本试剂盒仅供体外研究使用，不用于临床诊断

本试剂盒用于体外定量检测血清、血浆、组织匀浆及相关液体样本中牛ATP结合盒转运蛋白G1(ABCG1)的含量。

有效期：6个月

保存条件：9-21℃

试剂盒组成：

备注：

1.(96T/48T)打开包装后请及时检查所有物品是否齐全。

2. 标准品浓度依【yī】次为【wéi】：800、400、200、100、50、25 pg/mL

3. 经过【guò】大量正【zhèng】常标本检【jiǎn】验，标本的正常【cháng】浓度值均在试剂【jì】盒提【tí】供的检测范围内【nèi】，实验过程中直接取50μL样本上样【yàng】即可【kě】。当有部分样本值【zhí】超过最大标准品浓度时，可用样本稀释液将标本进【jìn】行【háng】适当稀释后【hòu】再【zài】进【jìn】行实验。

检测前准备工作：

1.请提前20分钟从冰箱中取出试剂盒，平衡至室温。

2.从冰箱中取出【chū】的浓【nóng】缩洗涤液可能有结晶，属于正常现象；放置室温，轻摇均匀，待结【jié】晶溶解后【hòu】再【zài】配置洗【xǐ】涤液。可【kě】将20ml浓缩洗涤【dí】液用蒸馏水或【huò】去【qù】离子水稀释配置成400ml工作浓度的洗涤【dí】液，未用完的【de】放回4℃

3.20×洗涤缓冲液【yè】的稀释：蒸馏水按【àn】1：20稀释，即1份20×洗【xǐ】涤缓【huǎn】冲【chōng】液加【jiā】19份蒸馏水。

实验原理：

试剂盒采用双【shuāng】抗体一步夹心【xīn】法酶【méi】联免疫吸附试验【yàn】(ELISA)。往预【yù】先【xiān】包被牛ATP结合盒转运蛋白G1(ABCG1)捕获抗体【tǐ】的包【bāo】被微【wēi】孔中，依【yī】次加入【rù】标本、标准【zhǔn】品、HRP标记的检测抗体，经【jīng】过温育并洗涤。用【yòng】底物TMB显色，TMB在【zài】过氧化物酶的催化下转【zhuǎn】化成蓝色，并在酸【suān】的【de】作用下转【zhuǎn】化成最终的黄【huáng】色。颜色的深【shēn】浅和样品中的牛ATP结合盒转运蛋白G1(ABCG1)呈正【zhèng】相【xiàng】关【guān】。用酶【méi】标仪在【zài】450nm 波长下测定吸光度(OD 值)，计算样【yàng】品浓度。

实验所需自备试验器材：

1.酶标仪(450nm)

2.高【gāo】精【jīng】度加样器【qì】及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3.37℃恒温箱

4.蒸馏水或去离子水

样本处理及要求：

1.血清：将【jiāng】收集【jí】于血清分离管的全血标本在室【shì】温放置2小【xiǎo】时或4℃过夜，然后【hòu】1000×g离心20 分【fèn】钟【zhōng】，取上清即可，或【huò】将上清置于【yú】-20℃或-80℃保存，但应避免反复【fù】冻融【róng】。

2.血浆：用EDTA或肝【gān】素作为抗凝剂采集标本【běn】，并将标本在采集后的30分【fèn】钟内【nèi】于9-21℃ 1000×g离心15分钟【zhōng】，取上清即可检【jiǎn】测，或将上清置于-20℃或-80℃保【bǎo】存【cún】，但应避免反复冻【dòng】融。

3.组织匀浆：用预冷的【de】PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织，去除残【cán】留血【xuè】液(匀浆中裂解【jiě】的红细胞【bāo】会影响【xiǎng】测量结果【guǒ】)，称重后将组织【zhī】剪碎。将剪碎的组织与对应体积的【de】PBS(一般按【àn】1:9的重量体【tǐ】积比，比如1g的【de】组织【zhī】样品对【duì】应9mL的PBS，具【jù】体【tǐ】体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。推【tuī】荐在PBS中加入蛋白【bái】酶抑制剂)加入玻璃匀【yún】浆【jiāng】器中，于冰上充分【fèn】研【yán】磨【mó】。为【wéi】了进一步裂解【jiě】组织细【xì】胞，可以对匀浆液进行超【chāo】声破碎，或反复【fù】冻融。最后【hòu】将【jiāng】匀浆液于5000×g离心【xīn】5~10分钟，取上清【qīng】检测【cè】。

4.细胞培【péi】养物上清：请1000×g离心【xīn】20分钟【zhōng】，取上清即可检测，或将上【shàng】清置于【yú】-20℃或-80℃保存，但应【yīng】避免反复冻融【róng】。

5.其它生物标本：1000×g离心20分钟，取上清即可检测。

6.样品外观：样品应清澈透明，悬浮物应离心去除。

7.样品【pǐn】保存：样品收【shōu】集【jí】后若在1周内进行检测的可【kě】保存于4℃，若【ruò】不【bú】能【néng】及【jí】时检测【cè】，请按一次使用量分装，冻存于-20℃(1个月内检测)，或【huò】-80℃(6个月内【nèi】检测【cè】)，避免反复冻融【róng】，标本【běn】溶血会影响最【zuì】后检测结果，因【yīn】此溶血标本不宜进【jìn】行此项检测。

