本【běn】试剂盒【hé】用于体外定量检【jiǎn】测血清、血浆【jiāng】、组织匀【yún】浆及【jí】相关液【yè】体样【yàng】本中猴白细胞介素8(IL-8）的含量。

有效期：6个月

保存条件：9-21℃

试剂盒组成：

备注：

1.（96T/48T）打开包装后请及时检查所有物品是否齐全。

2. 标准品浓度【dù】依次为：800、400、200、100、50、25 pg/mL

3. 经过大量正常标【biāo】本【běn】检验，标【biāo】本的正常浓度值均【jun1】在试剂盒提【tí】供的检测范围内【nèi】，实验过程中【zhōng】直【zhí】接取【qǔ】50μL样本上样即可【kě】。当有【yǒu】部分样本【běn】值【zhí】超过最大标准品浓度时，可用【yòng】样本稀释液将标本【běn】进行适当【dāng】稀释后再【zài】进行实验。

检测前准备工作：

1.请提前20分钟从冰箱中取出试剂盒，平衡至室温。

2.从冰箱中取出的【de】浓缩【suō】洗【xǐ】涤液【yè】可能有结晶，属于正常现象；放【fàng】置室【shì】温，轻摇【yáo】均匀【yún】，待结晶溶解后再配置洗【xǐ】涤液。可将20ml浓缩洗涤液用蒸馏水或去【qù】离子水【shuǐ】稀【xī】释【shì】配置成400ml工作【zuò】浓度的洗【xǐ】涤液，未用完的【de】放回4℃

3.20×洗涤缓【huǎn】冲【chōng】液的稀释：蒸馏水按1：20稀释，即1份【fèn】20×洗【xǐ】涤缓冲液加19份蒸馏水。

实验原理：

试剂盒【hé】采用双抗体一步夹心法酶联免疫【yì】吸附试【shì】验（ELISA）。往预先包【bāo】被猴白细胞介【jiè】素8(IL-8）捕获抗体的包被微【wēi】孔中，依次加入标本、标【biāo】准【zhǔn】品、HRP标记的检测抗体，经【jīng】过温育并洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的【de】作【zuò】用下转【zhuǎn】化成最终的黄【huáng】色。颜色的【de】深【shēn】浅和样品中的【de】猴【hóu】白细【xì】胞介【jiè】素8(IL-8）呈正【zhèng】相关。用【yòng】酶标仪【yí】在450nm 波长下测定吸光【guāng】度（OD 值），计算样品浓度。

实验所需自备试验器材：

1.酶标仪（450nm）

2.高精度加样器【qì】及【jí】枪【qiāng】头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3.37℃恒温箱

4.蒸馏水或去离子水

样本处理及要求：

1.血【xuè】清：将收集于血清分离管【guǎn】的全血标本在室温放【fàng】置2小时或4℃过夜，然后1000×g离心20 分钟，取【qǔ】上清即可，或【huò】将【jiāng】上清置于-20℃或-80℃保【bǎo】存，但应避免【miǎn】反【fǎn】复【fù】冻融。

2.血浆：用EDTA或【huò】肝素作【zuò】为抗凝【níng】剂采集标本，并【bìng】将标本在采集【jí】后的30分【fèn】钟内于9-21℃ 1000×g离【lí】心15分钟，取上清即可检【jiǎn】测，或将【jiāng】上清置于【yú】-20℃或-80℃保存，但应避免反复【fù】冻融。

3.组【zǔ】织匀浆：用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲【chōng】洗组织，去除残留【liú】血液（匀浆【jiāng】中【zhōng】裂解的红细胞会【huì】影响测量结果），称重【chóng】后将组织【zhī】剪碎。将剪碎【suì】的组织与对【duì】应体积的PBS（一般按1:9的重【chóng】量体积比【bǐ】，比如1g的组织样品【pǐn】对应【yīng】9mL的PBS，具体【tǐ】体积可【kě】根据【jù】实验需要适当调【diào】整，并做好记录。推【tuī】荐在PBS中加入蛋白酶抑制【zhì】剂）加入玻璃匀【yún】浆器中【zhōng】，于【yú】冰【bīng】上充分【fèn】研磨。为了进一步【bù】裂解【jiě】组织细胞，可以对匀【yún】浆【jiāng】液进行超声【shēng】破【pò】碎，或反复冻融。最后将匀浆液于【yú】5000×g离【lí】心5~10分钟，取上清检测。

4.细胞培养物上清：请1000×g离心20分【fèn】钟【zhōng】，取上清【qīng】即可检测，或【huò】将上清【qīng】置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融【róng】。

5.其它生物标本：1000×g离心20分钟，取上清即可检测。

6.样品外观：样品应清澈透明，悬浮物应离心去除。

7.样品保存：样品收集【jí】后若【ruò】在1周内进行检测的【de】可保【bǎo】存于4℃，若【ruò】不【bú】能及时检【jiǎn】测，请按一次使用量分装，冻存于【yú】-20℃（1个月【yuè】内检测），或-80℃（6个月内检测），避免【miǎn】反复冻融【róng】，标【biāo】本溶血会影响【xiǎng】最后检测结果，因此溶血标本不【bú】宜【yí】进【jìn】行此项检【jiǎn】测。

