本试剂盒仅供体外研究使用，不用于临床诊断

本试【shì】剂盒【hé】用【yòng】于体外【wài】定量检测血清【qīng】、血浆、组织匀浆及相关【guān】液体样本中大【dà】鼠A类清道夫受体3(SCARA3)的含量。

有效期：6个月

保存条件：9-21℃

试剂盒组成：

备注：

1.（96T/48T）打开包装后请及时检查所有物品是否齐全。

2. 标准【zhǔn】品浓【nóng】度依次为：800、400、200、100、50、25 pg/mL

3. 经过大量正【zhèng】常标本检验，标本的正常浓度值均在试剂盒【hé】提供的检测范【fàn】围内，实验过【guò】程中直接取【qǔ】50μL样【yàng】本上样即【jí】可。当有【yǒu】部分【fèn】样本值超过最大【dà】标【biāo】准品浓度时，可用样本稀释液将标本进行适【shì】当稀释后【hòu】再【zài】进行实验【yàn】。

大鼠A类清道夫受体3(SCARA3)试剂盒检测前准备工作：

1.请提前20分钟从冰箱中取出试剂盒，平衡至室温。

2.从冰箱中取出的浓【nóng】缩洗涤液可能【néng】有结晶，属于正常现【xiàn】象；放【fàng】置室温，轻摇均匀【yún】，待【dài】结晶溶解【jiě】后再配【pèi】置洗【xǐ】涤液。可将20ml浓缩【suō】洗【xǐ】涤液用蒸馏水或去离【lí】子水【shuǐ】稀释配【pèi】置成400ml工作浓【nóng】度【dù】的洗涤液，未用完的放回4℃

3.20×洗涤【dí】缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀【xī】释【shì】，即1份20×洗涤缓冲液加19份【fèn】蒸馏水【shuǐ】。

实验原理：

试剂盒采用双抗体一【yī】步夹心法酶【méi】联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被大鼠【shǔ】A类清道夫受【shòu】体3(SCARA3)捕获【huò】抗体的包被微【wēi】孔中，依次加【jiā】入标本、标准品、HRP标【biāo】记的检测抗体，经过【guò】温育并洗涤。用【yòng】底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下【xià】转化成蓝【lán】色，并【bìng】在【zài】酸【suān】的作用下转化【huà】成【chéng】最终【zhōng】的黄色。颜色的【de】深浅和样品中【zhōng】的大鼠A类【lèi】清道【dào】夫受【shòu】体【tǐ】3(SCARA3)呈正相关。用【yòng】酶标仪在450nm 波【bō】长下测定吸光度（OD 值），计算【suàn】样品浓【nóng】度。

实验所需自备试验器材：

1.酶标仪（450nm）

2.高【gāo】精度加【jiā】样器及【jí】枪【qiāng】头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3.37℃恒温箱

4.蒸馏水或去离子水

样本处理及要求：

1.血清：将【jiāng】收【shōu】集于【yú】血清分离管【guǎn】的全血标本在【zài】室温放置2小时或4℃过夜，然后1000×g离心【xīn】20 分钟【zhōng】，取【qǔ】上【shàng】清即可，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免【miǎn】反复冻融。

2.血浆：用EDTA或肝素作为抗凝剂采集标【biāo】本，并【bìng】将标本在采集后的30分钟内【nèi】于9-21℃ 1000×g离心【xīn】15分【fèn】钟，取【qǔ】上清即可检测【cè】，或将上清置于【yú】-20℃或【huò】-80℃保存，但应避免反【fǎn】复冻【dòng】融。

3.组【zǔ】织匀浆：用预【yù】冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织，去除【chú】残【cán】留血液（匀浆中裂解的红细胞会影响【xiǎng】测量结果），称重【chóng】后将组织剪碎。将剪碎的【de】组织与对应【yīng】体【tǐ】积的PBS（一般按1:9的重量体【tǐ】积比，比如1g的组织样品【pǐn】对应【yīng】9mL的【de】PBS，具体体积可根【gēn】据【jù】实验【yàn】需要适当调整，并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑【yì】制剂【jì】）加入玻璃【lí】匀浆器中，于冰上充【chōng】分研磨。为【wéi】了进一步裂解组织细胞，可以对匀【yún】浆液进【jìn】行超声破碎，或反复冻融。最【zuì】后将匀【yún】浆液于5000×g离心5~10分钟，取上清检测。

4.细胞培【péi】养物上【shàng】清：请【qǐng】1000×g离心20分钟【zhōng】，取上清【qīng】即可检【jiǎn】测，或将上清【qīng】置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

5.其它生物标本：1000×g离心20分钟，取上清即可检测。

6.样品外观：样品应清澈透明，悬浮物应离心去除。

7.样【yàng】品【pǐn】保存：样品收集后若在1周内进行检【jiǎn】测的可保存于【yú】4℃，若不能及时检测，请按一次使【shǐ】用量分装，冻存于【yú】-20℃（1个月内检测【cè】），或【huò】-80℃（6个月内【nèi】检测），避免【miǎn】反复冻融【róng】，标本溶血会影响最【zuì】后检测结果【guǒ】，因此溶血标本不宜进行【háng】此项检测。

