小鼠胚胎成纤维细胞 （3T3-L1）

小鼠胚胎成纤维细胞 (3T3-L1)
细胞介绍
L1是通【tōng】过【guò】克隆分离得到的3T3(swiss小白【bái】鼠)的【de】连续亚株。当细【xì】胞从快速分裂到长满【mǎn】且【qiě】接触【chù】抑制【zhì】时【shí】，该细胞经过前脂肪向脂肪样逆转。培养液中，高血清【qīng】含量可【kě】以促进脂肪积累【lèi】。
 
细胞特性
1)来源：小鼠胚胎
2)形态：成纤维细胞
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
运【yùn】输【shū】和保【bǎo】存：使用含【hán】有【yǒu】胎牛血【xuè】清的2ml冻存管发送存活【huó】细胞。收【shōu】到细胞后，可在1000RPM，常温条件【jiàn】下【xià】，离心5min后，于洁净操作【zuò】台弃去上清，加入推荐使用的培养基后【hòu】转移至【zhì】l〇cm培养皿【mǐn】或者【zhě】T25培养瓶中培养，传代达到细胞生长状态良好时，再进【jìn】行冻存。具体【tǐ】操作见【jiàn】细胞培养【yǎng】步骤【zhòu】。
细胞用途：仅供使用。
 
小鼠胚胎成纤维细胞 (3T3-L1)细胞培养步骤
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准备【bèi】DMEM培养基(DMEM，GIBCO)，90%;北美【měi】胎牛血【xuè】清 (United States，GIBCO，货号16000-044)，10%。
2. 培养条件：气相：空气【qì】，95%;二氧化碳，5%。温度【dù】：37摄氏【shì】度，培【péi】养【yǎng】箱湿度为70%-80%。
3.冻存液：90%*培养【yǎng】基【jī】，10%DMSO,现用现【xiàn】配。液氮【dàn】储存。
2)细胞处理：
1.复苏细胞：将【jiāng】含【hán】有lmL细胞悬液的冻【dòng】存管在37°C水浴中迅速摇晃【huǎng】解冻【dòng】，加入4mL培养基【jī】混合均匀【yún】。在【zài】1000RPM条件下离心4分钟【zhōng】，弃去【qù】上【shàng】清液【yè】，补加l-2mL培【péi】养基后吹匀【yún】。然后将所有细【xì】胞悬液加【jiā】入培养瓶中培【péi】养过夜【yè】（或将细胞悬【xuán】液加入l〇cm皿中，加入【rù】约8ml培养基，培养【yǎng】过夜）。第二天换【huàn】液并检查细胞密度。
2.细【xì】胞传【chuán】代：如果细胞密度达【dá】80%-90%，即可【kě】进行传代培养。对于【yú】贴壁细胞，传代可参【cān】考以下方法：弃去培【péi】养上清【qīng】，用不含钙、镁离【lí】子的【de】PBS润洗细胞9-21次。力口【kǒu】 2m丨【shù】消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培【péi】养瓶中，置【zhì】于37°C培养箱中消化【huà】9-21分钟【zhōng】，然后在显微镜下观察细胞【bāo】消化情况，若细胞大部【bù】分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加2ml*培【péi】养基【jī】终止消【xiāo】化。按6-8ml/瓶补加培【péi】养基，轻轻打匀【yún】后吸【xī】出，在1000RPM条件【jiàn】下【xià】离心4分【fèn】钟，弃去上清液，补加l-2mL培养液后【hòu】吹匀。将细胞悬液按1: 2到【dào】1: 5的【de】比例分到新【xīn】的含8ml培【péi】养基的【de】新皿中或者。
3.细胞冻存：待【dài】细胞生长【zhǎng】状态良好【hǎo】时，可进行【háng】细【xì】胞冻存。下面T25瓶【píng】为例【lì】；细胞冻存时【shí】，弃去培养【yǎng】基后，PBS清洗【xǐ】瓶【píng】底【dǐ】9-21次后加入lml胰酶，细胞变圆脱落后，加入2ml*培养基终止【zhǐ】消化，可使用血球计数【shù】板计数。
lOOOrpm离心4min去掉上【shàng】清。用血清重悬浮，加DMSO至终浓度为 10%。加入DMSO后迅速【sù】混【hún】匀，按每lml的数【shù】量分配到冻【dòng】存管中，注意【yì】冻存 管【guǎn】做【zuò】好标识。本公【gōng】司【sī】按每个冻存管细胞【bāo】数目大于1X106个细胞冻【dòng】存。将冻存管置于程序降温盒【hé】中，放入-80度冰【bīng】箱，至少2个小时以后【hòu】转入【rù】液 氮灌储存。记【jì】录【lù】冻存【cún】管位置以便下次拿【ná】取。
 
小鼠胚胎成纤维细胞 (3T3-L1)注意事项：
收到【dào】细胞后，若【ruò】发现干【gàn】冰己挥发干【gàn】净、冻存管瓶盖【gài】脱落、破损及细胞有【yǒu】污染，请立即与【yǔ】我们电联。
所有动物【wù】细胞均【jun1】视为有【yǒu】潜【qián】在的生物危害性【xìng】，必须在二级生【shēng】物安全台【tái】内操作，并【bìng】请注意防护，所有废液【yè】及接触过【guò】此细胞【bāo】的器皿需【xū】要灭菌后方能【néng】丢弃,瓶中。