本试剂盒仅供体外研究使用，不用于临床诊断

本试剂盒用于体【tǐ】外定量【liàng】检测【cè】血清、血浆【jiāng】、组织匀浆及相关液体样本中豚【tún】鼠表【biǎo】皮生长因子(EGF)的【de】含量。

有效期：6个月

保存条件：9-21℃

试剂盒组成：

备注：

1.（96T/48T）打开包装后请及时检查所有物品是否齐全。

2. 标准品浓【nóng】度依次【cì】为：800、400、200、100、50、25 pg/mL

3. 经过大量正常标本检验，标本【běn】的正常浓度值均【jun1】在试剂盒提供的检测【cè】范【fàn】围内，实验【yàn】过【guò】程中【zhōng】直【zhí】接取50μL样本上样即可。当有部分样本值超过最【zuì】大【dà】标准品浓度时【shí】，可用样【yàng】本稀【xī】释液将标本进行适【shì】当稀释【shì】后再【zài】进行实【shí】验。

豚鼠表皮生长因子(EGF)试剂盒检测前准备工作：

1.请提前20分钟从冰箱中取出试剂盒，平衡至室温。

2.从【cóng】冰箱中取出的浓缩洗涤液可能有【yǒu】结【jié】晶，属于正常现象；放置室温，轻【qīng】摇均匀，待结晶溶解后【hòu】再配置洗涤液。可将20ml浓缩洗涤液用蒸馏【liú】水或去离子水【shuǐ】稀释【shì】配【pèi】置成400ml工【gōng】作浓【nóng】度【dù】的【de】洗【xǐ】涤液，未用完的放回4℃

3.20×洗涤缓冲【chōng】液的稀释：蒸馏水【shuǐ】按1：20稀释，即【jí】1份20×洗涤缓冲液【yè】加19份蒸馏水。

实验原理：

试剂盒采【cǎi】用双抗体一步夹心法酶【méi】联免【miǎn】疫吸附试验（ELISA）。往预先【xiān】包被豚【tún】鼠表皮【pí】生长因子(EGF)捕获抗【kàng】体的包被【bèi】微孔中【zhōng】，依次加入标本、标准【zhǔn】品、HRP标【biāo】记的检测【cè】抗体【tǐ】，经过温育并洗【xǐ】涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色【sè】，并在酸【suān】的作用下转化成最终【zhōng】的黄色。颜色的深【shēn】浅【qiǎn】和样品【pǐn】中的【de】豚鼠表皮【pí】生长【zhǎng】因子(EGF)呈正相关。用酶标【biāo】仪在450nm 波长下测【cè】定吸光度（OD 值），计算样品浓度。

实验所需自备试验器材：

1.酶标仪（450nm）

2.高精【jīng】度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3.37℃恒温箱

4.蒸馏水或去离子水

样本处理及要求：

1.血清【qīng】：将【jiāng】收集于血清分离管的全血标本在室温【wēn】放置2小时或4℃过【guò】夜，然【rán】后1000×g离心【xīn】20 分钟【zhōng】，取上清即可，或将【jiāng】上【shàng】清置于-20℃或-80℃保存【cún】，但应避免反复冻【dòng】融。

2.血浆：用EDTA或肝素【sù】作【zuò】为【wéi】抗凝【níng】剂采【cǎi】集标本，并将标本在【zài】采集【jí】后的30分钟内于9-21℃ 1000×g离心15分钟，取上清即可检测【cè】，或将上清置于【yú】-20℃或【huò】-80℃保存，但应避免反复【fù】冻融。

3.组织匀浆：用预冷【lěng】的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗【xǐ】组织，去除残留血液【yè】（匀浆中【zhōng】裂解的红细胞会影【yǐng】响测量【liàng】结果），称重后将【jiāng】组织剪【jiǎn】碎。将剪碎的组织与对应体积的【de】PBS（一般按1:9的重量体【tǐ】积比，比如1g的【de】组织样品对【duì】应【yīng】9mL的PBS，具体体积【jī】可根据实验需要适当调【diào】整，并做好记录。推荐【jiàn】在PBS中【zhōng】加【jiā】入蛋白酶抑制剂）加入玻【bō】璃匀浆【jiāng】器中【zhōng】，于【yú】冰上充分研【yán】磨。为了进一步裂解组【zǔ】织细胞【bāo】，可以对匀浆液进行【háng】超声破碎，或反【fǎn】复冻【dòng】融。最后将匀【yún】浆液【yè】于5000×g离心5~10分【fèn】钟，取上清检测。

4.细胞培养物【wù】上【shàng】清：请1000×g离心【xīn】20分【fèn】钟，取上清【qīng】即可检测，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但【dàn】应避免反复冻融。

5.其它生物标本：1000×g离心20分钟，取上清即可检测。

6.样品外观：样品应清澈透明，悬浮物应离心去除。

7.样品保存：样品收集后若在1周内【nèi】进【jìn】行检测的可保存于4℃，若不能及【jí】时检测【cè】，请按一次使用量分装，冻存【cún】于-20℃（1个月内【nèi】检测），或【huò】-80℃（6个月内检测），避免反复【fù】冻【dòng】融【róng】，标本【běn】溶血会影响【xiǎng】最后【hòu】检【jiǎn】测结【jié】果，因此溶血标本不宜进行此项检测。