注意事项：

1.严格按照规定的时【shí】间和温【wēn】度进行【háng】温育以【yǐ】保证【zhèng】准【zhǔn】确结果。所有试剂【jì】都必须在使用前达到室温【wēn】9-21℃。使用后立即冷藏保存试【shì】剂。

2.洗【xǐ】板【bǎn】不正确可【kě】以【yǐ】导致不准确的结果【guǒ】。在加入底物前【qián】确保尽量吸干孔内液体。温育过程【chéng】中不要让微【wēi】孔干【gàn】燥掉。

3.消除板底残留的液体和手指印，否则影响OD值。

4.底物显色液应呈【chéng】无【wú】色或很浅的颜色，已经变蓝【lán】的【de】底物液【yè】不能【néng】使用。

5.避免试剂和标本的交叉污染以免造成错误结果。

6.在储存和温育时避免强光直接照射。

7.平衡至室温后再打开密封袋以防水滴凝聚在冷板条上。

8.任【rèn】何反应试【shì】剂不能接触漂【piāo】白溶剂或漂白溶剂所散【sàn】发的【de】强烈气【qì】体。任何漂白成分都【dōu】会破【pò】坏【huài】试剂盒中反应【yīng】试剂的生物活性。

9.不能使用过期产品。

10.如果【guǒ】可能【néng】传播疾病，所【suǒ】有的样【yàng】品都应管理好，按照规定【dìng】的程序处理【lǐ】样品【pǐn】和检测装置。

大鼠A类清道夫受体3(SCARA3)试剂盒操作步骤：

1．从【cóng】室温平衡60min后【hòu】的铝【lǚ】箔袋中取出【chū】所需板条，剩余板条用自【zì】封【fēng】袋密封【fēng】放回4℃。

2．设置【zhì】标准品【pǐn】孔和【hé】样本孔，标准品孔各【gè】加【jiā】不同浓度的标准品50μL。

3．样本孔中a加入待测样本50μL；空白孔不加。

4．除空白【bái】孔外【wài】，标准品孔【kǒng】和样本孔中每孔加入辣根过氧【yǎng】化物酶【méi】（HRP）标记的【de】检测抗体100μL，用封【fēng】板膜封住反【fǎn】应孔，37℃水浴锅【guō】或恒【héng】温箱温育60min。

5．弃去液【yè】体【tǐ】，吸【xī】水纸上拍干，每孔加【jiā】满洗涤液【yè】（350μL），静置【zhì】1min，甩去洗涤【dí】液，吸水纸上拍干，如此【cǐ】重复洗板5次（也可用洗板【bǎn】机洗【xǐ】板）。

6．每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7．每孔【kǒng】加入终【zhōng】止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值【zhí】。

实验结果计算：

绘制标准曲线：在Excel工作表【biǎo】中，以标【biāo】准品【pǐn】浓度作横坐标，对应OD值作纵【zòng】坐【zuò】标，绘制【zhì】出【chū】标准品线性【xìng】回归曲线【xiàn】，按曲线方程计算【suàn】各样本浓度值。

（此图仅供参考）

性能：

1. 检测范围：25 pg/mL – 800 pg/mL。

2.灵敏度：检测浓度小于1.0 pg/mL。

3.特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。

4.重复【fù】性：板内变异【yì】系数小于【yú】10% ，板间变【biàn】异系数小于【yú】15% 。

技术小提示：

1.当混合或重溶蛋白溶液时，尽量避免起沫。

2.为了避免交【jiāo】叉感染，配置不同浓【nóng】度标准【zhǔn】品【pǐn】、上样、加不同试剂【jì】都【dōu】需【xū】要更换枪头。另外不同试剂请分别使用不同的移液【yè】槽。

3.每次孵育时，请正确使用封板胶可保证结果的准确性。

4.混合【hé】后的显色底物在上板前应为无【wú】色，请避光保存；假【jiǎ】如微【wēi】孔【kǒng】板【bǎn】后【hòu】，将由物【wù】色变成【chéng】不同深度的蓝色。

5.终止液上板顺序应同显【xiǎn】色底物上板顺序一致；加入终止液后，孔内【nèi】颜【yán】色由蓝变黄【huáng】；若孔【kǒng】内有绿【lǜ】色，则表明孔内液体未【wèi】混匀；请充分混【hún】合【hé】。

说明：

1.由于现有【yǒu】条件及科学【xué】技【jì】术水平尚不能对【duì】所有供货【huò】商提供的所有原料【liào】进行全面的鉴定与分【fèn】析【xī】，本产品可【kě】能存在一定的质量技【jì】术【shù】风险。

2.最终的实验结果与试剂的有效【xiào】性、实【shí】验者【zhě】的相关操作以【yǐ】及当时【shí】的实验环境密切相关，请【qǐng】务必准备【bèi】充足的标【biāo】本【běn】备【bèi】份。

3.不同批次【cì】的【de】同一【yī】产品可能会有少许差【chà】别【bié】，如【rú】：检测限、灵敏度以及显色时间等，请依【yī】据试剂盒内【nèi】说明书【shū】进行实验操作，网站【zhàn】电子版说明书仅作参考。

4.只有全【quán】部使用【yòng】本试剂【jì】盒【hé】配套试【shì】剂才能保证检测效果，不【bú】能混用【yòng】其他制造商的产品。只【zhī】有严格遵守本试剂盒【hé】的实验【yàn】说明才会得到最佳的检测【cè】结果。