注意事项：

1.严【yán】格按照规定的【de】时间和温【wēn】度【dù】进行【háng】温育以保证准确结果。所有试剂都必须在使用前【qián】达【dá】到室温9-21℃。使用【yòng】后立即冷藏保存试剂。

2.洗板不正确【què】可以【yǐ】导致【zhì】不【bú】准确的结果。在【zài】加入底物前确保尽量吸干孔内液【yè】体。温育过【guò】程中不要让【ràng】微孔干燥掉。

3.消除板底残留的液体和手指印，否则影响OD值。

4.底物显色【sè】液应呈无色或【huò】很浅【qiǎn】的颜【yán】色，已经变蓝的底物【wù】液不能使用。

5.避免试剂和标本的交叉污染以免造成错误结果。

6.在储存和温育时避免强光直接照射。

7.平衡至室温后再打开密封袋以防水滴凝聚在冷板条上。

8.任何反应试剂不能【néng】接触【chù】漂白【bái】溶剂【jì】或漂白溶剂所散发【fā】的【de】强烈气体。任何【hé】漂【piāo】白成分都会破坏试剂盒中反应试剂的生物活性【xìng】。

9.不能使用过期产品。

10.如果可能传播疾【jí】病，所有【yǒu】的样品都应管【guǎn】理好【hǎo】，按照规定【dìng】的程序处【chù】理样品【pǐn】和检测装置。

操作步骤：

1．从【cóng】室温平衡【héng】60min后【hòu】的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封【fēng】袋密封放回4℃。

2．设【shè】置标准【zhǔn】品孔和样本孔【kǒng】，标准品孔各加不【bú】同【tóng】浓度的标准品50μL。

3．样本孔中a加入待测样本50μL；空白孔不加。

4．除空白孔外，标【biāo】准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标【biāo】记【jì】的检【jiǎn】测抗体【tǐ】100μL，用【yòng】封板膜封住反应孔，37℃水浴锅【guō】或恒温箱温【wēn】育60min。

5．弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加【jiā】满洗涤液（350μL），静置1min，甩去洗【xǐ】涤液【yè】，吸水【shuǐ】纸【zhǐ】上拍干，如此重复洗板5次【cì】（也可【kě】用洗板机洗板）。

6．每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7．每孔加入【rù】终止液【yè】50μL，15min内，在450nm波长处【chù】测定【dìng】各孔的【de】OD值。

实验结果计算：

绘制标准曲线：在Excel工作表中，以标准品浓度作横坐标【biāo】，对应OD值【zhí】作纵坐标，绘制出标【biāo】准【zhǔn】品线性回【huí】归曲线，按【àn】曲线【xiàn】方【fāng】程计算各样本浓度值。

性能：

1. 检测范围：25 pg/mL – 800 pg/mL。

2.灵敏度：检测浓度小于1.0 pg/mL。

3.特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。

4.重复性：板内变异系数【shù】小于10% ，板间【jiān】变异系数小【xiǎo】于【yú】15% 。

技术小提示：

1.当混合或重溶蛋白溶液时，尽量避免起沫。

2.为了避免交叉【chā】感染【rǎn】，配置【zhì】不同浓度标【biāo】准品、上样、加不同试剂【jì】都需要更换【huàn】枪头。另外不同试剂请分别使【shǐ】用不【bú】同【tóng】的移液槽。

3.每次孵育时，请正确使用封板胶可保证结果的准确性。

4.混合后的显色底物在上板前【qián】应为无色【sè】，请避光保【bǎo】存；假【jiǎ】如微孔板后【hòu】，将由物色变【biàn】成【chéng】不同深度的蓝色【sè】。

5.终止液上板【bǎn】顺序应【yīng】同显【xiǎn】色底物上【shàng】板顺序一【yī】致；加入【rù】终【zhōng】止液后，孔内【nèi】颜【yán】色由蓝变黄；若孔内有绿色，则表明孔内【nèi】液体未混匀；请充分混合。

说明：

1.由于现有条件及科【kē】学【xué】技【jì】术水【shuǐ】平尚不能【néng】对所【suǒ】有供货商提供【gòng】的所【suǒ】有原料进【jìn】行全面的鉴【jiàn】定与分析，本产品【pǐn】可能存在一定的质量技术风险。

2.最终的实验【yàn】结果与试剂的【de】有效性、实【shí】验者的相【xiàng】关操作以【yǐ】及当时的实验环【huán】境密切相【xiàng】关，请务必【bì】准备充足的【de】标【biāo】本备份。

3.不同【tóng】批次的同一【yī】产品可能会有少许差别，如：检测限、灵敏【mǐn】度以及显色时间等，请依据试剂【jì】盒内说明书进行【háng】实【shí】验操作【zuò】，网【wǎng】站电子版说【shuō】明书仅作参【cān】考。

4.只有【yǒu】全部【bù】使用本【běn】试剂盒配套试剂才【cái】能【néng】保证检【jiǎn】测效果【guǒ】，不能混用其他制造商的产品。只有严格遵守本试【shì】剂盒的【de】实验【yàn】说明才会得到最佳的检测结【jié】果。