本试剂盒仅供体外研究使用，不用于临床诊断

本试剂盒【hé】用于体外定量检测血清、血【xuè】浆【jiāng】、组织【zhī】匀浆及【jí】相关液【yè】体【tǐ】样本中鸡β干【gàn】扰素(IFN-β)的含量。

有效期：6个月

保存条件：9-21℃

试剂盒组成：

备注：

1.（96T/48T）打开包装后请及时检查所有物品是否齐全。

2. 标准品浓度依次【cì】为：800、400、200、100、50、25 pg/mL

3. 经过大量正常【cháng】标本【běn】检验，标本的【de】正常浓【nóng】度【dù】值均在试剂盒提供的检测范围【wéi】内，实验过程中【zhōng】直【zhí】接取50μL样本上样即可。当【dāng】有部分样本值超过最大标【biāo】准【zhǔn】品浓度时，可用样本稀释液将标本进行适当稀释后再【zài】进行【háng】实验【yàn】。

检测前准备工作：

1.请提前20分钟从冰箱中取出试剂盒，平衡至室温。

2.从冰箱【xiāng】中【zhōng】取出的浓缩【suō】洗涤液可能有结晶【jīng】，属于正常现【xiàn】象；放置室温，轻摇均匀【yún】，待结晶溶解【jiě】后再【zài】配置洗【xǐ】涤【dí】液。可将20ml浓缩洗涤【dí】液用蒸馏水或去离子水稀释配【pèi】置成【chéng】400ml工【gōng】作浓度的洗涤【dí】液，未用完的放回【huí】4℃

3.20×洗涤【dí】缓冲【chōng】液的稀【xī】释【shì】：蒸馏水按【àn】1：20稀释，即1份20×洗涤缓冲液加19份蒸馏水。

实验原理：

试剂盒【hé】采用双抗体【tǐ】一步夹【jiá】心【xīn】法酶【méi】联免疫吸附【fù】试验【yàn】（ELISA）。往预先包被鸡β干扰素(IFN-β)捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本【běn】、标【biāo】准【zhǔn】品【pǐn】、HRP标记的检【jiǎn】测抗体，经过温【wēn】育并洗涤【dí】。用底【dǐ】物TMB显色【sè】，TMB在过氧化物酶的【de】催化【huà】下【xià】转化成蓝色，并在酸的作用【yòng】下【xià】转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的鸡β干【gàn】扰素(IFN-β)呈正相关。用酶标仪【yí】在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算【suàn】样品浓度。

实验所需自备试验器材：

1.酶标仪（450nm）

2.高【gāo】精度加样器【qì】及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3.37℃恒温箱

4.蒸馏水或去离子水

样本处理及要求：

1.血【xuè】清：将收集【jí】于血【xuè】清【qīng】分离管的全血标本在室温放置2小时或4℃过夜，然后1000×g离心20 分钟【zhōng】，取【qǔ】上清【qīng】即可，或将上【shàng】清置【zhì】于-20℃或【huò】-80℃保存，但【dàn】应避免反复冻融。

2.血浆：用EDTA或肝素作【zuò】为抗凝剂采集【jí】标本【běn】，并【bìng】将标【biāo】本在采集后的30分钟【zhōng】内【nèi】于9-21℃ 1000×g离心【xīn】15分钟【zhōng】，取【qǔ】上清即可检测【cè】，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

3.组织匀浆：用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗【xǐ】组织，去除【chú】残【cán】留血液（匀浆中【zhōng】裂【liè】解的红细胞会影响测量结果），称重后【hòu】将组织剪碎。将【jiāng】剪碎【suì】的组【zǔ】织与对应体积的PBS（一般按1:9的重量【liàng】体积比，比如【rú】1g的组织样【yàng】品对【duì】应9mL的【de】PBS，具【jù】体体积可根据实验需要适当调整，并做【zuò】好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶【méi】抑制剂）加入【rù】玻璃匀浆【jiāng】器中，于冰上充分【fèn】研磨。为了进一【yī】步裂解组织细胞，可以【yǐ】对匀浆液进行超声破碎，或反复冻融。最【zuì】后将匀【yún】浆【jiāng】液于5000×g离心【xīn】5~10分钟，取上清检【jiǎn】测。

4.细【xì】胞培养物上清：请1000×g离心20分【fèn】钟，取上清即可【kě】检测【cè】，或将上清置于-20℃或-80℃保存【cún】，但应【yīng】避免反复【fù】冻融。

5.其它生物标本：1000×g离心20分钟，取上清即可检测。

6.样品外观：样品应清澈透明，悬浮物应离心去除。

7.样品【pǐn】保存：样品收集【jí】后【hòu】若在1周【zhōu】内进行检测【cè】的【de】可保存于4℃，若不【bú】能及时检测，请按【àn】一【yī】次【cì】使用量分装，冻存于-20℃（1个【gè】月【yuè】内检测），或-80℃（6个月内检测【cè】），避免反复冻融，标本溶【róng】血会影响最后检测结果，因此溶血【xuè】标本不宜进行此项检测。

