本试剂盒仅供体外研究使用，不用于临床诊断

本试剂盒用于体外定量检测血清、血【xuè】浆、组织匀【yún】浆【jiāng】及【jí】相关液体样本【běn】中【zhōng】鸡α干【gàn】扰素(IFN-α)的含量。

有效期：6个月

保存条件：9-21℃

试剂盒组成：

备注：

1.（96T/48T）打开包装后请及时检查所有物品是否齐全。

2. 标准品浓度依次为【wéi】：800、400、200、100、50、25 pg/mL

3. 经过大量正常标【biāo】本检验【yàn】，标本的正常浓度【dù】值【zhí】均在试剂盒【hé】提供的检【jiǎn】测【cè】范围内，实验过【guò】程中直【zhí】接取50μL样【yàng】本上样【yàng】即可。当有部分样本值超过最大【dà】标【biāo】准品浓度时【shí】，可用样本【běn】稀释液将标本进行适当稀释后【hòu】再进行【háng】实验。

检测前准备工作：

1.请提前20分钟从冰箱中取出试剂盒，平衡至室温。

2.从冰箱中取【qǔ】出的浓缩洗涤【dí】液可【kě】能有结晶，属于正常现象；放置室温，轻摇【yáo】均匀，待结晶溶解【jiě】后【hòu】再配置洗涤液。可将20ml浓缩【suō】洗【xǐ】涤液【yè】用蒸馏水或去离子水稀【xī】释配置成400ml工【gōng】作浓度的洗【xǐ】涤液，未【wèi】用完【wán】的放回【huí】4℃

3.20×洗涤【dí】缓冲液的稀释：蒸馏【liú】水按1：20稀【xī】释，即1份20×洗涤缓【huǎn】冲【chōng】液加19份蒸【zhēng】馏水。

实验原理：

试剂盒采用双抗体一步夹【jiá】心法【fǎ】酶【méi】联【lián】免疫吸附试验（ELISA）。往预先【xiān】包被鸡α干扰素(IFN-α)捕获抗体的包被微【wēi】孔中，依【yī】次加入标本、标准【zhǔn】品、HRP标记的【de】检测【cè】抗体，经过温育【yù】并洗【xǐ】涤。用【yòng】底物TMB显色，TMB在过【guò】氧化物酶的【de】催【cuī】化下转化成蓝【lán】色，并【bìng】在酸的作用下转【zhuǎn】化成最终【zhōng】的黄【huáng】色。颜色的【de】深浅和【hé】样品【pǐn】中的鸡【jī】α干扰素(IFN-α)呈正相关。用酶【méi】标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样【yàng】品浓度。

实验所需自备试验器材：

1.酶标仪（450nm）

2.高精度加【jiā】样【yàng】器及【jí】枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3.37℃恒温箱

4.蒸馏水或去离子水

样本处理及要求：

1.血【xuè】清【qīng】：将收集于血清分离管的【de】全血【xuè】标本在室温【wēn】放【fàng】置2小时【shí】或4℃过夜【yè】，然后1000×g离心20 分【fèn】钟，取【qǔ】上清即可，或【huò】将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避【bì】免反复冻融。

2.血浆【jiāng】：用EDTA或肝素作为抗【kàng】凝剂采集标【biāo】本，并将标本在采集后【hòu】的30分钟内于9-21℃ 1000×g离心15分【fèn】钟，取上清即【jí】可检测【cè】，或将上清【qīng】置【zhì】于-20℃或-80℃保【bǎo】存，但【dàn】应避免反【fǎn】复冻【dòng】融。

3.组【zǔ】织匀浆：用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织，去除残【cán】留血液【yè】（匀【yún】浆中裂解的【de】红细胞会【huì】影响测【cè】量结果），称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS（一般按1:9的重量体【tǐ】积比【bǐ】，比如【rú】1g的【de】组织样品对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当【dāng】调【diào】整【zhěng】，并做好记【jì】录。推荐在PBS中加入蛋【dàn】白酶抑制剂）加入【rù】玻璃匀浆器中，于冰上充分【fèn】研磨。为【wéi】了进一【yī】步裂解【jiě】组织【zhī】细胞，可以对匀【yún】浆液进行超【chāo】声【shēng】破碎，或反复冻融。最后将匀【yún】浆液【yè】于【yú】5000×g离心【xīn】5~10分【fèn】钟，取【qǔ】上清检测。

4.细【xì】胞【bāo】培【péi】养物上清：请1000×g离【lí】心20分钟，取【qǔ】上清即可检测，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反【fǎn】复【fù】冻融。

5.其它生物标本：1000×g离心20分钟，取上清即可检测。

6.样品外观：样品应清澈透明，悬浮物应离心去除。

7.样品保存：样品收集后若在1周内进行【háng】检测的可保存于【yú】4℃，若不能及【jí】时检测，请按一次使【shǐ】用量分装，冻存于-20℃（1个月内检【jiǎn】测【cè】），或-80℃（6个月内【nèi】检测【cè】），避免反复冻【dòng】融，标【biāo】本溶【róng】血会影【yǐng】响最【zuì】后检测结果，因此溶血标本不【bú】宜进行【háng】此项【xiàng】检测。

