即肠道病毒72型PCR检测试剂盒

产品介绍：

产品名称：即肠道病毒72型PCR检测试剂盒

英【yīng】文名【míng】称：Enteric Virus72(EV72，HAV)72RTPCR

准备物品：

清【qīng】理液（A）                                   毫升【shēng】

染色液（t B）                                 微升【shēng】

稀释液（C）                                   毫升

溶解液【yè】（tD）                                  毫升

产品【pǐn】说明书                                     1份【fèn】

注意事项：

1．基础程序；

2．扩增温度和延伸温度；

3．反应时间；

4．循环次数；

5．PCR 反应液的配制；

6．PCR技术的基本原理；

7．PCR的反应动力学；

8．PCR扩增产物；

9．PCR反应体系与反应条件。

反应五要素：

参加【jiā】PCR反应的【de】物质主要有五种即【jí】引【yǐn】物【wù】、酶、dNTP、模板和Mg2+

引物：引物是PCR特异性反应的关键，即肠道病毒72型PCR检测试剂盒PCR 产【chǎn】物的特异【yì】性取决【jué】于引物与模板DNA互【hù】补的程度【dù】。理论上，只【zhī】要【yào】知道任何【hé】一段模【mó】板【bǎn】DNA序列， 就能按其【qí】设计互补【bǔ】的寡核苷酸【suān】链做引物，利用PCR就【jiù】可将模板DNA在体外【wài】大量【liàng】扩增。设计引物应遵循以下原则：

①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。

②引物扩【kuò】增【zēng】跨度： 以200-500bp为宜，特定条【tiáo】件下可【kě】扩【kuò】增长【zhǎng】至10kb的片段。

③引物碱基：G+C含【hán】量以9-22%为【wéi】宜，G+C太少扩增效果不【bú】佳，G+C过多易出现非特【tè】异【yì】条带。ATGC*随机分布【bù】，避免5个以上的嘌呤或嘧啶【dìng】核苷【gān】酸的成【chéng】串排列。

④避【bì】免【miǎn】引物【wù】内【nèi】部出现二级结构【gòu】，避免【miǎn】两【liǎng】条引物间互补，特别是3'端的互补，否则会【huì】形成引物二聚体，产生非特异的扩增【zēng】条带【dài】。

⑤引物3'端的碱基【jī】，特别是末及倒数【shù】第二个【gè】碱基，应严格要【yào】求配对【duì】，以避免因末端【duān】碱基不配【pèi】对而导致PCR失败。

⑥引物中有或能加【jiā】上合适【shì】的酶切位点， 被扩增【zēng】的靶序【xù】列*有适【shì】宜的酶【méi】切位点， 这对酶切分析或分子克【kè】隆很有【yǒu】好【hǎo】处。

⑦引物的特异性：引【yǐn】物应【yīng】与核【hé】酸序列数据库的其它序列【liè】无【wú】明显同源【yuán】性。

引物量：每条引物【wù】的浓度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量产生所需要的结果为【wéi】好，引物浓度【dù】偏高会【huì】引【yǐn】起【qǐ】错配和非特异性扩增，且【qiě】可增【zēng】加【jiā】引物之间形成【chéng】二【èr】聚体的机会。