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1．无菌环境

无毒和无菌是【shì】体外【wài】培养细胞的首要【yào】条件。细胞在活【huó】体内，解【jiě】毒系统和免疫系统可抵抗微生物或【huò】其他有害物质的入【rù】侵，但细胞【bāo】在【zài】体外培养【yǎng】的过程中，缺乏【fá】机体【tǐ】免疫【yì】系统的保护而丧失对微【wēi】生物的防【fáng】御能力和对有害物【wù】质【zhì】的解毒能力【lì】。为保证细胞能【néng】在【zài】体外环境【jìng】中生长繁殖，必须要【yào】确保无菌【jun1】工作区域、良好的【de】个人卫生、无菌试【shì】剂和培养【yǎng】基以【yǐ】及无菌操作。

常见的微生物污【wū】染有支原体、细菌【jun1】、真菌。支原体无致死【sǐ】毒性，可与细胞长期共存，对细胞【bāo】有潜在影响，但体积小，不【bú】易鉴【jiàn】别，可借助【zhù】于地衣【yī】红或【huò】Hoechst33342染色来进行检测【cè】。细【xì】菌【jun1】增殖【zhí】快，在短时【shí】间内即可【kě】大量扩增，并产生毒素杀死细胞【bāo】。真菌【jun1】的【de】种类繁多，肉眼可【kě】见，漂【piāo】浮于培养液【yè】面上，可呈丝状、管状【zhuàng】或树枝状等。

2.合适的温度

一般哺乳【rǔ】类与禽类【lèi】细胞在体【tǐ】外培养的【de】适宜【yí】温【wēn】度是37～38℃，不适宜的【de】环境温度会影响【xiǎng】细【xì】胞的生长。细胞对低温的耐受能力【lì】要【yào】强于对高温的【de】耐受能力，在低温【wēn】下，细胞的【de】代【dài】谢活【huó】力及【jí】核分裂【liè】能力降低。若温度不低于0℃，虽然细胞代谢受到【dào】影【yǐng】响，但【dàn】无损伤作用；25～35℃时，细胞以【yǐ】缓慢的速度生长；但若被置【zhì】于【yú】40℃数小时，则不仅不利于细胞【bāo】生【shēng】存、生长，甚至可导致其死亡。

3．气体环境与pH

细【xì】胞的体外【wài】培养需要理想的气【qì】体环境，氧气、二氧化碳是细胞生存【cún】的必要【yào】条件。氧气【qì】参【cān】与【yǔ】细【xì】胞的三羧酸循环，为细胞生存【cún】、代谢与【yǔ】合成提供能量；二氧化碳既【jì】是细胞【bāo】的【de】代谢产物【wù】，是细胞生长的必需成分，又与维持培【péi】养液【yè】的pH有关。大多数【shù】细胞适宜的pH范围【wéi】往往是7.2～7.4。在开放式培养中【zhōng】，以5%的二【èr】氧【yǎng】化【huà】碳【tàn】气体比例为宜。 

4.适宜的渗透压

高渗溶液或低渗溶【róng】液会引起细胞【bāo】发生褶皱、肿【zhǒng】胀、破裂。因此，渗透压是体外培【péi】养细胞的重要【yào】条【tiáo】件【jiàn】之一。多数体【tǐ】外培养【yǎng】的【de】细胞对渗透压都有一定的耐受能【néng】力，实际应用中【zhōng】，260～320mmol/L的渗透压可【kě】适用于大【dà】多数细胞。

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