注意事项：

1.严格按照【zhào】规定的时间和温度进行温育【yù】以【yǐ】保证准确结【jié】果。所有试【shì】剂都必须在使用前达到室温9-21℃。使用【yòng】后【hòu】立即冷【lěng】藏保存【cún】试剂。

2.洗板不【bú】正【zhèng】确可以【yǐ】导致不准【zhǔn】确的结【jié】果。在加入底物前确【què】保尽量吸干孔内液体。温【wēn】育过程中不要【yào】让微孔【kǒng】干燥掉。

3.消除板底残留的液体和手指印，否则影响OD值。

4.底物显色液【yè】应【yīng】呈无【wú】色或很浅的颜色，已【yǐ】经变蓝的底物液不【bú】能使用。

5.避免试剂和标本的交叉污染以免造成错误结果。

6.在储存和温育时避免强光直接照射。

7.平衡至室温后再打开密封袋以防水滴凝聚在冷板条上。

8.任何【hé】反应【yīng】试剂【jì】不能接触漂白溶剂或漂白溶【róng】剂所散【sàn】发的强烈气【qì】体。任何【hé】漂白成分都会破坏试【shì】剂盒中反应试剂的生物活性【xìng】。

9.不能使用过期产品。

10.如果可能传播【bō】疾病，所有【yǒu】的样品都应【yīng】管理好，按照【zhào】规定的程序处理样【yàng】品和【hé】检【jiǎn】测装置。

豚鼠表皮生长因子(EGF)试剂盒操作步骤：

1．从室【shì】温平【píng】衡60min后的【de】铝【lǚ】箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋【dài】密封放回4℃。

2．设置标准品孔【kǒng】和样本【běn】孔，标准品【pǐn】孔各加【jiā】不同浓度的标【biāo】准品【pǐn】50μL。

3．样本孔中a加入待测样本50μL；空白孔不加。

4．除【chú】空白孔外，标准品孔和样本孔【kǒng】中每孔【kǒng】加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封【fēng】板【bǎn】膜封住反【fǎn】应孔，37℃水浴【yù】锅或恒【héng】温箱【xiāng】温育60min。

5．弃去液体，吸水纸【zhǐ】上拍【pāi】干，每孔加满【mǎn】洗【xǐ】涤液（350μL），静置【zhì】1min，甩【shuǎi】去【qù】洗涤液，吸【xī】水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用【yòng】洗板机洗板【bǎn】）。

6．每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7．每孔【kǒng】加入终止液50μL，15min内【nèi】，在450nm波【bō】长处测定各【gè】孔的OD值。

实验结果计算：

绘制标准曲线：在Excel工作表【biǎo】中，以标【biāo】准品【pǐn】浓【nóng】度作横坐标，对应OD值作纵【zòng】坐【zuò】标，绘制【zhì】出标【biāo】准【zhǔn】品线性回归曲线【xiàn】，按曲线方程计算【suàn】各样本浓度值。

（此图仅供参考）

性能：

1. 检测范围：25 pg/mL – 800 pg/mL。

2.灵敏度：检测浓度小于1.0 pg/mL。

3.特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。

4.重复性：板内变异系数小于10% ，板间变【biàn】异【yì】系数小于15% 。

技术小提示：

1.当混合或重溶蛋白溶液时，尽量避免起沫。

2.为了【le】避免交叉感染，配置不同浓度标【biāo】准【zhǔn】品、上【shàng】样【yàng】、加不同试【shì】剂都需要更换【huàn】枪【qiāng】头。另外不同试剂请分别【bié】使用不同的移液槽。

3.每次孵育时，请正确使用封板胶可保证结果的准确性。

4.混合后的显色底物在上【shàng】板【bǎn】前【qián】应为【wéi】无【wú】色，请避光保存；假如微孔板【bǎn】后，将由物色【sè】变成不同深度的蓝色。

5.终止液上板顺序【xù】应【yīng】同显色底物【wù】上板顺序一致；加【jiā】入终【zhōng】止液后，孔内颜【yán】色由蓝变黄；若孔【kǒng】内有绿色，则表明孔内液【yè】体未混匀；请【qǐng】充分混合【hé】。

说明：

1.由于现有条【tiáo】件及科学【xué】技术【shù】水平尚不能对所【suǒ】有供货商提供的所有【yǒu】原料进行全面的【de】鉴定【dìng】与分析，本产品可能存【cún】在一定【dìng】的质量技术风【fēng】险。

2.最【zuì】终的实【shí】验结果与试剂的有效性【xìng】、实【shí】验者的相关操作以及当时【shí】的实【shí】验环境密切相关，请【qǐng】务必【bì】准【zhǔn】备充足【zú】的标本备份。

3.不【bú】同批次的同一产品可【kě】能【néng】会有【yǒu】少【shǎo】许差别，如：检测限、灵敏度【dù】以及显【xiǎn】色时间【jiān】等【děng】，请依据试剂盒内说明书进【jìn】行实【shí】验操【cāo】作，网站电子版说明书仅作参考。

4.只有全部使用本试剂盒配套试【shì】剂才能【néng】保证检测效果，不能混用其【qí】他制造商的【de】产【chǎn】品。只【zhī】有严格遵守本试剂【jì】盒【hé】的实验说【shuō】明才会得到最佳【jiā】的【de】检【jiǎn】测结果。