本试剂盒仅供体外研究使用，不用于临床诊断

本试剂盒用于体【tǐ】外定【dìng】量检测血清、血浆、组织匀浆及相关液【yè】体【tǐ】样本中小鼠【shǔ】水通道蛋【dàn】白1(AQP1)的含量。

有效期：6个月

保存条件：9-21℃

试剂盒组成：

备注：

1.（96T/48T）打开包装后请及时检查所有物品是否齐全。

2. 标准品浓度依次为：800、400、200、100、50、25 pg/mL

3. 经过大量【liàng】正常【cháng】标本检【jiǎn】验，标本的正常浓【nóng】度值【zhí】均【jun1】在试剂盒提供【gòng】的检测范围内，实验过程中直接取50μL样本上样即可。当有部【bù】分样本值【zhí】超过最大标准品浓度时【shí】，可【kě】用样本稀释液将标本【běn】进行适当稀释后【hòu】再进行实【shí】验。

小鼠水通道蛋白1(AQP1)试剂盒检测前准备工作：

1.请提前20分钟从冰箱中取出试剂盒，平衡至室温。

2.从冰箱中取出【chū】的浓缩洗涤液可能有结晶，属于正常现象；放置室温【wēn】，轻摇均匀，待结晶溶解后【hòu】再【zài】配【pèi】置洗涤液【yè】。可将20ml浓缩洗【xǐ】涤液用蒸馏水或【huò】去【qù】离子水稀释配置【zhì】成400ml工作【zuò】浓度【dù】的洗涤【dí】液，未【wèi】用【yòng】完的放回4℃

3.20×洗涤缓【huǎn】冲液的稀释：蒸馏水【shuǐ】按1：20稀释【shì】，即1份20×洗涤【dí】缓冲液加【jiā】19份蒸【zhēng】馏水。

实验原理：

试剂盒采用双【shuāng】抗体一步夹【jiá】心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被小鼠水【shuǐ】通道蛋白1(AQP1)捕获【huò】抗【kàng】体的包被微孔中，依次【cì】加入标本、标准品【pǐn】、HRP标记【jì】的检【jiǎn】测【cè】抗体，经过温育并洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下【xià】转化成蓝色，并在酸的作用下【xià】转化成最终的黄【huáng】色。颜色的深【shēn】浅和样【yàng】品中的【de】小鼠水通道蛋白1(AQP1)呈【chéng】正相关。用酶标仪在450nm 波长【zhǎng】下【xià】测定吸【xī】光【guāng】度（OD 值），计【jì】算样【yàng】品浓度【dù】。

实验所需自备试验器材：

1.酶标仪（450nm）

2.高精【jīng】度加样器【qì】及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3.37℃恒温箱

4.蒸馏水或去离子水

样本处理及要求：

1.血【xuè】清：将收【shōu】集于血【xuè】清分离【lí】管的全血标本在【zài】室温放置2小时或4℃过夜，然后1000×g离【lí】心20 分钟，取【qǔ】上【shàng】清即可，或将上清置于【yú】-20℃或-80℃保【bǎo】存，但应避免反复冻融。

2.血浆：用【yòng】EDTA或肝素【sù】作为【wéi】抗凝剂采集标本，并将标本在采集后的【de】30分钟【zhōng】内于【yú】9-21℃ 1000×g离心15分钟，取上清即可检测，或【huò】将上清置【zhì】于【yú】-20℃或【huò】-80℃保存【cún】，但应避免反复冻融。

3.组【zǔ】织【zhī】匀浆：用预【yù】冷【lěng】的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织，去除残留血液（匀浆中裂解【jiě】的红【hóng】细胞会影【yǐng】响测量结果），称【chēng】重【chóng】后将组织剪碎。将剪碎的组【zǔ】织与对应体【tǐ】积的PBS（一般按1:9的重量体【tǐ】积比，比如1g的组织样品对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需【xū】要适当调整，并做好【hǎo】记录【lù】。推荐在PBS中加入蛋白酶【méi】抑制剂【jì】）加入玻【bō】璃匀浆器中，于【yú】冰上【shàng】充分研磨。为【wéi】了进一步裂解【jiě】组织细胞，可以【yǐ】对匀浆液【yè】进行【háng】超【chāo】声破【pò】碎【suì】，或反【fǎn】复冻【dòng】融【róng】。最后将匀浆液于5000×g离【lí】心5~10分钟，取【qǔ】上清检测【cè】。

4.细胞培养物上清：请1000×g离心【xīn】20分钟【zhōng】，取上清即可检测，或将上清置于-20℃或【huò】-80℃保存【cún】，但应【yīng】避免【miǎn】反复冻融。

5.其它生物标本：1000×g离心20分钟，取上清即可检测。

6.样品外观：样品应清澈透明，悬浮物应离心去除。

7.样品保存：样【yàng】品收集后【hòu】若在1周内进行检测的可保存于4℃，若不能及【jí】时检测，请按一次使用量分装，冻【dòng】存于-20℃（1个月内检测），或-80℃（6个月内检测），避免反【fǎn】复【fù】冻融【róng】，标【biāo】本【běn】溶血会影响最后检测结果，因此溶血标本【běn】不宜进行此项检测。

