本试剂盒仅供体外研究使用，不用于临床诊断本试剂盒用于体【tǐ】外定量检测血清、血浆、组【zǔ】织【zhī】匀浆【jiāng】及相【xiàng】关液体样本中人6酮前列腺【xiàn】素【sù】F1a(6-keto-PGF1a)的含量。

有效期：6个月

保存条件：9-21℃

试剂盒组成：

备注：

1.（96T/48T）打开包装后请及时检查所有物品是否齐全。

2. 标准【zhǔn】品【pǐn】浓度依次为：800、400、200、100、50、25 pg/mL

3. 经过大量【liàng】正常标本检验，标本的正常浓度【dù】值均在试剂盒【hé】提【tí】供【gòng】的检【jiǎn】测【cè】范【fàn】围内，实验过程中直接取50μL样【yàng】本上样即可。当有部分样本【běn】值【zhí】超过最大【dà】标【biāo】准品浓度时，可用样本稀释液将标本进【jìn】行适【shì】当稀释后再进【jìn】行实验。

人【rén】6酮前列腺素【sù】F1a(6-keto-PGF1a)试剂盒检测前【qián】准备工【gōng】作：

1.请提前20分钟从冰箱中取出试剂盒，平衡至室温。

2.从【cóng】冰箱中取出的浓缩洗涤液可能有结晶，属【shǔ】于正常现【xiàn】象【xiàng】；放置室温【wēn】，轻摇均匀，待结【jié】晶【jīng】溶【róng】解后再配置洗涤液。可将【jiāng】20ml浓缩洗涤液用【yòng】蒸馏水或去离子水【shuǐ】稀【xī】释配置成【chéng】400ml工作浓【nóng】度的洗涤【dí】液，未用完的放回4℃

3.20×洗涤缓【huǎn】冲液的稀释：蒸【zhēng】馏水【shuǐ】按1：20稀释，即1份20×洗涤缓冲液【yè】加19份蒸馏水。

实验原理：

试【shì】剂盒采用双【shuāng】抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验【yàn】（ELISA）。往预先包被人6酮前【qián】列腺素F1a(6-keto-PGF1a)捕【bǔ】获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准【zhǔn】品、HRP标【biāo】记的检测【cè】抗体，经过温育【yù】并洗【xǐ】涤。用【yòng】底物TMB显色，TMB在【zài】过氧化物酶的催化下转化成【chéng】蓝色，并在【zài】酸【suān】的作用【yòng】下转化【huà】成最终的黄色。颜色的深【shēn】浅和样【yàng】品中的人6酮前【qián】列腺素F1a(6-keto-PGF1a)呈正相关。用酶【méi】标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。

实验所需自备试验器材：

1.酶标仪（450nm）

2.高精【jīng】度加【jiā】样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3.37℃恒温箱

4.蒸馏水或去离子水

样本处理及要求：

1.血清：将收集【jí】于【yú】血清分离管的全【quán】血【xuè】标本【běn】在室温放置2小时或4℃过夜，然后1000×g离心20 分钟，取上清即可，或【huò】将上清置于-20℃或-80℃保存【cún】，但应避免【miǎn】反复冻融。

2.血浆：用EDTA或肝素【sù】作为抗凝剂【jì】采【cǎi】集标【biāo】本【běn】，并将【jiāng】标本在采集【jí】后的30分钟内于9-21℃ 1000×g离【lí】心15分钟，取【qǔ】上【shàng】清即【jí】可检测，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避【bì】免反复冻融。

3.组织匀浆【jiāng】：用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织【zhī】，去除残留【liú】血液（匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果），称重【chóng】后将组织剪碎。将剪碎的组织与【yǔ】对【duì】应体积的PBS（一【yī】般按1:9的重量体积比，比如1g的组【zǔ】织【zhī】样品对应9mL的【de】PBS，具体体积【jī】可根据【jù】实【shí】验需【xū】要【yào】适当【dāng】调整【zhěng】，并做好记录。推【tuī】荐在PBS中加入【rù】蛋白酶抑制剂【jì】）加入玻璃【lí】匀浆【jiāng】器中，于冰上充分研【yán】磨【mó】。为了进【jìn】一步裂解【jiě】组【zǔ】织细【xì】胞，可以对匀浆液进行超【chāo】声破碎，或【huò】反复冻融。最后将匀浆液【yè】于5000×g离心5~10分钟，取上清【qīng】检测。

4.细【xì】胞培【péi】养物上清：请1000×g离心20分钟，取上清即可检【jiǎn】测，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避【bì】免反复【fù】冻【dòng】融。

5.其它生物标本：1000×g离心20分钟，取上清即可检测。

6.样品外观：样品应清澈透明，悬浮物应离心去除。

7.样品保存【cún】：样品收集后若在1周内进【jìn】行检测的可保存于【yú】4℃，若不【bú】能及时检测【cè】，请按一次使用量分装，冻【dòng】存于-20℃（1个月内检测），或-80℃（6个【gè】月【yuè】内检测），避免反【fǎn】复【fù】冻【dòng】融，标本溶血【xuè】会影响最后检测结果，因此【cǐ】溶血标本不宜进行此项【xiàng】检测。

