo】作，并请注意【yì】防护，所有【yǒu】废液及接触过此【cǐ】细【xì】胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。