本试剂盒仅供体外研究使用，不用于临床诊断

本试剂【jì】盒用【yòng】于【yú】体外定量检【jiǎn】测血清、血浆【jiāng】、组织匀浆及相关液体样本中猴γ干扰【rǎo】素【sù】(IFN-γ)的含量。

有效期：6个月

保存条件：9-21℃

试剂盒组成：

猴γ干扰素(IFN-γ)试剂盒备注：

1. (96T/48T)打开包装后请及时检【jiǎn】查所有物品是【shì】否齐【qí】全【quán】。

2. 标【biāo】准【zhǔn】品浓度依次为：800、400、200、100、50、25 pg/mL

3. 经【jīng】过大【dà】量正常标本检验【yàn】，标本的正【zhèng】常浓度值均在试剂【jì】盒【hé】提供的检测范围内，实验过【guò】程中直接取【qǔ】50μL样本上样即【jí】可。当有部分样本值超过最大【dà】标准品【pǐn】浓度【dù】时，可用样本【běn】稀释液将标本进行适当稀【xī】释【shì】后【hòu】再进行实验。

检测前准备工作：

1. 请提前20分钟从冰箱中取出试剂盒，平衡至室温。

2. 从冰箱中取出的【de】浓缩洗涤【dí】液可能有结晶，属于正常【cháng】现【xiàn】象；放置室温，轻摇均匀，待结晶溶解后再【zài】配置洗涤液。可将20ml浓缩【suō】洗涤液用蒸馏水【shuǐ】或去【qù】离子【zǐ】水【shuǐ】稀释配置成400ml工作浓度【dù】的洗涤液，未用完的放回4℃

3. 20×洗涤缓冲【chōng】液的稀释：蒸【zhēng】馏【liú】水【shuǐ】按1：20稀释，即1份20×洗【xǐ】涤缓冲液加19份【fèn】蒸馏水。

实验原理：

试剂盒采【cǎi】用双抗体一【yī】步夹心法酶联【lián】免疫吸【xī】附试验(ELISA)。往【wǎng】预先包被猴γ干扰素【sù】(IFN-γ)捕获抗体的包被【bèi】微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经【jīng】过温育并洗涤【dí】。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催【cuī】化下转化成【chéng】蓝色，并在酸的作用下转【zhuǎn】化【huà】成最终【zhōng】的黄色。颜【yán】色【sè】的【de】深【shēn】浅和【hé】样品中的猴【hóu】γ干扰素(IFN-γ)呈正【zhèng】相【xiàng】关。用【yòng】酶【méi】标仪在450nm 波长下测定吸光度(OD 值)，计算【suàn】样品浓度。

实验所需自备试验器材：

1. 酶标仪(450nm)

2. 高精度加【jiā】样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3. 37℃恒温箱

4. 蒸馏水或去离子水

样本处理及要求：

1. 血清：将收集于血【xuè】清【qīng】分离管的全【quán】血【xuè】标本在室温放置2小时或4℃过夜，然后1000×g离心20 分钟，取上清即可，或将上清置于【yú】-20℃或-80℃保存，但【dàn】应避免反【fǎn】复【fù】冻【dòng】融【róng】。

2. 血浆：用EDTA或肝素【sù】作为抗凝剂采集标【biāo】本，并将标本在采集后的30分钟【zhōng】内于9-21℃ 1000×g离心【xīn】15分钟【zhōng】，取上清即可检测，或【huò】将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反【fǎn】复冻融。

