大鼠肾细胞（NRK-52E）

大鼠肾细胞(NRK-52E)
细胞特性
1)来源：大鼠，正常肾
2)形态：上皮细胞样，贴壁生长
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
细胞接受后的处理：
1.收到细胞后，请检查是否漏液，如果漏液，请拍照片发给我们。
2.请先在显微镜下确认细【xì】胞生长状态，去掉【diào】封口膜并将T25瓶【píng】置【zhì】于37°C培养约2-3h〇
3.弃去T25瓶中的培养基，添加6ml本公司附带的*培养基。
4. 如【rú】果细胞长【zhǎng】满【mǎn】（90%以上）请及时进行细胞传代【dài】，传代培【péi】养用6ml本公司附带的【de】*培养基【jī】。
5.接到细【xì】胞次日【rì】，请检查细胞【bāo】是否污染，若发现污染【rǎn】或疑似污染【rǎn】，请及时【shí】与我们取【qǔ】得电联。
细胞用途：仅供使用。
 
大鼠肾细胞(NRK-52E)本公司的细胞培养操作规程，供参考
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准【zhǔn】备 DMEM 培养基(DMEM，GIBCO)，95%;小牛血清，5%，添加【jiā】 10ng/ml EGF+4mM L-Glucose。
2.培养条件：气相：空气，95%;二氧化碳，5%。温度【dù】：37C，培养箱湿度为【wéi】70%-80%。
3.冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
2)细胞处理：
复苏细胞：将含【hán】有lmL细胞悬液的冻存管迅速放【fàng】入37°C水浴【yù】中（水【shuǐ】面要【yào】低于冻存【cún】管盖部）摇【yáo】晃解冻，移入事【shì】先准备好的含【hán】有4mL培养基的15ml离心管中混【hún】合均匀。在1000RPM条件下离【lí】心4分【fèn】钟，弃去上清液，加【jiā】入【rù】lmL培
养基后【hòu】吹匀。然【rán】后将【jiāng】所有细胞【bāo】悬液移入含有5ml培养【yǎng】基的培养瓶中培养【yǎng】过夜。
第二天换液并检查细胞密度。
细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对【duì】于贴【tiē】壁【bì】细胞，传代【dài】可参考以下【xià】方法：弃去【qù】培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞9-21次【cì】。
力口 2m丨消【xiāo】化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养【yǎng】瓶中，置【zhì】于37C培【péi】养箱【xiāng】中【zhōng】消化9-21分钟【zhōng】，然后【hòu】在显微镜下观察细胞消化【huà】情况，若细胞大【dà】部分变圆并脱落，迅速拿回【huí】操作台，轻敲几下【xià】培养瓶【píng】后加【jiā】入3ml此细胞的
培养基终止消化。
轻轻吹打【dǎ】后吸出，移入15ml离心【xīn】管中，在1000RPM条【tiáo】件下离心4分钟弃去上清【qīng】液，加入lmL培养【yǎng】液后【hòu】吹匀。
移入到【dào】事先准【zhǔn】备好的含【hán】有【yǒu】5ml培养【yǎng】基的T-25培养瓶【píng】中或含有14ml培养基的T-75培养【yǎng】瓶中培养。
 
细胞冻存：待【dài】细胞生长状态良好时，可进行细胞【bāo】冻存。贴壁细胞【bāo】冻存时，先要【yào】消化处理并【bìng】进行细胞计数。消化方【fāng】法按照细【xì】胞传代方法的9-21步骤【zhòu】进行，后的重悬液使【shǐ】用血【xuè】清【qīng】。悬浮细胞直接计【jì】数后离心，用【yòng】血清重悬浮，加【jiā】DMS至终浓度为10%。加【jiā】入DMSO后迅速混匀，按每lml的数量分配到冻存管中【zhōng】。本公司【sī】按每【měi】个冻存【cún】管细【xì】胞数目【mù】大于【yú】1X106个细胞冻【dòng】存。
 
大鼠肾细胞(NRK-52E)注意事项：
收到【dào】细胞后，若发现【xiàn】干冰己挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及【jí】细【xì】胞有【yǒu】污染，请【qǐng】立即与我们电联【lián】。
所有动物【wù】细胞均视【shì】为有潜【qián】在的生物危害性【xìng】，必须在二【èr】级生物安全台内操作，并请【qǐng】注意防【fáng】护，所有废液【yè】及接【jiē】触过【guò】此【cǐ】细胞的器皿需要【yào】灭菌后方能丢弃。