小鼠皮肤黑色素瘤细胞（B16-F10）

小鼠皮肤黑色素瘤细胞(B16-F10) 
细胞特性
1)来源：皮肤
2)形态：上皮细胞样
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
运输和保存【cún】：使用含有胎牛【niú】血清的2ml冻存管发送存活【huó】细胞。收到细胞后，可【kě】在【zài】1000RPM，常【cháng】温条件【jiàn】下，离心【xīn】5min后，于洁净操作台弃去上清，加入推荐 使用的【de】培养基【jī】后【hòu】转移至l〇cm培养皿或者T25培养【yǎng】瓶中培养【yǎng】，传代达到细【xì】胞生长 状态良好时，再进行冻存。具体操【cāo】作【zuò】见细胞培养步骤【zhòu】。
细胞用途：仅供使用。
 
小鼠皮肤黑色素瘤细胞(B16-F10)细胞培养步骤
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准备DMEM培养基(DMEM，GIBCO)，90%;北美胎牛血清 (United States，GIBCO，货【huò】号 16000-044)，10%。
2. 培养条件：气相：空【kōng】气，95%;二氧化碳，5%。温度：37摄氏度，培【péi】养箱 湿度【dù】为70%-80%。
3.冻存液【yè】：90%*培养基，10%DMSO,现用现配【pèi】。液氮储存。
2)细胞处理：复苏细【xì】胞：将含【hán】有【yǒu】lmL细胞悬液的冻存管在【zài】37°C水浴中【zhōng】迅速摇晃解冻【dòng】，加 入4mL培养【yǎng】基混合均匀。在1000RPM条件下离【lí】心4分【fèn】钟，弃去上清液，补加l-2mL培养基后吹匀。然后将所有【yǒu】细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入l〇cm皿中，加【jiā】入约【yuē】8ml培【péi】养基，培【péi】养过夜）。第二天【tiān】换液并检 查【chá】细胞【bāo】密【mì】度。
 
细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于贴壁细胞，传代可【kě】参考以下【xià】方法：弃去培【péi】养上清，用不含钙【gài】、镁离子的PBS润洗细胞9-20次【cì】。力口 2m丨消【xiāo】化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶中，置【zhì】于37°C培养箱中消化9-20分钟【zhōng】，然后【hòu】在显微镜下观察细胞消【xiāo】化情况【kuàng】，若细胞大部 分变圆【yuán】并脱落，迅【xùn】速拿【ná】回操作【zuò】台，轻敲几【jǐ】下培养瓶【píng】后加【jiā】少量培养基终止消【xiāo】化。按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离【lí】心4分【fèn】 钟，弃去【qù】上清液，补加l-2mL培养液后吹匀。将细胞【bāo】悬【xuán】液【yè】按1: 2到【dào】1: 5的比例分到新【xīn】的【de】含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
细胞冻存：待细胞生长状态良好时【shí】，可进行细胞冻存。贴【tiē】壁【bì】细胞冻【dòng】存时，弃 去培养基后加入少【shǎo】量胰酶，细胞【bāo】变圆脱落后【hòu】，加入约lml含血【xuè】清的培养基后【hòu】 加入冻存【cún】管中，再添加1〇%DMSO后【hòu】进行【háng】冻存。
 
小鼠皮肤黑色素瘤细胞(B16-F10)注意事项：
收到细胞【bāo】后，若发现干冰己挥【huī】发【fā】干净、冻【dòng】存管瓶盖脱落、破损及细胞【bāo】有污【wū】染，请立 即与我【wǒ】们电联。
所有动物细【xì】胞均【jun1】视【shì】为有潜在的生物危害性，必须在二级生物【wù】安全台内操【cāo】作【zuò】，并请【qǐng】注 意防【fáng】护，所有【yǒu】废【fèi】液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方【fāng】能丢弃。