大本试剂盒仅供体外研究使用，不用于临床诊断

本试剂盒用于体外【wài】定量检测【cè】血清、血【xuè】浆、组织【zhī】匀浆及相关液体样本中大鼠B类清道夫【fū】受体1(SCARB1)的含量。

有效期：6个月

保存条件：9-21℃

试剂盒组成：

备注：

1.（96T/48T）打开包装后请及时检查所有物品是否齐全。

2. 标准品浓【nóng】度依次为【wéi】：800、400、200、100、50、25 pg/mL

3. 经过大量正常标本检验，标【biāo】本的正【zhèng】常浓度【dù】值均在试【shì】剂盒提【tí】供的检测范围内，实验【yàn】过程中直接【jiē】取50μL样【yàng】本上样即可。当有【yǒu】部分【fèn】样【yàng】本值超【chāo】过最大标准品浓度时【shí】，可用样本【běn】稀释液将标【biāo】本进行适当稀释后【hòu】再进行实验。

大鼠B类清道夫受体1(SCARB1)试剂盒检测前准备工作：

1.请提前20分钟从冰箱中取出试剂盒，平衡至室温。

2.从冰箱【xiāng】中取出的浓缩洗涤液可能有结晶，属于正常【cháng】现象；放置室温【wēn】，轻摇均匀，待【dài】结【jié】晶溶解后再【zài】配置洗涤液。可将20ml浓缩【suō】洗涤【dí】液用蒸馏水或去【qù】离子【zǐ】水稀【xī】释配置成400ml工作浓度的洗涤液，未用完的放【fàng】回【huí】4℃

3.20×洗涤缓冲液【yè】的稀【xī】释【shì】：蒸馏水按1：20稀【xī】释，即1份20×洗涤【dí】缓冲液加【jiā】19份蒸馏水。

实验原理：

试剂盒采用【yòng】双抗体一步夹心法酶联【lián】免疫吸附试【shì】验【yàn】（ELISA）。往预先包【bāo】被大【dà】鼠【shǔ】B类清道夫【fū】受体1(SCARB1)捕获抗体的包被微孔中【zhōng】，依次加【jiā】入标本、标准品、HRP标记的【de】检测【cè】抗体，经过【guò】温【wēn】育并洗涤。用【yòng】底物【wù】TMB显【xiǎn】色【sè】，TMB在过氧化物【wù】酶的催【cuī】化下转化成【chéng】蓝色，并【bìng】在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的大鼠B类【lèi】清【qīng】道夫受体1(SCARB1)呈正相【xiàng】关。用【yòng】酶标仪在450nm 波长【zhǎng】下测定吸光度（OD 值），计算样【yàng】品浓度。

实验所需自备试验器材：

1.酶标仪（450nm）

2.高精度【dù】加样器及【jí】枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3.37℃恒温箱

4.蒸馏水或去离子水

样本处理及要求：

1.血清：将收集【jí】于【yú】血清分离管的全血【xuè】标本在室温放置2小时或4℃过夜，然后1000×g离心20 分钟，取上清【qīng】即可，或【huò】将上清置【zhì】于-20℃或-80℃保存【cún】，但应【yīng】避免【miǎn】反复冻融。

2.血浆：用EDTA或肝素作为抗凝剂【jì】采【cǎi】集标本，并将标本在采【cǎi】集【jí】后的30分钟【zhōng】内于9-21℃ 1000×g离心15分钟，取【qǔ】上清即可检测，或【huò】将上【shàng】清【qīng】置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻【dòng】融。

3.组织匀浆：用预【yù】冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗【xǐ】组织，去除残【cán】留【liú】血液（匀浆中【zhōng】裂解的红【hóng】细胞会影响测【cè】量结果），称重【chóng】后【hòu】将【jiāng】组织【zhī】剪碎。将【jiāng】剪碎的组织与对应体积的PBS（一般按1:9的重量体积比，比【bǐ】如【rú】1g的组织样品【pǐn】对【duì】应9mL的PBS，具体【tǐ】体积可根【gēn】据【jù】实验需要【yào】适当调整，并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白【bái】酶抑制【zhì】剂）加入玻璃匀浆器【qì】中，于冰上【shàng】充分研磨【mó】。为【wéi】了进一步【bù】裂解组【zǔ】织细胞，可以对【duì】匀浆液进行超声破碎，或反复【fù】冻【dòng】融。最后将匀浆【jiāng】液于【yú】5000×g离心5~10分钟，取上清检测【cè】。

4.细【xì】胞培养物上清：请1000×g离心20分钟，取上【shàng】清即可检【jiǎn】测，或将上清置于-20℃或-80℃保【bǎo】存，但应避免反复【fù】冻融。

5.其它生物标本：1000×g离心20分钟，取上清即可检测。

6.样品外观：样品应清澈透明，悬浮物应离心去除。

7.样品保存【cún】：样品【pǐn】收【shōu】集后若在1周内进行检测【cè】的可保存于4℃，若不【bú】能及时检测，请按一次使用量【liàng】分【fèn】装，冻存【cún】于-20℃（1个【gè】月内检测），或-80℃（6个月内检【jiǎn】测【cè】），避免反复冻融，标【biāo】本【běn】溶【róng】血会影响最后检【jiǎn】测结果，因【yīn】此溶血【xuè】标本不宜进行此项检测。

