大鼠肝细胞（BRL 3A）

大鼠肝细胞(BRL 3A)
细胞介绍
这个细胞株【zhū】的无血清【qīng】条件培养基是MSA的一个【gè】来源。MSA多肽【tài】家族【zú】能够部分满
足鸡胚成纤维细胞对血清的需求。
 
细胞特性
1)来源：小鼠肝
2)形态：上皮细胞样，贴壁生长
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
大鼠肝细胞(BRL 3A)细胞接受后的处理：
1.收到细胞后，请检查是否漏液，如果漏液，请拍照片发给我们。
2.请先在显微【wēi】镜下确认细胞生【shēng】长【zhǎng】状【zhuàng】态【tài】，去掉封口膜并将T25瓶【píng】置【zhì】于37°C培养约2-3h〇
3.弃去T25瓶中的培养基，添加6ml本公司附带的*培养基。
4.如果细胞长满（90%以上【shàng】）请及时进行细胞传代，传【chuán】代培【péi】养用6ml本公司【sī】附带【dài】的*培养【yǎng】基【jī】。
5.接到细胞次日，请检查细胞是否【fǒu】污染，若发现污染【rǎn】或【huò】疑似污染，请及时【shí】与【yǔ】我们取得电联【lián】。
细胞用途：仅供使用。
 
本公司的细胞培养操作规程，供参考
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准【zhǔn】备 DMEM 培养基(DMEM，GIBCO)，90%;胎牛血【xuè】清，10%。
2. 培【péi】养条【tiáo】件：气相【xiàng】：空气，95%;二氧化碳，5%。温度：37°C，培【péi】养箱湿度为 70%-80%。
3.冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
2)细胞处理：
复【fù】苏细胞【bāo】：将含【hán】有lmL细胞悬液【yè】的【de】冻存管迅速【sù】放入37°C水浴中（水【shuǐ】面【miàn】要【yào】低于冻存【cún】管盖部）摇晃解冻【dòng】，移入事先【xiān】准备好的含有4mL培养基【jī】的15ml离心管中混合均匀【yún】。在1000RPM条件下离心【xīn】4分【fèn】钟，弃去上清液，加入lmL培养基后吹匀。然后将【jiāng】所有细【xì】胞悬液移【yí】入含有5ml培养【yǎng】基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞【bāo】密度【dù】。
细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
 
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去【qù】培养上【shàng】清，用不含钙、镁【měi】离子的PBS润【rùn】洗细胞9-21次。力口 2m丨消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶中，置于【yú】37°C培养箱中消化【huà】9-21分钟，然后在【zài】显微镜下观察细【xì】胞消化情况，若细胞大部【bù】分变圆【yuán】并脱落，迅速拿回操作台，轻敲【qiāo】几下培养【yǎng】瓶后加【jiā】入3ml此细【xì】胞【bāo】的【de】培养基终止【zhǐ】消化。轻轻吹打后吸出，移入15ml离心管中，在【zài】1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入lmL培养液后【hòu】吹匀。移【yí】入到事先准备好【hǎo】的含【hán】有5ml培养基的T-25培养瓶中【zhōng】或含有【yǒu】14ml培【péi】养基【jī】的T-75培养瓶中培养。
细【xì】胞冻存：待细胞【bāo】生长状态良【liáng】好时，可进行细胞冻存。贴壁细胞冻【dòng】存时，先要消化处理并进行细胞计数。消化【huà】方法按照细胞【bāo】传代方法【fǎ】的9-21步骤进行，后的重悬【xuán】液使用【yòng】血【xuè】清【qīng】。悬浮细胞直接计数后离心【xīn】，用【yòng】血【xuè】清重悬【xuán】浮【fú】，加DMSO至【zhì】终浓度为【wéi】10%。加入DMSO后迅速混匀，按【àn】每lml的数量分配【pèi】到冻存管【guǎn】中。本公【gōng】司按【àn】每个冻存管细【xì】胞【bāo】数目大于1X106个细胞冻存。
 
大鼠肝细胞(BRL 3A)注意事项：
收到细胞后，若发现【xiàn】干冰己【jǐ】挥发干【gàn】净【jìng】、冻存【cún】管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们电联。所有动物细胞均视【shì】为有潜在的【de】生【shēng】物危害性，必【bì】须在【zài】二级生物安全台内【nèi】操作，并请注意【yì】防【fáng】护【hù】，所【suǒ】有废【fèi】液及接【jiē】触过此细【xì】胞的【de】器皿需要灭【miè】菌后方能丢弃。