注意事项：

1.严格按【àn】照规【guī】定的时间和温度【dù】进行【háng】温育以保证准确结果。所【suǒ】有试剂都必须【xū】在使用前达到室温9-21℃。使用后立即【jí】冷藏保【bǎo】存试剂。

2.洗板不正确可以导致【zhì】不【bú】准确【què】的【de】结果。在【zài】加入底物【wù】前确保尽量吸干孔【kǒng】内液体。温育过程中不要让【ràng】微孔干燥掉。

3.消除板底残留的液体和手指印，否则影响OD值。

4.底物显色液应呈无色或很浅【qiǎn】的颜【yán】色，已经变蓝的底物液不【bú】能【néng】使用【yòng】。

5.避免试剂和标本的交叉污染以免造成错误结果。

6.在储存和温育时避免强光直接照射。

7.平衡至室温后再打开密封袋以防水滴凝聚在冷板条上。

8.任何反应试剂不【bú】能【néng】接触漂白溶剂或【huò】漂【piāo】白溶剂所散发的强烈气体【tǐ】。任【rèn】何漂白成分都【dōu】会破坏试剂盒中反应试剂【jì】的【de】生物活性。

9.不能使用过期产品。

10.如果可能传播疾病，所有的样品都应管【guǎn】理好，按照规【guī】定【dìng】的程序处理样品【pǐn】和检测装【zhuāng】置。

操作步骤：

1．从室【shì】温平【píng】衡60min后的铝【lǚ】箔袋中取出所需板条，剩余板条用【yòng】自封【fēng】袋密【mì】封放回4℃。

2．设置【zhì】标准品孔和样【yàng】本孔【kǒng】，标准品孔各加不同【tóng】浓度的标准品50μL。

3．样本孔中a加入待测样本50μL；空白孔不加。

4．除空白孔【kǒng】外，标【biāo】准品孔和样本孔中【zhōng】每孔加入辣【là】根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用【yòng】封板【bǎn】膜【mó】封住反【fǎn】应【yīng】孔，37℃水浴锅或【huò】恒【héng】温箱温育60min。

5．弃去液【yè】体，吸水纸上拍干，每孔【kǒng】加满洗涤液（350μL），静置1min，甩去洗涤液，吸【xī】水纸上【shàng】拍干，如【rú】此【cǐ】重复洗板5次（也【yě】可用【yòng】洗板机洗【xǐ】板）。

6．每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7．每【měi】孔加入【rù】终止液50μL，15min内【nèi】，在【zài】450nm波【bō】长【zhǎng】处测定各孔的OD值。

实验结果计算：

绘制标准曲线：在【zài】Excel工作表中【zhōng】，以标准品浓度【dù】作横坐标，对应OD值作纵坐标，绘制出标【biāo】准品线【xiàn】性回归曲线，按【àn】曲【qǔ】线方程【chéng】计算各样本浓度值。

（此图仅供参考）

性能：

1. 检测范围：25 pg/mL – 800 pg/mL。

2.灵敏度：检测浓度小于1.0 pg/mL。

3.特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。

4.重复性【xìng】：板内【nèi】变异系数小【xiǎo】于10% ，板间变异系数小于15% 。

技术小提示：

1.当混合或重溶蛋白溶液时，尽量避免起沫。

2.为了避免交叉感染，配【pèi】置不同浓度标准品【pǐn】、上样、加不同试剂都需要更换【huàn】枪头【tóu】。另外不同试剂请分【fèn】别使用不【bú】同的移【yí】液【yè】槽【cáo】。

3.每次孵育时，请正确使用封板胶可保证结果的准确性。

4.混合后的【de】显色底物【wù】在上【shàng】板前应【yīng】为无色，请【qǐng】避光保存；假如微孔板【bǎn】后，将由物色变成不【bú】同深度的【de】蓝色。

5.终止液【yè】上板顺序应同显色【sè】底物上【shàng】板【bǎn】顺序【xù】一致；加【jiā】入终止液后，孔内颜色由蓝【lán】变黄；若孔内有绿色，则表明孔内液【yè】体未混【hún】匀；请充分混合。

说明：

1.由【yóu】于现有条件及科学技术【shù】水【shuǐ】平尚不能对所【suǒ】有供货商提供的所有【yǒu】原料进【jìn】行全面的【de】鉴定与分析，本产品可能【néng】存在【zài】一定的质量【liàng】技【jì】术风险。

2.最【zuì】终的实【shí】验结【jié】果与【yǔ】试剂的【de】有效【xiào】性、实验者的相关【guān】操作以及当时的实验环【huán】境密切相关，请务必准备充【chōng】足的标本【běn】备份。

3.不【bú】同批次的同一产品可能会有少许差别，如：检测限、灵【líng】敏【mǐn】度以及【jí】显色时【shí】间等，请【qǐng】依据试剂盒内【nèi】说明书进行实验操作，网站电子版说【shuō】明【míng】书【shū】仅【jǐn】作参考。

4.只有全部使用本【běn】试剂盒配套【tào】试【shì】剂才能保证检测效果，不能混用其他【tā】制造【zào】商【shāng】的【de】产品。只有严格遵守本试剂盒的实验说明才【cái】会得到最佳【jiā】的检【jiǎn】测结【jié】果。