本试剂盒仅供体外研究使用，不用于临床诊断

本试剂盒【hé】用于体外定量检测血清、血浆、组【zǔ】织匀浆及【jí】相关液【yè】体样本中【zhōng】大鼠远端【duān】上游【yóu】元件结合【hé】蛋白1(FUBP1)的含量。

有效期：6个月

保存条件：9-21℃

试剂盒组成：

备注：

1.（96T/48T）打开包装后请及时检查所有物品是否齐全。

2. 标准品浓度依次为：800、400、200、100、50、25 pg/mL

3. 经过大量【liàng】正常标本检验【yàn】，标【biāo】本的正常浓【nóng】度值均在试剂【jì】盒提供的检测【cè】范围【wéi】内，实验过程中直接【jiē】取50μL样本【běn】上【shàng】样即可。当有部分样本值大标准【zhǔn】品浓度【dù】时，可用样本稀释【shì】液将标本进【jìn】行【háng】适当【dāng】稀释后再进行实验。

检测前准备工作：

1. 请提前20分钟从冰箱中取出试剂盒，平衡至室温。

2. 从冰箱【xiāng】中取【qǔ】出的浓【nóng】缩洗【xǐ】涤液可能有结晶，属于正常现【xiàn】象【xiàng】；放置室温，轻摇均【jun1】匀，待结晶溶解后【hòu】再配置洗【xǐ】涤液。可将20ml浓缩洗涤液用【yòng】蒸馏【liú】水或去离子水稀释配【pèi】置【zhì】成400ml工作浓度的洗涤液【yè】，未用完的【de】放回【huí】4℃

3. 20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀【xī】释，即1份20×洗涤【dí】缓冲液【yè】加19份蒸【zhēng】馏水【shuǐ】。

实验原理：

试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被【bèi】大鼠远端上游【yóu】元件结合蛋白1(FUBP1)捕获【huò】抗体的包【bāo】被微孔中【zhōng】，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗【kàng】体，经过温育洗涤。用底物TMB显【xiǎn】色【sè】，TMB在【zài】过【guò】氧化物酶的催【cuī】化下转化【huà】成蓝色，并【bìng】在酸的作用下转化成黄色。颜色的深浅【qiǎn】和样品中【zhōng】的大鼠【shǔ】远端上游元件结合蛋白【bái】1(FUBP1)呈正相关【guān】。用酶标仪【yí】在【zài】450nm 波长下测定【dìng】吸【xī】光度（OD 值），计算样品浓度。

实验所需自备试验器材：

1. 酶标仪（450nm）

2. 高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3. 37℃恒温箱

4. 蒸馏水或去离子水

样本处理及要求：

1. 血清：将收集于血清分离管的全血标本在室温放置2小时或4℃过夜，然【rán】后【hòu】1000×g离心20 分钟，取【qǔ】上清即可，或将【jiāng】上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反【fǎn】复冻融。

2. 血浆：用EDTA或肝素作为抗凝剂采集标本，并将【jiāng】标【biāo】本在【zài】采集后的30分钟【zhōng】内于9-21℃ 1000×g离心15分钟【zhōng】，取【qǔ】上清【qīng】即可检【jiǎn】测，或将上清置于-20℃或【huò】-80℃保存【cún】，但【dàn】应避免反【fǎn】复冻融。

3. 组织匀浆：用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织，去除残留血【xuè】液（匀浆中裂【liè】解的红细胞会影响【xiǎng】测量结果），称【chēng】重后将组织剪碎。将剪碎的组【zǔ】织与【yǔ】对应体【tǐ】积的PBS（一般按【àn】1:9的重量体【tǐ】积比，比如1g的组织样品对应9mL的【de】PBS，具【jù】体体【tǐ】积可【kě】根据实验需要适当调【diào】整【zhěng】，并做好记录。推荐在【zài】PBS中【zhōng】加入蛋白【bái】酶【méi】抑制剂）加【jiā】入玻璃【lí】匀浆器中，于冰上充分研磨。为【wéi】了进一步裂解【jiě】组织【zhī】细胞，可以对匀浆液进行超声破碎，或【huò】反复【fù】冻融。将【jiāng】匀浆液于【yú】5000×g离心5~10分钟，取上清检测【cè】。

4. 细胞培养物上清：请1000×g离心20分【fèn】钟，取上【shàng】清即可【kě】检测【cè】，或将上清置于【yú】-20℃或【huò】-80℃保存，但应避免反复冻【dòng】融。

5. 其它生物标本：1000×g离心20分钟，取上清即可检测。

6. 样品外观：样品应清澈透明，悬浮物应离心去除。

7. 样品保存：样品收集后若在1周【zhōu】内进行检测的可【kě】保存于4℃，若不能及时检【jiǎn】测，请按一次使用量【liàng】分装，冻存于-20℃（1个【gè】月内检【jiǎn】测），或-80℃（6个月【yuè】内检测），避免反复冻【dòng】融，标本溶血会影响检测结【jié】果，因此【cǐ】溶血标本【běn】不宜进行【háng】此项检测。

