本试剂盒仅供体外研究使用，不用于临床诊断

本试剂【jì】盒用于体外定量检【jiǎn】测血清【qīng】、血浆、组织匀【yún】浆及相关液体样本中【zhōng】大鼠组【zǔ】蛋白脱【tuō】乙酰基酶1(HDAC1)的含量。

有效期：6个月

保存条件：9-21℃

试剂盒组成：

备注：

1.（96T/48T）打开包装后请及时检查所有物品是否齐全。

2. 标准品浓度依次为：800、400、200、100、50、25 pg/mL

3. 经过大量正常【cháng】标本检验，标本的【de】正常浓度值【zhí】均在试剂盒提供【gòng】的检测范【fàn】围内，实【shí】验【yàn】过【guò】程中直接取50μL样本上样即可。当有部分样本【běn】值【zhí】超【chāo】过标准品浓度时，可用样本【běn】稀释液将【jiāng】标【biāo】本进行适当稀释后再进行【háng】实验。

检测前准备工作：

1. 请提前20分钟从冰箱中取出试剂盒，平衡至室温。

2. 从冰箱中取出的【de】浓缩洗涤液可能有结晶，属于正常现象；放置室【shì】温，轻摇均【jun1】匀，待【dài】结晶溶【róng】解后【hòu】再配置【zhì】洗【xǐ】涤液【yè】。可将20ml浓缩洗涤液用蒸【zhēng】馏【liú】水或去离子【zǐ】水稀释配置成400ml工作浓度【dù】的洗涤液，未用完的放回4℃

3. 20×洗涤缓冲液的【de】稀释【shì】：蒸馏水按1：20稀【xī】释，即1份【fèn】20×洗涤缓【huǎn】冲液加19份蒸馏水。

实验原理：

试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先【xiān】包被大鼠组【zǔ】蛋白脱【tuō】乙酰基【jī】酶1(HDAC1)捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的【de】检测抗【kàng】体，经【jīng】过温【wēn】育洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化【huà】物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成黄【huáng】色。颜色的深浅和【hé】样【yàng】品中【zhōng】的【de】大鼠组【zǔ】蛋【dàn】白脱乙酰【xiān】基酶1(HDAC1)呈正相关【guān】。用酶标仪【yí】在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。

实验所需自备试验器材：

1. 酶标仪（450nm）

2. 高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3. 37℃恒温箱

4. 蒸馏水或去离子水

样本处理及要求：

1. 血清：将收集于血清分离管的全血标本在室温放置2小时或4℃过【guò】夜，然后1000×g离【lí】心20 分钟，取上清即【jí】可【kě】，或将上清置于【yú】-20℃或-80℃保存，但应【yīng】避免反复【fù】冻融。

2. 血浆：用EDTA或肝素作为抗凝剂【jì】采集标本，并将标本在采集后【hòu】的30分【fèn】钟【zhōng】内于9-21℃ 1000×g离【lí】心15分钟【zhōng】，取上清即可检测，或【huò】将上清置于-20℃或-80℃保存，但应【yīng】避免反复冻融【róng】。

3. 组织匀浆：用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织，去除残留血液（匀浆中裂解【jiě】的红细胞会影【yǐng】响测量结果），称重后将组织剪【jiǎn】碎【suì】。将剪【jiǎn】碎【suì】的组织与【yǔ】对应体积【jī】的PBS（一般按【àn】1:9的重量体积比，比如1g的组织样品对应9mL的PBS，具体体积可【kě】根据实验需要适当调【diào】整【zhěng】，并做好【hǎo】记录。推荐在【zài】PBS中加入蛋白酶抑制剂）加入玻璃匀浆【jiāng】器中，于冰【bīng】上【shàng】充分研磨。为了进一【yī】步裂解组织细胞，可以对【duì】匀【yún】浆液进行超声破碎【suì】，或【huò】反复冻融【róng】。将匀浆液【yè】于5000×g离心5~10分钟【zhōng】，取上清检测。

4. 细胞培养物上清：请1000×g离【lí】心20分钟，取上【shàng】清即【jí】可检【jiǎn】测，或将上清置于-20℃或-80℃保存【cún】，但应避【bì】免反复冻融。

5. 其它生物标本：1000×g离心20分钟，取上清即可检测。

6. 样品外观：样品应清澈透明，悬浮物应离心去除。

7. 样品保存：样品收集后若在1周内【nèi】进【jìn】行检测的可保存【cún】于4℃，若不【bú】能及时检测，请按一【yī】次使用量分装，冻【dòng】存【cún】于-20℃（1个月内检测），或-80℃（6个月内检测），避免反复【fù】冻融，标本溶血【xuè】会影响检测【cè】结果，因此溶【róng】血【xuè】标本不宜进行此项检测。

注意事项：

1. 严格按照【zhào】规定的【de】时间【jiān】和温度【dù】进行温育以保证准确结果。所有【yǒu】试剂都必【bì】须【xū】在使用前达到室温9-21℃。使用后立即冷藏保存试剂。

