本试剂盒仅供体外研究使用，不用于临床诊断

本试剂盒用于体外定【dìng】量检测血【xuè】清、血【xuè】浆、组织匀【yún】浆【jiāng】及【jí】相关液体样本中大鼠6酮前列腺素F1a(6-keto-PGF1a)的含量。

有效期：6个月

保存条件：9-20℃

试剂盒组成：

备注：

1.（96T/48T）打开包装后请及时检查所有物品是否齐全。

2. 标准品浓度依次为：800、400、200、100、50、25 pg/mL

3. 经过大量正常【cháng】标【biāo】本检验，标本的正常浓【nóng】度值均在试【shì】剂盒提供的检测范围【wéi】内，实【shí】验过程中直【zhí】接取【qǔ】50μL样本上样即可。当有部分样【yàng】本值超【chāo】过标准品【pǐn】浓度时，可用样本稀释液将标本【běn】进【jìn】行适当稀【xī】释【shì】后再进行实【shí】验。

检测前准备工作：

1. 请提前20分钟从冰箱中取出试剂盒，平衡至室温。

2. 从冰箱中取出【chū】的浓缩【suō】洗涤液可能有结晶，属【shǔ】于正常现象；放置室温【wēn】，轻摇【yáo】均匀，待结晶溶解【jiě】后再配【pèi】置洗涤【dí】液。可将20ml浓【nóng】缩【suō】洗涤液用蒸馏水或去【qù】离子【zǐ】水稀释配【pèi】置成【chéng】400ml工作浓度的洗涤液，未用完的放回4℃

3. 20×洗涤缓【huǎn】冲液的稀释：蒸馏水按【àn】1：20稀释，即【jí】1份【fèn】20×洗涤缓冲液加19份蒸馏水。

实验原理：

试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被大鼠6酮前列腺素F1a(6-keto-PGF1a)捕获【huò】抗体的包被微【wēi】孔中，依【yī】次加入标本、标准品【pǐn】、HRP标记【jì】的检测抗体【tǐ】，经过温育洗涤【dí】。用底物TMB显色，TMB在过【guò】氧化物酶的【de】催化下转化成蓝色【sè】，并【bìng】在酸的作用下转化【huà】成【chéng】黄【huáng】色。颜色的深【shēn】浅【qiǎn】和样品中的大鼠【shǔ】6酮【tóng】前列腺素F1a(6-keto-PGF1a)呈正【zhèng】相关【guān】。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算【suàn】样品浓度【dù】。

实验所需自备试验器材：

1. 酶标仪（450nm）

2. 高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3. 37℃恒温箱

4. 蒸馏水或去离子水

样本处理及要求：

1. 血清：将收集于血清分离管的全血标本在室温放置2小时或4℃过【guò】夜，然【rán】后1000×g离心20 分【fèn】钟【zhōng】，取上清即可【kě】，或【huò】将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

2. 血浆：用EDTA或肝素作【zuò】为抗凝剂【jì】采【cǎi】集标本，并将标本在采【cǎi】集后的【de】30分钟【zhōng】内于【yú】9-20℃ 1000×g离心15分钟【zhōng】，取上清即【jí】可检测，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应【yīng】避【bì】免反复冻融。

3. 组织匀浆：用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织，去除残留血液（匀浆中裂解的红细胞【bāo】会影响【xiǎng】测量【liàng】结果【guǒ】），称重后将组织剪碎。将剪碎【suì】的组【zǔ】织与【yǔ】对应体积的PBS（一般按1:9的重【chóng】量体积比【bǐ】，比【bǐ】如1g的【de】组织样【yàng】品对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。推【tuī】荐在PBS中加入蛋【dàn】白酶抑【yì】制剂）加【jiā】入玻【bō】璃匀浆器中，于冰上充分研磨【mó】。为了进一【yī】步裂解组织细胞，可以对【duì】匀浆液进【jìn】行【háng】超【chāo】声破碎，或反【fǎn】复冻融。将匀浆【jiāng】液于5000×g离心【xīn】5~10分【fèn】钟，取【qǔ】上清检【jiǎn】测。

4. 细胞培养物上清：请1000×g离【lí】心20分钟，取【qǔ】上清【qīng】即可检测【cè】，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避【bì】免反复冻融。

5. 其它生物标本：1000×g离心20分钟，取上清即可检测。

6. 样品外观：样品应清澈透明，悬浮物应离心去除。

7. 样品保存：样品收集后若在1周内进行检测的可保存于4℃，若不【bú】能【néng】及时检测，请按【àn】一【yī】次【cì】使用量【liàng】分装，冻存于【yú】-20℃（1个月内检测），或-80℃（6个月【yuè】内检测），避【bì】免【miǎn】反【fǎn】复冻融【róng】，标本溶血会【huì】影响检测结果，因此溶血【xuè】标本不宜进行此【cǐ】项检【jiǎn】测。

注意事项：

1. 严格按照【zhào】规定【dìng】的时间【jiān】和温【wēn】度进行温育以保证准确【què】结果。所【suǒ】有【yǒu】试剂都必须在使用前【qián】达到室温9-20℃。使用后立即冷藏保存试剂。

