本试剂盒仅供体外研究使用，不用于临床诊断

本试剂盒用【yòng】于体【tǐ】外定【dìng】量检测血清、血浆、组织匀浆【jiāng】及相【xiàng】关液【yè】体样本中猪转录因子7样蛋白【bái】2(TCF7L2)的【de】含量。

有效期：6个月

保存条件：9-21℃

试剂盒组成：

备注：

1.（96T/48T）打开包装后请及时检查所有物品是否齐全。

2. 标【biāo】准品【pǐn】浓度【dù】依次为：800、400、200、100、50、25 pg/mL

3. 经过大量【liàng】正常标本【běn】检验，标本的正常浓度值【zhí】均在试剂盒提供的检【jiǎn】测【cè】范【fàn】围内【nèi】，实验【yàn】过【guò】程中直接取【qǔ】50μL样本上样即【jí】可。当有部分样【yàng】本值超过【guò】最大【dà】标准品浓度时，可用样本稀释液将标本进行适当稀释后【hòu】再进行【háng】实验。

猪转录因子7样蛋白2(TCF7L2)试剂盒检测前准备工作：

1.请提前20分钟从冰箱中取出试剂盒，平衡至室温。

2.从冰【bīng】箱【xiāng】中取【qǔ】出的浓缩洗涤液可能有结晶，属【shǔ】于正常现象；放置室【shì】温，轻摇均匀，待结【jié】晶【jīng】溶解后再【zài】配置洗涤【dí】液。可将20ml浓缩【suō】洗涤【dí】液用蒸馏水或去离子【zǐ】水稀释配【pèi】置成400ml工作浓度【dù】的洗涤液【yè】，未【wèi】用完的【de】放回4℃

3.20×洗涤缓冲液的稀【xī】释：蒸【zhēng】馏水按1：20稀释，即【jí】1份20×洗涤缓【huǎn】冲液加19份蒸馏水。

实验原理：

试剂盒采用双【shuāng】抗体【tǐ】一步夹【jiá】心法【fǎ】酶联免疫吸附【fù】试验（ELISA）。往预先【xiān】包被【bèi】猪转【zhuǎn】录【lù】因子7样蛋白2(TCF7L2)捕获【huò】抗【kàng】体的包被微孔中，依次加入标本、标【biāo】准【zhǔn】品【pǐn】、HRP标记【jì】的检【jiǎn】测抗体，经过温【wēn】育【yù】并洗【xǐ】涤。用【yòng】底物TMB显色，TMB在过氧【yǎng】化物酶的【de】催【cuī】化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品【pǐn】中【zhōng】的猪【zhū】转录【lù】因子7样蛋白2(TCF7L2)呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。

实验所需自备试验器材：

1.酶标仪（450nm）

2.高精度加【jiā】样器及【jí】枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3.37℃恒温箱

4.蒸馏水或去离子水

样本处理及要求：

1.血清：将【jiāng】收集于【yú】血清分离管的全血标本在室【shì】温【wēn】放置2小时或【huò】4℃过夜，然【rán】后1000×g离心20 分钟【zhōng】，取上【shàng】清即可【kě】，或将上【shàng】清置【zhì】于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

2.血浆：用【yòng】EDTA或肝素作【zuò】为抗凝剂【jì】采集【jí】标本【běn】，并将【jiāng】标本在采集【jí】后的30分钟内于9-21℃ 1000×g离心15分钟，取【qǔ】上清即【jí】可检测，或将上清置于-20℃或【huò】-80℃保【bǎo】存【cún】，但【dàn】应避免反复冻融。

3.组织匀浆：用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织，去除残【cán】留血液（匀【yún】浆中裂解【jiě】的红细胞会【huì】影响【xiǎng】测量结果），称【chēng】重后将【jiāng】组织【zhī】剪碎。将剪碎的组【zǔ】织与对【duì】应体积的【de】PBS（一般按1:9的重量体积比，比如1g的组【zǔ】织样品对应【yīng】9mL的PBS，具体体积【jī】可根据实验需要适当调【diào】整，并做好记录。推【tuī】荐在PBS中加入【rù】蛋【dàn】白酶抑制【zhì】剂）加入玻璃【lí】匀浆器中，于冰上充分研【yán】磨。为了进一步裂解组织细胞，可【kě】以对匀【yún】浆液进行超声【shēng】破碎，或反【fǎn】复冻融【róng】。最后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟【zhōng】，取上【shàng】清检测。

4.细胞培【péi】养物上清：请1000×g离心20分【fèn】钟，取【qǔ】上清即可检测【cè】，或将上清置于-20℃或-80℃保【bǎo】存，但应避免反复【fù】冻融。

5.其它生物标本：1000×g离心20分钟，取上清即可检测。

6.样品外观：样品应清澈透明，悬浮物应离心去除。

7.样品【pǐn】保存：样品收集后若在1周内进行【háng】检测的可保存于【yú】4℃，若不【bú】能及时检【jiǎn】测，请【qǐng】按一次【cì】使用量【liàng】分装，冻存于-20℃（1个月【yuè】内检测），或-80℃（6个月内检测），避免反复冻融，标【biāo】本【běn】溶【róng】血会影【yǐng】响【xiǎng】最后检测结【jié】果，因此溶血【xuè】标本不宜进【jìn】行此项检测。