注意事项：

1.严格按【àn】照规定的时间和【hé】温【wēn】度进行温育以保【bǎo】证准确【què】结果【guǒ】。所有试剂都必须在使用【yòng】前达到【dào】室温9-21℃。使用后立即冷藏保存试剂【jì】。

2.洗板不【bú】正确可以导致不准确的结果。在【zài】加入底物前确保【bǎo】尽量吸【xī】干孔内液体【tǐ】。温育【yù】过程【chéng】中不要让微孔【kǒng】干燥掉。

3.消除板底残留的液体和手指印，否则影响OD值。

4.底物显【xiǎn】色【sè】液【yè】应呈无色或很浅的【de】颜色，已经【jīng】变蓝的底物液不能使用。

5.避免试剂和标本的交叉污染以免造成错误结果。

6.在储存和温育时避免强光直接照射。

7.平衡至室温后再打开密封袋以防水滴凝聚在冷板条上。

8.任何反应试剂不能接【jiē】触漂【piāo】白溶剂或漂白溶剂【jì】所【suǒ】散发的强烈气体。任何【hé】漂白成分【fèn】都会【huì】破坏试剂盒中【zhōng】反应【yīng】试剂的生物活性。

9.不能使用过期产品。

10.如果可能传播疾病，所有【yǒu】的样品【pǐn】都【dōu】应管理【lǐ】好，按【àn】照规定的程序处理样品和检测装置。

小鼠水通道蛋白1(AQP1)试剂盒操作步骤：

1．从室温平【píng】衡60min后的铝箔袋中取出【chū】所需板条，剩【shèng】余板条用自封【fēng】袋密【mì】封放【fàng】回4℃。

2．设置标【biāo】准品【pǐn】孔和样本孔【kǒng】，标准品孔各加不同浓度的标【biāo】准品【pǐn】50μL。

3．样本孔中a加入待测样本50μL；空白孔不加。

4．除空【kōng】白孔外，标准【zhǔn】品孔和样本孔中每孔加入辣【là】根过氧【yǎng】化物酶【méi】（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住【zhù】反应【yīng】孔，37℃水浴【yù】锅或恒温【wēn】箱温育【yù】60min。

5．弃去液体，吸水纸【zhǐ】上拍干，每孔加满【mǎn】洗【xǐ】涤液（350μL），静置1min，甩去洗涤液，吸水【shuǐ】纸上【shàng】拍干，如【rú】此【cǐ】重复洗板5次（也【yě】可用洗【xǐ】板【bǎn】机洗【xǐ】板）。

6．每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7．每孔加【jiā】入终【zhōng】止液50μL，15min内，在450nm波【bō】长处测【cè】定各孔的OD值。

实验结果计算：

绘制标准曲线：在Excel工作表中，以标【biāo】准品浓【nóng】度作横坐【zuò】标【biāo】，对【duì】应OD值作纵坐标，绘制出标【biāo】准品【pǐn】线性回归曲线，按曲线方【fāng】程计【jì】算各样本浓度值。

（此图仅供参考）

性能：

1. 检测范围：25 pg/mL – 800 pg/mL。

2.灵敏度：检测浓度小于1.0 pg/mL。

3.特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。

4.重复性【xìng】：板内变【biàn】异系数小于10% ，板间变异系【xì】数小于15% 。

技术小提示：

1.当混合或重溶蛋白溶液时，尽量避免起沫。

2.为了避免交叉感染【rǎn】，配置不同浓度标【biāo】准品【pǐn】、上【shàng】样、加不同试剂【jì】都需要更换枪头。另外不【bú】同试剂【jì】请分别使用不【bú】同【tóng】的移液槽。

3.每次孵育时，请正确使用封板胶可保证结果的准确性。

4.混合后的显色底物【wù】在【zài】上板【bǎn】前应为无色，请避光保存；假【jiǎ】如微孔板后【hòu】，将由物色变成不【bú】同深【shēn】度【dù】的蓝色。

5.终止【zhǐ】液【yè】上板顺序应同【tóng】显色【sè】底物上板顺序【xù】一致；加入终止液后，孔内颜色由蓝变【biàn】黄；若孔内有绿【lǜ】色，则表明孔内【nèi】液体未混匀；请充分【fèn】混【hún】合【hé】。

说明：

1.由于现有条件【jiàn】及科学【xué】技术水平尚不能对所有供【gòng】货商提【tí】供的所有原【yuán】料进行全面的鉴定【dìng】与分【fèn】析，本产品可【kě】能存在一【yī】定的质【zhì】量技术【shù】风险。

2.最终的实验【yàn】结果与【yǔ】试剂的有效性、实验者【zhě】的相关操作以及【jí】当时的【de】实验环境密【mì】切相关【guān】，请【qǐng】务必准备充足的标本备份【fèn】。

3.不同批次的同【tóng】一产品可能【néng】会有少许差别，如【rú】：检测【cè】限、灵【líng】敏【mǐn】度以及显色【sè】时间等【děng】，请依【yī】据试剂盒内说明书进行实验【yàn】操作，网站电子版说明书【shū】仅作参考。

4.只有【yǒu】全部使用【yòng】本试剂盒配套试【shì】剂才能【néng】保【bǎo】证检测效果，不【bú】能混【hún】用其他制造商的产品。只有【yǒu】严格遵守本试剂【jì】盒的实验说明才会得到最佳【jiā】的检【jiǎn】测结果。