本试剂盒仅供体外研究使用，不用于临床诊断

本【běn】试剂盒【hé】用【yòng】于体外【wài】定量检测血清、血浆、组织匀浆及相【xiàng】关液体【tǐ】样本中猪组织蛋白【bái】酶G(CTSG)的含量。

有效期：6个月

保存条件：9-21℃

试剂盒组成：

备注：

1.（96T/48T）打开包装后请及时检查所有物品是否齐全。

2. 标准【zhǔn】品浓度依次为【wéi】：800、400、200、100、50、25 pg/mL

3. 经【jīng】过大量正【zhèng】常标本检验，标【biāo】本的正常浓度值均在试剂盒提供的【de】检【jiǎn】测范围内，实【shí】验过程中直接取【qǔ】50μL样本上样即可【kě】。当有部分样本【běn】值超过最【zuì】大标准品浓度时【shí】，可用样本稀【xī】释【shì】液将标【biāo】本进行适当稀释后【hòu】再进行实验。

猪组织蛋白酶G(CTSG)试剂盒检测前准备工作：

1.请提前20分钟从冰箱中取出试剂盒，平衡至室温。

2.从【cóng】冰箱中取出的浓缩洗涤液可能【néng】有结晶，属于【yú】正常现象；放置【zhì】室温，轻摇均【jun1】匀，待结晶溶解后再【zài】配置洗涤液。可将20ml浓缩洗【xǐ】涤液【yè】用蒸馏水【shuǐ】或去离子水【shuǐ】稀释配【pèi】置成400ml工作浓度的洗涤【dí】液【yè】，未用完的【de】放回【huí】4℃

3.20×洗涤缓【huǎn】冲液【yè】的稀释：蒸【zhēng】馏水按1：20稀释，即1份【fèn】20×洗涤缓冲液加19份蒸馏水。

实验原理：

试剂盒【hé】采用双抗体一步夹心【xīn】法酶联免疫吸附【fù】试验（ELISA）。往预先包被猪【zhū】组织蛋白酶G(CTSG)捕获抗体的包被微孔中【zhōng】，依次加入【rù】标本、标准品【pǐn】、HRP标【biāo】记的检测抗体，经过温育并洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶【méi】的催化【huà】下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色【sè】。颜色的深浅和样品【pǐn】中【zhōng】的猪【zhū】组织蛋白酶【méi】G(CTSG)呈【chéng】正相关。用酶【méi】标【biāo】仪在450nm 波【bō】长【zhǎng】下测定【dìng】吸光度【dù】（OD 值），计【jì】算样品浓度。

实验所需自备试验器材：

1.酶标仪（450nm）

2.高精度加【jiā】样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3.37℃恒温箱

4.蒸馏水或去离子水

样本处理及要求：

1.血清：将收【shōu】集于血清分离管的全血标本在室温放【fàng】置2小时【shí】或4℃过夜，然后1000×g离心20 分钟，取上清即可，或将【jiāng】上清【qīng】置于-20℃或-80℃保【bǎo】存【cún】，但应避免反复【fù】冻融。

2.血【xuè】浆：用EDTA或肝素作为抗凝剂采集标【biāo】本，并将【jiāng】标本在采集后的30分钟内于【yú】9-21℃ 1000×g离心15分钟，取上清即【jí】可检测，或将上清置于【yú】-20℃或【huò】-80℃保存【cún】，但应【yīng】避免【miǎn】反复冻【dòng】融。

3.组织【zhī】匀浆：用预【yù】冷【lěng】的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织，去除残留血液（匀浆中裂解的红细胞会【huì】影响【xiǎng】测量【liàng】结果），称重【chóng】后将组织【zhī】剪碎【suì】。将剪碎的组织与对【duì】应【yīng】体积【jī】的PBS（一般按1:9的重量【liàng】体积比，比【bǐ】如1g的组【zǔ】织样品对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要【yào】适【shì】当调整【zhěng】，并【bìng】做【zuò】好记录。推【tuī】荐在PBS中加入蛋白酶抑制【zhì】剂）加入玻璃匀浆器【qì】中，于【yú】冰上【shàng】充分研磨【mó】。为了进一步裂解组【zǔ】织细胞，可以对匀浆液进行超声破【pò】碎【suì】，或反复冻融。最后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟，取上清【qīng】检测。

4.细胞培养物上清：请1000×g离心20分钟，取【qǔ】上清即可检【jiǎn】测，或【huò】将上清【qīng】置于-20℃或-80℃保存，但【dàn】应【yīng】避【bì】免反复冻融。

5.其它生物标本：1000×g离心20分钟，取上清即可检测。

6.样品外观：样品应清澈透明，悬浮物应离心去除。

7.样品保存：样品收集后若在1周内进行检测的【de】可保【bǎo】存于4℃，若不【bú】能及时检测，请【qǐng】按【àn】一次使用量分装【zhuāng】，冻存于【yú】-20℃（1个月内检测【cè】），或-80℃（6个月内检【jiǎn】测），避免反复【fù】冻融，标本溶血会影【yǐng】响最后检测结果，因【yīn】此溶血标本不【bú】宜进行【háng】此项检测。