猪转录因子7样蛋白2(TCF7L2)试剂盒注意事项：

1.严格按照规定的时间【jiān】和温度【dù】进行温育以保证准【zhǔn】确结果。所【suǒ】有试剂都必须【xū】在使用前达到室温【wēn】9-21℃。使【shǐ】用后立即【jí】冷藏保存试【shì】剂【jì】。

2.洗板不正确可以导致不准【zhǔn】确的结果。在加入【rù】底【dǐ】物【wù】前确【què】保尽量吸【xī】干孔【kǒng】内液体。温育过程中不要让微【wēi】孔干燥掉。

3.消除板底残留的液体和手指印，否则影响OD值。

4.底【dǐ】物显色液应【yīng】呈无色或很浅的颜色，已经变【biàn】蓝的【de】底物液不能使【shǐ】用。

5.避免试剂和标本的交叉污染以免造成错误结果。

6.在储存和温育时避免强光直接照射。

7.平衡至室温后再打开密封袋以防水滴凝聚在冷板条上。

8.任何反【fǎn】应试剂【jì】不能接触漂白溶【róng】剂或漂白溶【róng】剂所散发的强烈气体。任何漂【piāo】白【bái】成分【fèn】都会破【pò】坏试剂盒【hé】中反应试剂的生物活【huó】性。

9.不能使用过期产品。

10.如果可能传播疾病，所有的样品都【dōu】应管理好【hǎo】，按照规定【dìng】的程序处【chù】理样品和检测装【zhuāng】置。

操作步骤：

1．从室温平衡60min后【hòu】的铝箔袋中取出所需板条，剩【shèng】余板条用自【zì】封袋密【mì】封放回【huí】4℃。

2．设置【zhì】标准品孔和样本孔，标准【zhǔn】品孔【kǒng】各加不同浓度【dù】的【de】标【biāo】准品50μL。

3．样本孔中a加入待测样本50μL；空白孔不加。

4．除空【kōng】白【bái】孔外，标准品孔和【hé】样本孔中【zhōng】每孔加入辣根【gēn】过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应【yīng】孔【kǒng】，37℃水【shuǐ】浴锅【guō】或【huò】恒温箱温育60min。

5．弃去液体【tǐ】，吸水纸上拍干【gàn】，每孔加满【mǎn】洗涤液（350μL），静【jìng】置1min，甩去洗涤【dí】液，吸水【shuǐ】纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用【yòng】洗【xǐ】板【bǎn】机洗板）。

6．每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7．每孔加入终止液50μL，15min内，在【zài】450nm波长处测定各孔的【de】OD值。

实验结果计算：

绘制标准曲线：在Excel工作表中，以【yǐ】标【biāo】准品【pǐn】浓度作横坐标，对应OD值作纵坐【zuò】标【biāo】，绘制【zhì】出标【biāo】准品线【xiàn】性回归曲线【xiàn】，按曲线方程计算各样本浓【nóng】度【dù】值。

（此图仅供参考）

性能：

1. 检测范围：25 pg/mL – 800 pg/mL。

2.灵敏度：检测浓度小于1.0 pg/mL。

3.特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。

4.重复性：板内变异系数小【xiǎo】于10% ，板间【jiān】变异系数【shù】小于15% 。

技术小提示：

1.当混合或重溶蛋白溶液时，尽量避免起沫。

2.为了避免【miǎn】交叉感【gǎn】染，配【pèi】置不同【tóng】浓度【dù】标准品、上样、加不【bú】同试剂都需要更换枪头【tóu】。另外【wài】不同试剂请分别使用不同的移【yí】液槽。

3.每次孵育时，请正确使用封板胶可保证结果的准确性。

4.混合后的【de】显色【sè】底物在上板【bǎn】前应为无色，请避光保存【cún】；假如微孔【kǒng】板【bǎn】后，将由物色【sè】变成不同【tóng】深度的蓝色。

5.终止液上板【bǎn】顺序应同显【xiǎn】色底物上板【bǎn】顺【shùn】序一致；加【jiā】入终止液后，孔内颜色由蓝变黄；若孔内有绿色，则表【biǎo】明【míng】孔内液体未【wèi】混匀【yún】；请充【chōng】分混合。

说明：

1.由于现有条件及科学技【jì】术水【shuǐ】平尚不能对所有【yǒu】供【gòng】货商提【tí】供的所【suǒ】有原料【liào】进行全面的鉴【jiàn】定与分【fèn】析，本产品【pǐn】可能存在一定的质量技术风【fēng】险。

2.最终的实验【yàn】结果【guǒ】与试剂的有【yǒu】效【xiào】性、实【shí】验者的相关操作【zuò】以及当时的实验环境密切相关，请务【wù】必准备【bèi】充足的【de】标本【běn】备份。

3.不同批次的同【tóng】一【yī】产【chǎn】品可能会有少许差别，如：检测限、灵敏【mǐn】度以及显色时间等，请依据试剂【jì】盒内说明书进行实验【yàn】操作【zuò】，网站电子版说明【míng】书仅【jǐn】作参考【kǎo】。

4.只有全【quán】部使【shǐ】用本试剂盒配【pèi】套试【shì】剂才能保证检测效果，不能混用其【qí】他制【zhì】造商的产品。只有严【yán】格遵守本试【shì】剂【jì】盒的实验说明才会【huì】得到最【zuì】佳的【de】检测结果。