2. 洗板不正【zhèng】确可【kě】以导致不准确的结果。在加入底物前【qián】确保【bǎo】尽【jìn】量吸干【gàn】孔内【nèi】液【yè】体。温育【yù】过程中不要让微孔干燥掉。

3. 消除板底残留的液体和手指印，否则影响OD值。

4. 底物显色液应呈无色或很浅的颜色，已经变蓝的底物液不能使用。

5. 避免试剂和标本的交叉污染以免造成错误结果。

6. 在储存和温育时避免强光直接照射。

7. 平衡至室温后再打开密封袋以防水滴凝聚在冷板条上。

8. 任何反应试【shì】剂不能接【jiē】触漂白溶剂【jì】或漂白溶剂所散发【fā】的【de】强【qiáng】烈气体。任何漂白成【chéng】分都会破坏试剂盒中反应试【shì】剂的生物【wù】活【huó】性。

9. 不能使用过期产品。

10. 如果可【kě】能传【chuán】播疾病，所有的样品都应管理好【hǎo】，按照规定的程序处理样品和检测【cè】装【zhuāng】置。

操作步骤：

1．从室【shì】温平衡60min后【hòu】的铝【lǚ】箔【bó】袋【dài】中取【qǔ】出所需板条，剩余板条用自封袋密【mì】封放回4℃。

2．设置【zhì】标准品孔和样本孔【kǒng】，标准品孔各加不【bú】同【tóng】浓度【dù】的标准【zhǔn】品50μL。

3．样本孔中a加入待测样本50μL；空白孔不加。

4．除空白孔外，标准品孔【kǒng】和样本【běn】孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记【jì】的检测抗体100μL，用【yòng】封板膜封住反应孔，37℃水【shuǐ】浴【yù】锅【guō】或【huò】恒温箱温育60min。

5．弃去液体，吸【xī】水纸上【shàng】拍干，每孔【kǒng】加满【mǎn】洗涤液（350μL），静置1min，甩去洗涤【dí】液，吸水纸上拍干，如此【cǐ】重复洗【xǐ】板5次（也可【kě】用洗板【bǎn】机洗【xǐ】板）。

6．每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7．每孔加【jiā】入终【zhōng】止液50μL，15min内，在450nm波【bō】长处测【cè】定【dìng】各孔的OD值。

实验结果计算：

绘制标准曲线：在Excel工作表中【zhōng】，以标准【zhǔn】品浓度作横坐标，对应【yīng】OD值作纵坐【zuò】标【biāo】，绘制出标准品线性回归曲线，按曲线【xiàn】方【fāng】程计算【suàn】各样本【běn】浓度值【zhí】。

（此图仅供参考）

性能：
1. 检测范围：25 pg/mL – 800 pg/mL。

2. 灵敏度：检测浓度小于1.0 pg/mL。

3. 特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。

4. 重复性：板内变异系数小于10% ，板间变异系数小于15% 。

技术小提示：

1. 当混合或重溶蛋白溶液时，尽量避免起沫。

2. 为了避【bì】免【miǎn】交叉感【gǎn】染，配【pèi】置不同浓度标准品、上样、加不同试剂都需要【yào】更换枪头。另外不同试剂请分【fèn】别使用不同的【de】移液槽【cáo】。

3. 每次孵育时，请正确使用封板胶可保证结果的准确性。

4. 混合后的显色底物在【zài】上板前应为【wéi】无色【sè】，请避【bì】光保存；假如微【wēi】孔板后，将由物色变成不同深度的蓝色。

5. 终止液上【shàng】板【bǎn】顺序应同显色底【dǐ】物上板顺序一【yī】致；加【jiā】入终止【zhǐ】液后，孔内【nèi】颜色【sè】由蓝变黄；若孔内有绿色，则表明孔内液【yè】体未混匀；请充【chōng】分混合。

说明：

1. 由于【yú】现有条件及科学技术水平【píng】尚不能对所有供货商【shāng】提【tí】供的所【suǒ】有【yǒu】原料进行全【quán】面的鉴定与分【fèn】析，本产品【pǐn】可能存【cún】在一定的质量技术风险。

2. 实验结【jié】果与试剂的有效性、实验【yàn】者的相关操作以及当时的实【shí】验环【huán】境密切相关，请务必准备充【chōng】足【zú】的标【biāo】本备份。

3. 不同【tóng】批次的同一产【chǎn】品可能会有少许【xǔ】差别，如：检【jiǎn】测限、灵敏度以及显【xiǎn】色时间等，请依【yī】据试【shì】剂盒内说明书进行实验操作，网站【zhàn】电子版【bǎn】说明书仅作【zuò】参考。

4. 只【zhī】有全部使【shǐ】用本试剂【jì】盒配套试剂才能保【bǎo】证检测效果，不能混用其他制【zhì】造商的产品。只有严格遵守本【běn】试剂盒【hé】的实【shí】验说明才会得到【dào】检【jiǎn】测结果。