本试剂盒仅供体外研究使用，不用于临床诊断

本试剂【jì】盒用于体外定量检测血清、血浆、组织【zhī】匀浆【jiāng】及相关液体【tǐ】样本【běn】中【zhōng】大【dà】鼠【shǔ】ELAV样蛋白1(ELAVL1)的含量。

有效期：6个月

保存条件：9-21℃

试剂盒组成：

备注：

1.（96T/48T）打开包装后请及时检查所有物品是否齐全。

2. 标准品浓度依次【cì】为：800、400、200、100、50、25 pg/mL

3. 经过大量正常标本检验【yàn】，标【biāo】本【běn】的正【zhèng】常浓【nóng】度值均【jun1】在试剂盒提供的检测范围【wéi】内，实验过程中直接取【qǔ】50μL样本【běn】上样【yàng】即可【kě】。当【dāng】有部分样【yàng】本值超【chāo】过最大标【biāo】准品浓度时，可用样本稀释液将标本进行适当稀【xī】释后再进行实验。

大鼠ELAV样蛋白1(ELAVL1)试剂盒检测前准备工作：

1.请提前20分钟从冰箱中取出试剂盒，平衡至室温。

2.从冰【bīng】箱中【zhōng】取出的浓缩洗涤液【yè】可能有【yǒu】结晶，属于正常现象；放置室温【wēn】，轻摇均匀【yún】，待【dài】结【jié】晶溶【róng】解后再【zài】配置洗涤液。可【kě】将【jiāng】20ml浓缩洗涤液用蒸馏水或去离子水稀释【shì】配置成【chéng】400ml工作浓度的洗【xǐ】涤液，未用【yòng】完的放回4℃

3.20×洗涤缓冲液的稀释【shì】：蒸馏水【shuǐ】按1：20稀释，即1份20×洗涤【dí】缓冲液加19份蒸馏水。

实验原理：

试剂【jì】盒采用双【shuāng】抗体一步夹心法酶【méi】联免疫【yì】吸附试验（ELISA）。往【wǎng】预先包被大鼠ELAV样蛋白1(ELAVL1)捕获抗【kàng】体的包被微孔【kǒng】中，依次加【jiā】入【rù】标本、标准品、HRP标记的检测抗体【tǐ】，经过【guò】温【wēn】育并洗涤。用底物【wù】TMB显色，TMB在【zài】过【guò】氧化物【wù】酶的催化【huà】下转化成蓝色，并【bìng】在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的大鼠ELAV样【yàng】蛋【dàn】白1(ELAVL1)呈【chéng】正相【xiàng】关。用酶【méi】标仪在450nm 波长下测定【dìng】吸光【guāng】度（OD 值），计【jì】算样品浓度。

实验所需自备试验器材：

1.酶标仪（450nm）

2.高精【jīng】度加样器及枪头【tóu】：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3.37℃恒温箱

4.蒸馏水或去离子水

样本处理及要求：

1.血【xuè】清：将收集于血清【qīng】分离【lí】管的【de】全血【xuè】标本在室【shì】温放置2小【xiǎo】时【shí】或4℃过夜，然后【hòu】1000×g离心20 分钟，取上清即可，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应【yīng】避免反复【fù】冻融。

2.血浆：用EDTA或肝【gān】素作【zuò】为抗凝剂采集标【biāo】本，并将标本在采集后的30分【fèn】钟【zhōng】内于9-21℃ 1000×g离心15分钟，取上清【qīng】即【jí】可检测，或将【jiāng】上清置【zhì】于-20℃或-80℃保【bǎo】存，但应【yīng】避免反复冻融。

3.组【zǔ】织匀浆：用预冷的【de】PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织，去除残留血液（匀浆中裂【liè】解的红细【xì】胞会影响测量结果【guǒ】），称重【chóng】后将组织【zhī】剪碎。将【jiāng】剪碎的组织与对应体积的PBS（一般按1:9的重量体积比，比如1g的组【zǔ】织样品对【duì】应【yīng】9mL的PBS，具体体积【jī】可根据实【shí】验需【xū】要【yào】适当调整，并做【zuò】好记录。推荐在PBS中加【jiā】入蛋【dàn】白【bái】酶抑制【zhì】剂）加入玻璃匀浆器中，于冰上充分【fèn】研磨。为【wéi】了进一步裂解组织细胞【bāo】，可以对匀浆液进行超声【shēng】破【pò】碎【suì】，或反复冻融。最后将匀【yún】浆【jiāng】液于5000×g离心5~10分钟，取上清检测【cè】。

4.细胞培【péi】养物上清：请1000×g离【lí】心20分【fèn】钟，取上清即可检测，或将上清【qīng】置于-20℃或-80℃保存【cún】，但【dàn】应避【bì】免反复冻融。

5.其它生物标本：1000×g离心20分钟，取上清即可检测。

6.样品外观：样品应清澈透明，悬浮物应离心去除。

7.样品保存：样【yàng】品收集后若在1周内进行【háng】检测的可保存于4℃，若不能【néng】及时检【jiǎn】测【cè】，请【qǐng】按一次使用【yòng】量分装，冻存于【yú】-20℃（1个月内【nèi】检测），或-80℃（6个月内检测），避免【miǎn】反复冻融【róng】，标本【běn】溶【róng】血【xuè】会影【yǐng】响最后检测结【jié】果，因此溶血标本不宜进行【háng】此项检测。