注意事项：

1.严格按照规【guī】定的时间和温度进【jìn】行温【wēn】育以保证【zhèng】准确结果。所有试剂都必【bì】须在使用前达到室温9-21℃。使用后立即冷藏【cáng】保【bǎo】存试剂。

2.洗板不【bú】正确可以导致不准确的结果。在加入【rù】底物前【qián】确保尽量吸干孔内液体【tǐ】。温育过程中不要【yào】让【ràng】微孔干【gàn】燥掉。

3.消除板底残留的液体和手指印，否则影响OD值。

4.底物显色液应呈【chéng】无色或很浅【qiǎn】的颜色，已经【jīng】变蓝的底物液【yè】不能【néng】使用。

5.避免试剂和标本的交叉污染以免造成错误结果。

6.在储存和温育时避免强光直接照射。

7.平衡至室温后再打开密封袋以防水滴凝聚在冷板条上。

8.任【rèn】何反应试剂不【bú】能【néng】接【jiē】触漂白溶剂【jì】或【huò】漂白【bái】溶剂所散发的【de】强烈气体。任何漂白成分【fèn】都会破坏试剂盒中反应试剂【jì】的生物活性。

9.不能使用过期产品。

10.如果【guǒ】可【kě】能传播疾病，所有的样品都应管理好，按照规定的【de】程【chéng】序处理样品和【hé】检测【cè】装【zhuāng】置。

操作步骤：

1．从室【shì】温平衡60min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余【yú】板【bǎn】条用自【zì】封【fēng】袋密封【fēng】放回4℃。

2．设置标【biāo】准品孔和样本【běn】孔，标准品孔各【gè】加不同浓度【dù】的标准品50μL。

3．样本孔中a加入待测样本50μL；空白孔不加。

4．除空白孔外，标【biāo】准品孔和【hé】样本孔中每孔加入辣根过【guò】氧化物酶【méi】(HRP)标记的检测【cè】抗体【tǐ】100μL，用封【fēng】板【bǎn】膜【mó】封住反应【yīng】孔，37℃水浴锅或恒温箱【xiāng】温育60min。

5．弃【qì】去液体【tǐ】，吸【xī】水纸【zhǐ】上拍干，每孔加满洗涤液(350μL)，静置1min，甩【shuǎi】去洗【xǐ】涤液，吸水纸【zhǐ】上拍干，如此重复洗板5次(也可用洗板机【jī】洗板)。

6．每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7．每孔【kǒng】加入终止液50μL，15min内【nèi】，在450nm波长【zhǎng】处测定各孔的【de】OD值。

实验结果计算：

绘制标准曲线：在Excel工作表中，以【yǐ】标准品浓度【dù】作横坐【zuò】标，对应【yīng】OD值作纵坐标，绘制出标准品线【xiàn】性回归曲线，按曲【qǔ】线【xiàn】方程计算各【gè】样本浓度值。

(此图仅供参考)

性能：

1. 检测范围：25 pg/mL – 800 pg/mL。

2.灵敏度：检测浓度小于1.0 pg/mL。

3.特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。

4.重复性【xìng】：板内【nèi】变异系数小于10% ，板【bǎn】间变异【yì】系数小【xiǎo】于15% 。

技术小提示：

1.当混合或重溶蛋白溶液时，尽量避免起沫。

2.为了避免【miǎn】交叉感染，配【pèi】置不同浓【nóng】度标准【zhǔn】品【pǐn】、上样、加不同试剂都【dōu】需【xū】要更换枪头。另外【wài】不同试剂请分别使用不同的【de】移液槽。

3.每次孵育时，请正确使用封板胶可保证结果的准确性。

4.混合后的显【xiǎn】色底物在上【shàng】板前应为无【wú】色，请避光保【bǎo】存；假如微孔板后，将【jiāng】由【yóu】物色变成【chéng】不【bú】同深度的蓝色。

5.终止【zhǐ】液【yè】上板顺序应【yīng】同【tóng】显色【sè】底物上板顺序一致；加入终止液后，孔内颜色由蓝【lán】变黄；若孔【kǒng】内【nèi】有绿色，则表明孔内【nèi】液体未混匀；请充分混【hún】合【hé】。

说明：

1.由于现【xiàn】有条件及【jí】科【kē】学技【jì】术【shù】水平尚不能对所有【yǒu】供货【huò】商提供的所【suǒ】有原料进行全面的鉴【jiàn】定与分析，本产品可能存在一定的质量技【jì】术风险。

2.最终【zhōng】的【de】实验结果【guǒ】与试剂的有【yǒu】效【xiào】性、实验者【zhě】的相关操作以及当时的【de】实验【yàn】环境密切相关，请务必准备充足的标【biāo】本备份【fèn】。

3.不同批【pī】次的同一产品可能会有少许差别，如：检测【cè】限、灵【líng】敏【mǐn】度以及显色时间【jiān】等，请依据【jù】试剂盒【hé】内说明书【shū】进行实验操【cāo】作，网站【zhàn】电子版【bǎn】说明书仅作参考。

4.只有全部使用本试剂盒配套试剂才能保【bǎo】证检测【cè】效果【guǒ】，不能混用其他制造商的产【chǎn】品。只有严格遵守本试剂【jì】盒的实【shí】验【yàn】说【shuō】明才会【huì】得到最佳的【de】检测【cè】结果。