大鼠B类清道夫受体1(SCARB1)试剂盒注意事项：

1.严格按照规【guī】定的时间和温度进行温育以【yǐ】保【bǎo】证准【zhǔn】确结果。所有试剂都必须在使用【yòng】前达到【dào】室【shì】温9-21℃。使用后立【lì】即【jí】冷【lěng】藏保存试剂。

2.洗【xǐ】板不正【zhèng】确【què】可以导致不准确的结果。在【zài】加【jiā】入底物前确保尽量吸干孔内【nèi】液体【tǐ】。温育过【guò】程中【zhōng】不要让微孔干燥掉。

3.消除板底残留的液体和手指印，否则影响OD值。

4.底物显【xiǎn】色液应呈无色或很浅【qiǎn】的颜色，已经【jīng】变【biàn】蓝【lán】的底物液不能使用。

5.避免试剂和标本的交叉污染以免造成错误结果。

6.在储存和温育时避免强光直接照射。

7.平衡至室温后再打开密封袋以防水滴凝聚在冷板条上。

8.任【rèn】何反应【yīng】试剂不【bú】能接【jiē】触漂【piāo】白【bái】溶剂或漂【piāo】白溶【róng】剂所散发的强烈气体。任【rèn】何漂白成分都会【huì】破坏试剂盒中反应试剂的生物活性。

9.不能使用过期产品。

10.如果可能传【chuán】播【bō】疾病，所【suǒ】有的样品都【dōu】应管理好，按照【zhào】规定的程序处【chù】理样品和检测装置。

操作步骤：

1．从室温平衡60min后的铝箔袋【dài】中取出所需板条，剩余【yú】板条用【yòng】自【zì】封袋【dài】密封放回4℃。

2．设置标准品孔和样本【běn】孔，标【biāo】准品孔【kǒng】各【gè】加不同浓度的标准品50μL。

3．样本孔中a加入待测样本50μL；空白孔不加。

4．除空白孔外，标准品孔和样【yàng】本孔【kǒng】中【zhōng】每孔加入辣根【gēn】过氧化物酶（HRP）标【biāo】记的检测抗【kàng】体100μL，用封板膜封住反【fǎn】应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育【yù】60min。

5．弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液【yè】（350μL），静置1min，甩去洗涤液【yè】，吸【xī】水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗【xǐ】板机【jī】洗【xǐ】板）。

6．每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7．每孔加入【rù】终止液50μL，15min内【nèi】，在450nm波长处【chù】测定各【gè】孔的OD值【zhí】。

实验结果计算：

绘制标准曲线：在Excel工作表【biǎo】中，以标准品浓度作横坐标，对应OD值【zhí】作纵坐【zuò】标【biāo】，绘制出【chū】标准品线性回【huí】归曲线，按曲线【xiàn】方程计算各样本浓度值。

（此图仅供参考）

性能：

1. 检测范围：25 pg/mL – 800 pg/mL。

2.灵敏度：检测浓度小于1.0 pg/mL。

3.特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。

4.重复性：板【bǎn】内变异【yì】系数小于10% ，板间变异系数小于【yú】15% 。

技术小提示：

1.当混合或重溶蛋白溶液时，尽量避免起沫。

2.为了避【bì】免交叉感染，配置不同浓度标准【zhǔn】品、上样、加不同试剂【jì】都需要【yào】更【gèng】换枪头【tóu】。另外不同试剂【jì】请分别使用不同【tóng】的移【yí】液槽。

3.每次孵育时，请正确使用封板胶可保证结果的准确性。

4.混合后的【de】显色【sè】底物在上板【bǎn】前应【yīng】为无色，请避光保存；假【jiǎ】如微孔板后，将由【yóu】物色变成不【bú】同深【shēn】度的蓝色。

5.终止【zhǐ】液上【shàng】板顺序应同显色底物上板顺【shùn】序一【yī】致；加入终止液后，孔内颜色【sè】由蓝变【biàn】黄；若孔【kǒng】内有绿色，则表明孔【kǒng】内液体【tǐ】未混匀；请充分混合。

说明：

1.由于现有条件及【jí】科【kē】学技术水平尚【shàng】不能对所有供货商提【tí】供的所有原料进行【háng】全面的鉴定与分析，本【běn】产品可能【néng】存在【zài】一【yī】定的质量技术【shù】风险【xiǎn】。

2.最终的实验结果【guǒ】与试【shì】剂的有效【xiào】性【xìng】、实验者的【de】相关操作以【yǐ】及当时【shí】的实验环境密切相关，请务必准备充【chōng】足【zú】的标本备份。

3.不同批次的【de】同一【yī】产品可能会有少许差别，如：检【jiǎn】测限、灵敏【mǐn】度以及【jí】显【xiǎn】色时间【jiān】等，请依据【jù】试剂盒内说明书进行实验操作，网站电【diàn】子版【bǎn】说明【míng】书仅作【zuò】参考。

4.只有【yǒu】全部使用本试剂盒【hé】配套试剂才能【néng】保【bǎo】证检测效【xiào】果，不能混用其【qí】他制造商的产品。只有严格遵守本试剂盒的实验说明【míng】才会得【dé】到【dào】最佳的检测【cè】结果【guǒ】。