注意事项：

1. 严格按照规【guī】定的时【shí】间和【hé】温【wēn】度进【jìn】行温育以保证【zhèng】准确结果。所有试剂【jì】都必须【xū】在使用前达到室温9-21℃。使用后立即冷藏保存试剂。

2. 洗板【bǎn】不正确可以导【dǎo】致不准确的【de】结【jié】果。在加入【rù】底物前确保尽量吸干孔内液体【tǐ】。温育过程中不【bú】要让微孔【kǒng】干燥掉。

3. 消除板底残留的液体和手指印，否则影响OD值。

4. 底物显色液应呈无色或很浅的颜色，已经变蓝的底物液不能使用。

5. 避免试剂和标本的交叉污染以免造成错误结果。

6. 在储存和温育时避免强光直接照射。

7. 平衡至室温后再打开密封袋以防水滴凝聚在冷板条上。

8. 任【rèn】何反【fǎn】应试剂【jì】不能接触漂白溶【róng】剂或漂白溶【róng】剂所散发的强烈【liè】气体。任何漂白成分都【dōu】会破坏试【shì】剂盒中反应试【shì】剂的生物活性。

9. 不能使用过期产品。

10. 如果可能传播疾病【bìng】，所有【yǒu】的样品都【dōu】应管【guǎn】理好，按照规定的程序处理样【yàng】品和检【jiǎn】测装【zhuāng】置。

操作步骤：

1．从室温【wēn】平衡60min后的【de】铝箔袋中取出【chū】所需板条，剩【shèng】余板条用【yòng】自封【fēng】袋密封放回【huí】4℃。

2．设置【zhì】标准【zhǔn】品孔和样本孔【kǒng】，标准品【pǐn】孔各加不同浓度【dù】的标准品50μL。

3．样本孔中a加入待测样本50μL；空白孔不加。

4．除空白孔外，标准品孔【kǒng】和样本孔【kǒng】中每孔【kǒng】加【jiā】入辣根【gēn】过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反【fǎn】应孔，37℃水【shuǐ】浴【yù】锅或【huò】恒温箱【xiāng】温育60min。

5．弃去液体【tǐ】，吸水纸上【shàng】拍干，每【měi】孔加满洗涤液【yè】（350μL），静置1min，甩去【qù】洗涤液，吸水纸上拍干，如【rú】此重复洗板5次（也可用【yòng】洗板机洗板）。

6．每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7．每【měi】孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长【zhǎng】处测定【dìng】各孔的OD值。

实验结果计算：

绘制标准曲线：在Excel工作表中，以【yǐ】标【biāo】准品浓度作横【héng】坐标，对【duì】应OD值作纵坐标，绘制出标准品线性回归曲线，按曲【qǔ】线方【fāng】程计算【suàn】各【gè】样本【běn】浓度值【zhí】。

（此图仅供参考）

性能：
1. 检测范围：25 pg/mL – 800 pg/mL。

2. 灵敏度：检测浓度小于1.0 pg/mL。

3. 特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。

4. 重复性：板内变异系数小于10% ，板间变异系数小于15% 。

技术小提示：

1. 当混合或重溶蛋白溶液时，尽量避免起沫。

2. 为了避免交叉感染，配置不同浓【nóng】度标准品、上样、加不同【tóng】试【shì】剂【jì】都需【xū】要更【gèng】换枪头。另外【wài】不同试剂请分别使用不同的【de】移【yí】液槽【cáo】。

3. 每次孵育时，请正确使用封板胶可保证结果的准确性。

4. 混合【hé】后的显色底【dǐ】物在上板前应为【wéi】无色，请避光【guāng】保存；假如微孔【kǒng】板后，将由物色变成不同【tóng】深度的蓝【lán】色。

5. 终止液上板顺【shùn】序应【yīng】同显【xiǎn】色底【dǐ】物【wù】上板顺序一致；加入终【zhōng】止液后，孔内颜色由蓝变黄；若孔内【nèi】有绿色，则表【biǎo】明【míng】孔内【nèi】液体未【wèi】混匀；请充分混合。

说明：

1. 由【yóu】于现有【yǒu】条件及科学技【jì】术水平【píng】尚【shàng】不能对所有供货商提供【gòng】的所有原【yuán】料进行全面的鉴定【dìng】与分析，本产品【pǐn】可能【néng】存在一定的质量技术【shù】风险。

2. 实【shí】验结果与试【shì】剂的有【yǒu】效性、实验【yàn】者的相关【guān】操作以及当时的实验环境密切相关【guān】，请务【wù】必准备充足的【de】标本备份【fèn】。

3. 不同批次的【de】同一产品可能会有【yǒu】少许差别，如【rú】：检【jiǎn】测【cè】限、灵敏度以及显色时间等，请依据试【shì】剂盒内说【shuō】明书进行实验操作，网站电子【zǐ】版说【shuō】明书仅作参考。

4. 只有全【quán】部使用本试剂【jì】盒配套【tào】试剂才能保证检测效果【guǒ】，不【bú】能混用其他【tā】制造商【shāng】的产品。只有严格遵守本试剂盒【hé】的实【shí】验【yàn】说明才会得到检测结果【guǒ】。