2. 洗板不正确【què】可以导【dǎo】致不【bú】准确的结果。在【zài】加入底【dǐ】物前确保【bǎo】尽量吸干孔【kǒng】内液体。温育过程【chéng】中不要让微【wēi】孔干燥掉。

3. 消除板底残留的液体和手指印，否则影响OD值。

4. 底物显色液应呈无色或很浅的颜色，已经变蓝的底物液不能使用。

5. 避免试剂和标本的交叉污染以免造成错误结果。

6. 在储存和温育时避免强光直接照射。

7. 平衡至室温后再打开密封袋以防水滴凝聚在冷板条上。

8. 任【rèn】何反应试剂不能接触漂白溶【róng】剂或漂白溶【róng】剂所散发的强烈气体【tǐ】。任【rèn】何【hé】漂白成分【fèn】都会破【pò】坏试剂盒中反应【yīng】试剂的生物【wù】活性。

9. 不能使用过期产品。

10. 如【rú】果可【kě】能传播疾【jí】病，所【suǒ】有的样品【pǐn】都应管理好，按【àn】照规定的程序处理样品和检测装置。

操作步骤：

1．从室温平【píng】衡【héng】60min后的铝箔袋中取出所需板条【tiáo】，剩【shèng】余【yú】板条用自封袋密【mì】封放回4℃。

2．设【shè】置标准品孔和样【yàng】本孔，标准品孔各加不同浓度的标【biāo】准【zhǔn】品50μL。

3．样本孔中a加入待测样本50μL；空白孔不加。

4．除空白孔【kǒng】外，标准品孔和样本孔【kǒng】中每【měi】孔加【jiā】入辣根过【guò】氧化物酶（HRP）标记【jì】的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水【shuǐ】浴锅或恒温箱温育60min。

5．弃去液体，吸水纸【zhǐ】上拍干，每孔加满【mǎn】洗涤液（350μL），静置1min，甩去洗【xǐ】涤液【yè】，吸水纸【zhǐ】上拍干，如【rú】此【cǐ】重复【fù】洗【xǐ】板5次（也可用洗【xǐ】板机洗板【bǎn】）。

6．每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7．每孔加入【rù】终止液50μL，15min内【nèi】，在450nm波【bō】长处测定各【gè】孔的OD值。

实验结果计算：

绘制标准曲线：在Excel工作表中【zhōng】，以【yǐ】标准品浓度【dù】作横坐标，对应【yīng】OD值作纵坐标，绘制出标准品线性回归曲【qǔ】线，按曲线【xiàn】方程计算各样本【běn】浓度【dù】值。

（此图仅供参考）

性能：
1. 检测范围：25 pg/mL – 800 pg/mL。

2. 灵敏度：检测浓度小于1.0 pg/mL。

3. 特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。

4. 重复性：板内变异系数小于10% ，板间变异系数小于15% 。

技术小提示：

1. 当混合或重溶蛋白溶液时，尽量避免起沫。

2. 为了避免交叉感染，配【pèi】置不同浓度标【biāo】准品、上样、加不【bú】同试剂【jì】都需要更换枪头。另【lìng】外不同试剂请分别使【shǐ】用【yòng】不同的【de】移液【yè】槽。

3. 每次孵育时，请正确使用封板胶可保证结果的准确性。

4. 混合后的显色【sè】底物在上板【bǎn】前【qián】应为无【wú】色，请避【bì】光保存；假【jiǎ】如微孔【kǒng】板后，将由物色【sè】变成不同深度的蓝色。

5. 终止液【yè】上板【bǎn】顺序应同显色底【dǐ】物上【shàng】板顺序一致；加入终止液后，孔【kǒng】内颜【yán】色由蓝【lán】变黄；若孔内有绿色【sè】，则表明孔【kǒng】内液体未混匀；请充分【fèn】混合。

说明：

1. 由【yóu】于现有【yǒu】条件及科学【xué】技术水平【píng】尚不能对所【suǒ】有供货商提供的所有【yǒu】原料【liào】进行全面的鉴定与分析【xī】，本产品【pǐn】可能存在一【yī】定的质量技术风险【xiǎn】。

2. 实验结果与试剂【jì】的【de】有效性、实验者的相关操作以【yǐ】及【jí】当【dāng】时的【de】实验环境【jìng】密切相关，请务必准备充足【zú】的标本备【bèi】份。

3. 不同批【pī】次的同一产【chǎn】品可能会有少许差别，如：检测限【xiàn】、灵敏【mǐn】度【dù】以及显色【sè】时间【jiān】等，请【qǐng】依据试【shì】剂【jì】盒内说【shuō】明书进行实验操作，网站电子版说明书仅作参考。

4. 只有全部使用本试【shì】剂盒配套试【shì】剂【jì】才能保证检测效果，不能混用其他制【zhì】造商的【de】产品【pǐn】。只有严格遵【zūn】守本试剂盒的【de】实【shí】验说明才会得到检测【cè】结果。