注意事项：

1.严格按照规定的时间【jiān】和温度进【jìn】行温育以保【bǎo】证准确【què】结果。所有试剂都【dōu】必【bì】须在使用【yòng】前达到室温9-21℃。使用后立即冷藏保存试剂【jì】。

2.洗板【bǎn】不【bú】正【zhèng】确可以导致不【bú】准确的结果。在加【jiā】入底物前确【què】保尽量【liàng】吸干孔内液体。温育过程中不要让微孔干燥【zào】掉【diào】。

3.消除板底残留的液体和手指印，否则影响OD值。

4.底物显色【sè】液应呈【chéng】无色或很浅的颜色，已经【jīng】变蓝的【de】底物液不能使用【yòng】。

5.避免试剂和标本的交叉污染以免造成错误结果。

6.在储存和温育时避免强光直接照射。

7.平衡至室温后再打开密封袋以防水滴凝聚在冷板条上。

8.任何反【fǎn】应试剂不能接触漂【piāo】白【bái】溶【róng】剂或漂白【bái】溶剂【jì】所散发的强【qiáng】烈气【qì】体。任何漂白成分都会破坏试剂盒中【zhōng】反应试剂的生【shēng】物活性。

9.不能使用过期产品。

10.如果可能传播【bō】疾病【bìng】，所【suǒ】有的【de】样品都应管理好，按照规定的程序【xù】处理样品和【hé】检测装【zhuāng】置。

操作步骤：

1．从室【shì】温【wēn】平【píng】衡【héng】60min后的铝箔袋【dài】中取出所需板条，剩余板条用自封袋密【mì】封放回4℃。

2．设置标准品孔和【hé】样本孔【kǒng】，标准品孔【kǒng】各加不同浓度的标准品50μL。

3．样本孔中a加入待测样本50μL；空白孔不加。

4．除空白孔外【wài】，标准品孔【kǒng】和样本孔中每孔加【jiā】入辣根过【guò】氧化【huà】物酶（HRP）标【biāo】记【jì】的检测抗体100μL，用封【fēng】板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒【héng】温【wēn】箱【xiāng】温育60min。

5．弃去液体，吸水纸上【shàng】拍干，每孔加【jiā】满洗涤液（350μL），静置1min，甩【shuǎi】去洗涤液，吸【xī】水纸上拍干，如【rú】此【cǐ】重复洗板5次（也可用洗板【bǎn】机洗板）。

6．每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7．每【měi】孔【kǒng】加入终止液【yè】50μL，15min内，在【zài】450nm波长处测定各孔的OD值。

实验结果计算：

绘制标准曲线：在Excel工作表中，以标准品【pǐn】浓度作横坐标，对应OD值作【zuò】纵【zòng】坐标，绘制出标【biāo】准品线性【xìng】回【huí】归曲线，按曲线方程计算各【gè】样本浓度值。

（此图仅供参考）

性能：

1. 检测范围：25 pg/mL – 800 pg/mL。

2.灵敏度：检测浓度小于1.0 pg/mL。

3.特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。

4.重复【fù】性【xìng】：板内变异系数小于10% ，板间变异系数小于15% 。

技术小提示：

1.当混合或重溶蛋白溶液时，尽量避免起沫。

2.为了避免交叉【chā】感染，配置不同浓度标准品【pǐn】、上【shàng】样【yàng】、加不同试剂都需要更【gèng】换枪头。另外不同试剂【jì】请分【fèn】别使用【yòng】不【bú】同的移液槽。

3.每次孵育时，请正确使用封板胶可保证结果的准确性。

4.混合后的【de】显色底物在上板【bǎn】前【qián】应为无色【sè】，请避【bì】光【guāng】保存；假如微孔板后【hòu】，将由物色【sè】变成【chéng】不同深度的蓝色。

5.终止液上板顺序应同【tóng】显色底物【wù】上板顺【shùn】序一【yī】致；加入终止【zhǐ】液后，孔内颜色【sè】由【yóu】蓝【lán】变黄；若孔内有绿色，则表明孔内液体【tǐ】未混匀；请充分混合。

说明：

1.由于现有【yǒu】条件【jiàn】及科学技术水平尚不能【néng】对所有供货商提【tí】供的【de】所有原【yuán】料【liào】进行全面的鉴【jiàn】定与分析，本产品【pǐn】可能存在【zài】一定的质【zhì】量技术风险。

2.最终【zhōng】的实验结果与试【shì】剂的有效性、实验【yàn】者的相关操作以及当时的实验环境密【mì】切【qiē】相【xiàng】关，请务【wù】必准备充【chōng】足【zú】的标本【běn】备份。

3.不同【tóng】批【pī】次的同一产【chǎn】品可能会有少许差【chà】别，如：检测【cè】限、灵敏【mǐn】度以及显色时间等，请依据试剂【jì】盒内【nèi】说明书进【jìn】行实验操作，网【wǎng】站电子版说明书仅作【zuò】参考。

4.只有【yǒu】全部使用本试【shì】剂盒配套试剂才能保证检测效果，不能混【hún】用其【qí】他【tā】制造商【shāng】的产品。只有【yǒu】严格遵守本试剂【jì】盒的实验【yàn】说明才【cái】会得到最【zuì】佳的检测结果【guǒ】。