人6酮前列腺素F1a(6-keto-PGF1a)试【shì】剂【jì】盒【hé】注意事项：

1.严格按照规定的时间和温度进行温【wēn】育以保证准确结果。所【suǒ】有【yǒu】试剂【jì】都【dōu】必须在使用前达到室【shì】温【wēn】9-21℃。使【shǐ】用后立即冷藏保【bǎo】存试剂。

2.洗板不正确可以导【dǎo】致【zhì】不【bú】准确【què】的结果。在加入底物前确保尽量吸干孔内液体。温育过程中不要让微孔【kǒng】干燥掉【diào】。

3.消除板底残留的液体和手指印，否则影响OD值。

4.底物【wù】显【xiǎn】色液应呈无色或很浅【qiǎn】的颜【yán】色，已经变蓝的【de】底物液不能使用。

5.避免试剂和标本的交叉污染以免造成错误结果。

6.在储存和温育时避免强光直接照射。

7.平衡至室温后再打开密封袋以防水滴凝聚在冷板条上。

8.任【rèn】何反应试剂【jì】不能接触漂白溶【róng】剂【jì】或【huò】漂【piāo】白溶剂所散发的强烈气体。任何漂白成【chéng】分都会破【pò】坏试剂盒中反应试剂的【de】生物活性。

9.不能使用过期产品。

10.如果可能传播疾病，所【suǒ】有的样品都应管理好，按照规定的程序【xù】处理样【yàng】品和检测【cè】装置【zhì】。

操作步骤：

1．从室温【wēn】平衡60min后的铝箔【bó】袋中取出所需板条，剩余【yú】板【bǎn】条用自封袋【dài】密封放回【huí】4℃。

2．设置【zhì】标准品孔和样本孔，标准【zhǔn】品【pǐn】孔各加不同浓度的标准【zhǔn】品50μL。

3．样本孔中a加入待测样本50μL；空白孔不加。

4．除空白孔外，标准【zhǔn】品孔和样【yàng】本孔中【zhōng】每孔加入【rù】辣根过氧【yǎng】化物酶（HRP）标记的检测抗【kàng】体【tǐ】100μL，用封板膜封住反应【yīng】孔，37℃水浴锅或【huò】恒温箱温【wēn】育60min。

5．弃去【qù】液【yè】体【tǐ】，吸水纸上拍【pāi】干，每孔加满洗涤【dí】液（350μL），静置【zhì】1min，甩去【qù】洗涤液，吸水纸上拍干【gàn】，如此重【chóng】复洗板5次（也可用洗板机洗板）。

6．每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7．每孔加入【rù】终止液【yè】50μL，15min内，在【zài】450nm波【bō】长处测定各孔的OD值。

实验结果计算：

绘制标准曲线：在Excel工作表中，以标准【zhǔn】品浓度作横坐标，对应【yīng】OD值【zhí】作纵坐标【biāo】，绘制出【chū】标准品【pǐn】线性回归曲【qǔ】线，按曲线方程计算各样本浓度值。

（此图仅供参考）

性能：

1. 检测范围：25 pg/mL – 800 pg/mL。

2.灵敏度：检测浓度小于1.0 pg/mL。

3.特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。

4.重【chóng】复【fù】性：板内变异系【xì】数小【xiǎo】于10% ，板间变异系数小于【yú】15% 。

技术小提示：

1.当混合或重溶蛋白溶液时，尽量避免起沫。

2.为了避免交【jiāo】叉感染，配置【zhì】不同浓度标准品、上样【yàng】、加不同试剂都需要更换【huàn】枪头【tóu】。另外不同试剂请【qǐng】分别使用不同的【de】移液槽。

3.每次孵育时，请正确使用封板胶可保证结果的准确性。

4.混合【hé】后的显色底物【wù】在上板前应为无色，请【qǐng】避光保存；假如微【wēi】孔板后，将【jiāng】由【yóu】物色【sè】变成【chéng】不同深度的蓝色。

5.终止【zhǐ】液【yè】上板顺序应【yīng】同显色底物上板【bǎn】顺序一致；加入终止液后，孔内颜色由蓝变黄；若孔内【nèi】有绿色【sè】，则表【biǎo】明孔内【nèi】液【yè】体未混匀；请充分混合。

说明：

1.由【yóu】于现有条件及科学技【jì】术【shù】水平尚不能对【duì】所有供货商提【tí】供的所有【yǒu】原料进行全面【miàn】的鉴定【dìng】与分析，本产品可能存在一定的【de】质【zhì】量技术【shù】风险。

2.最终的实验结果与试剂【jì】的有【yǒu】效性、实验者【zhě】的相关操作【zuò】以及当【dāng】时的实验环【huán】境【jìng】密切相关，请务【wù】必【bì】准备充足的标本备【bèi】份。

3.不同批次【cì】的同一产品可能【néng】会有少许【xǔ】差别【bié】，如：检测限、灵敏度【dù】以及显【xiǎn】色时间等，请依据【jù】试剂【jì】盒内说【shuō】明书进【jìn】行实验操作，网【wǎng】站电子版说明书仅作【zuò】参考。

4.只有全部使【shǐ】用本试剂盒配套试剂才能【néng】保证检测【cè】效果，不能混用其他【tā】制【zhì】造【zào】商的产品。只【zhī】有严格遵守【shǒu】本【běn】试剂盒的【de】实验说明才【cái】会得到最佳的检【jiǎn】测结果。