注意事项：

1.严格【gé】按照规定的时间和【hé】温度进行温育【yù】以保证准【zhǔn】确【què】结果。所有试剂都必须在使用前达【dá】到室温9-21℃。使用后立即【jí】冷【lěng】藏【cáng】保存试【shì】剂。

2.洗板不正确可以导【dǎo】致不准确的结果。在【zài】加入底【dǐ】物前确保【bǎo】尽量【liàng】吸干孔内液【yè】体。温育过程中不要让微【wēi】孔干燥掉【diào】。

3.消除板底残留的液体和手指印，否则影响OD值。

4.底物显色液应呈无【wú】色或很浅的颜【yán】色【sè】，已经变蓝的底物液【yè】不【bú】能【néng】使用。

5.避免试剂和标本的交叉污染以免造成错误结果。

6.在储存和温育时避免强光直接照射。

7.平衡至室温后再打开密封袋以防水滴凝聚在冷板条上。

8.任何【hé】反【fǎn】应试剂不能接触漂白【bái】溶剂【jì】或漂白溶剂所散发的强烈气【qì】体。任【rèn】何漂白成分【fèn】都会破坏试剂盒中【zhōng】反应【yīng】试剂【jì】的生物活性。

9.不能使用过期产品。

10.如果可能传【chuán】播疾病，所有的样品都应【yīng】管理好，按【àn】照规定的程序【xù】处【chù】理样品【pǐn】和检测装置。

大鼠ELAV样蛋白1(ELAVL1)试剂盒操作步骤：

1．从室温平衡60min后的铝箔【bó】袋中取出所需【xū】板条，剩余板【bǎn】条用自封袋密封【fēng】放【fàng】回4℃。

2．设【shè】置【zhì】标准品孔和样本孔，标准品【pǐn】孔【kǒng】各加不同浓【nóng】度的标准品50μL。

3．样本孔中a加入待测样本50μL；空白孔不加。

4．除【chú】空白孔外，标准品孔和样【yàng】本孔【kǒng】中每【měi】孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记【jì】的检测抗【kàng】体【tǐ】100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅【guō】或恒温箱温育【yù】60min。

5．弃去液体，吸水纸上拍【pāi】干，每孔【kǒng】加满洗涤液（350μL），静【jìng】置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍【pāi】干，如此重复洗板5次【cì】（也可用【yòng】洗板机【jī】洗板）。

6．每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7．每【měi】孔加入终止【zhǐ】液【yè】50μL，15min内【nèi】，在450nm波长处测【cè】定各孔的OD值。

实验结果计算：

绘制标准曲线：在Excel工作表中，以【yǐ】标准【zhǔn】品浓度作【zuò】横坐【zuò】标，对应【yīng】OD值作纵坐标，绘制出标准品线性回归曲线，按曲线方程计算各样本【běn】浓度值。

（此图仅供参考）

性能：

1. 检测范围：25 pg/mL – 800 pg/mL。

2.灵敏度：检测浓度小于1.0 pg/mL。

3.特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。

4.重复性：板内【nèi】变异系数【shù】小于10% ，板间【jiān】变异系【xì】数小于15% 。

技术小提示：

1.当混合或重溶蛋白溶液时，尽量避免起沫。

2.为了避免【miǎn】交叉感染，配置不同浓度【dù】标准品、上【shàng】样、加【jiā】不同试剂都需要更换【huàn】枪【qiāng】头。另外【wài】不同试剂请分别使用【yòng】不同的移液槽【cáo】。

3.每次孵育时，请正确使用封板胶可保证结果的准确性。

4.混合后的显色底物在上板前应【yīng】为【wéi】无【wú】色，请【qǐng】避光保【bǎo】存【cún】；假如【rú】微孔板【bǎn】后，将由物色变成不同深度的蓝色。

5.终止液上【shàng】板顺序应【yīng】同显色底物上板顺序一致；加【jiā】入终止液后，孔内颜色由【yóu】蓝变黄；若孔内【nèi】有绿【lǜ】色，则【zé】表明【míng】孔内液体未混匀【yún】；请充【chōng】分混合【hé】。

说明：

1.由于现有条件及科【kē】学技术水平【píng】尚不能对【duì】所有供货商提【tí】供的所有原料【liào】进【jìn】行【háng】全面的鉴定与【yǔ】分析，本【běn】产品可能存在一【yī】定的质【zhì】量技术风险。

2.最终【zhōng】的实验结果与试剂的有【yǒu】效【xiào】性、实验者的相关【guān】操作以及【jí】当时的实验环境密【mì】切相关，请务必【bì】准【zhǔn】备充足的标本【běn】备【bèi】份。

3.不同批次的【de】同一产品可【kě】能会【huì】有少许差别，如：检【jiǎn】测限、灵敏度以及显色【sè】时【shí】间等，请依据试剂【jì】盒内说【shuō】明书进行实【shí】验操作，网站【zhàn】电子版说明书仅作参考【kǎo】。

4.只有全部使用本【běn】试剂盒【hé】配套试【shì】剂才能保证【zhèng】检测效【xiào】果，不能混用其他制造商【shāng】的产品。只有严格遵守【shǒu】本试剂盒的实【shí】验说明才会【huì】得到最佳的检测【cè】结【jié】果。