注意事项：

1.严【yán】格按照规定的时间和【hé】温【wēn】度进行【háng】温育以保【bǎo】证准确结果。所有试剂都必须【xū】在使用【yòng】前达【dá】到室温9-21℃。使用【yòng】后立【lì】即冷藏保存试剂。

2.洗板不正确【què】可以【yǐ】导致不【bú】准确的结果。在加入底物前【qián】确【què】保尽量吸干孔内液体。温育过程中不【bú】要【yào】让微【wēi】孔干燥掉【diào】。

3.消除板底残留的液体和手指印，否则影响OD值。

4.底物显色【sè】液应呈无色【sè】或很浅【qiǎn】的颜色，已经【jīng】变蓝的底物液不【bú】能使用。

5.避免试剂和标本的交叉污染以免造成错误结果。

6.在储存和温育时避免强光直接照射。

7.平衡至室温后再打开密封袋以防水滴凝聚在冷板条上。

8.任【rèn】何反应试剂不能接触【chù】漂白溶剂【jì】或漂白溶剂所散发的强烈气体。任何漂白【bái】成分都会破坏试剂【jì】盒中反应【yīng】试【shì】剂的生【shēng】物活性【xìng】。

9.不能使用过期产品。

10.如果可能传播【bō】疾病，所有的样品都应【yīng】管理【lǐ】好，按照规定的程序处理样【yàng】品【pǐn】和检【jiǎn】测装置。

猪组织蛋白酶G(CTSG)试剂盒操作步骤：

1．从室温【wēn】平衡60min后的铝箔袋中【zhōng】取【qǔ】出所需板条【tiáo】，剩余板【bǎn】条【tiáo】用自封袋密封放回4℃。

2．设置【zhì】标准【zhǔn】品孔和样本孔，标准【zhǔn】品孔各【gè】加不【bú】同浓度的标准【zhǔn】品50μL。

3．样本孔中a加入待测样本50μL；空白孔不加。

4．除空【kōng】白【bái】孔外，标准品孔和样本孔【kǒng】中每孔【kǒng】加入辣根过氧【yǎng】化【huà】物【wù】酶（HRP）标【biāo】记的检测抗体100μL，用封板【bǎn】膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒【héng】温箱温【wēn】育60min。

5．弃【qì】去液体【tǐ】，吸水【shuǐ】纸上拍干，每孔【kǒng】加满洗涤液（350μL），静置1min，甩【shuǎi】去洗涤液，吸【xī】水纸上拍干，如此重复洗板5次【cì】（也【yě】可用洗板【bǎn】机【jī】洗板）。

6．每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7．每孔加入终止液50μL，15min内【nèi】，在450nm波长处测【cè】定各孔的OD值。

实验结果计算：

绘制标准曲线：在Excel工【gōng】作【zuò】表中，以标准【zhǔn】品浓度作横坐标，对【duì】应OD值【zhí】作【zuò】纵坐标，绘制出【chū】标准品线性【xìng】回归曲线【xiàn】，按曲线方程计算各样【yàng】本浓度值。

（此图仅供参考）

性能：

1. 检测范围：25 pg/mL – 800 pg/mL。

2.灵敏度：检测浓度小于1.0 pg/mL。

3.特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。

4.重复性：板【bǎn】内变异系数小于10% ，板间变异系【xì】数【shù】小于15% 。

技术小提示：

1.当混合或重溶蛋白溶液时，尽量避免起沫。

2.为【wéi】了避免交叉感染【rǎn】，配【pèi】置不同浓【nóng】度【dù】标准品、上样、加不【bú】同试【shì】剂都需要更换枪头【tóu】。另外不同试剂请分别使【shǐ】用不同的移液槽【cáo】。

3.每次孵育时，请正确使用封板胶可保证结果的准确性。

4.混【hún】合后的显色底物在【zài】上板前【qián】应为无色，请避光保存【cún】；假如微孔板后，将由【yóu】物色变成【chéng】不同深度的【de】蓝色。

5.终止【zhǐ】液上【shàng】板顺【shùn】序应同显【xiǎn】色底物上板顺序一致；加【jiā】入终止液【yè】后，孔内颜色由蓝【lán】变黄；若孔内有绿色，则表【biǎo】明孔内液体【tǐ】未混匀；请【qǐng】充分混合。

说明：

1.由于【yú】现有条件及科学【xué】技【jì】术水平尚【shàng】不能对所【suǒ】有供货商提【tí】供的所有原料进【jìn】行全面的鉴定与分析，本产品可能【néng】存在一【yī】定的质【zhì】量技术【shù】风险。

2.最【zuì】终的实【shí】验结果与试【shì】剂的有效性【xìng】、实验者的相关操作以【yǐ】及当时的实验环【huán】境密切相关，请务【wù】必【bì】准备充足的【de】标本备份。

3.不【bú】同批次的同一产【chǎn】品可能会有少许差【chà】别，如：检【jiǎn】测限、灵【líng】敏度以及显色时间等，请依据试剂盒内说明书进行实验操作，网【wǎng】站【zhàn】电【diàn】子版说明【míng】书仅作参考。

4.只有全部使用本试剂盒配【pèi】套试【shì】剂才【cái】能保证检测效果，不能混用其他制【zhì】造商的【de】产品。只有严格遵【zūn】守本试【shì】剂盒的【de】实【shí】验说明【míng】才会得到最佳的检测【cè】结【jié】果。