3. 组【zǔ】织匀浆：用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织【zhī】，去除残留血液(匀浆【jiāng】中裂解【jiě】的红细胞会影响测量【liàng】结【jié】果)，称重后【hòu】将组织剪碎。将剪碎【suì】的组织与对应体积的PBS(一般按【àn】1:9的重量体积比，比【bǐ】如1g的组织样品对应9mL的【de】PBS，具体体【tǐ】积可【kě】根据实【shí】验需要适当调整【zhěng】，并【bìng】做好【hǎo】记录。推荐【jiàn】在PBS中加入【rù】蛋【dàn】白酶抑【yì】制剂)加入玻璃匀浆器中，于冰上【shàng】充分研磨。为【wéi】了进一步裂【liè】解组织细胞【bāo】，可【kě】以对匀【yún】浆液进行【háng】超【chāo】声破【pò】碎，或反复冻融。最后将匀浆液于【yú】5000×g离心5~10分钟，取【qǔ】上清检测。

4. 细胞培养物【wù】上清【qīng】：请1000×g离心20分钟，取【qǔ】上清【qīng】即可检【jiǎn】测【cè】，或将上清置于-20℃或-80℃保【bǎo】存，但【dàn】应避免反复冻融。

5. 其它生物标【biāo】本：1000×g离心20分【fèn】钟【zhōng】，取上清即可检测。

6. 样品外观：样品应清澈透明，悬浮物应离心去除。

7. 样品保存：样品收集后若在1周内进行检测的可保存于4℃，若不能【néng】及时检测，请【qǐng】按【àn】一次【cì】使用【yòng】量【liàng】分装，冻【dòng】存于-20℃(1个【gè】月内检测)，或-80℃(6个月内检【jiǎn】测)，避免反复冻融，标【biāo】本【běn】溶血会影响【xiǎng】最【zuì】后检【jiǎn】测结果，因此溶血标本不【bú】宜进行【háng】此项检【jiǎn】测【cè】。

注意事项：

1. 严格按【àn】照规定的时间和温度进行温【wēn】育以保证【zhèng】准确【què】结果。所【suǒ】有【yǒu】试剂都必须在使用前达到室温9-21℃。使用后【hòu】立【lì】即冷藏保存试【shì】剂。

2. 洗板不正【zhèng】确可【kě】以导【dǎo】致不准确的结【jié】果。在加入底物前确【què】保【bǎo】尽量吸干孔内液体【tǐ】。温育过程中不要让微【wēi】孔干燥掉。

3. 消除板底残留的液体和手指印，否则影响OD值。

4. 底物显色液应呈无色或【huò】很【hěn】浅的颜色，已经变蓝的底物液【yè】不【bú】能【néng】使用。

5. 避免试剂和标本的交叉污染以免造成错误结果。

6. 在储存和温育时避免强光直接照射。

7. 平衡至室温后再打开密封袋以防水滴凝聚在冷板条上。

8. 任何【hé】反应试剂不【bú】能接【jiē】触漂白溶剂或漂【piāo】白溶剂所散发的强烈气体。任何【hé】漂白成分都会破【pò】坏试剂【jì】盒中反应【yīng】试剂【jì】的生物活性。

9. 不能使用过期产品。

10. 如果可能传播【bō】疾病【bìng】，所有的样品都【dōu】应管理好，按照【zhào】规定的程序【xù】处理样【yàng】品和检测【cè】装置。

操作步骤：

1．从室温平衡60min后的铝箔袋【dài】中取出所需【xū】板【bǎn】条，剩余【yú】板条用自封袋密封放回4℃。

2．设【shè】置【zhì】标【biāo】准品孔和样本孔，标准品孔各加【jiā】不【bú】同浓度的标准品50μL。

3．样本孔中a加入待测样本50μL；空白孔不加。

4．除空白孔外，标准品孔【kǒng】和样本【běn】孔中每孔加入辣根过【guò】氧化物酶(HRP)标记【jì】的检测抗体100μL，用【yòng】封板膜封住【zhù】反【fǎn】应【yīng】孔，37℃水浴锅或恒温【wēn】箱温【wēn】育60min。

5．弃去液【yè】体，吸【xī】水【shuǐ】纸上拍干【gàn】，每孔加满洗涤液【yè】(350μL)，静置1min，甩【shuǎi】去【qù】洗【xǐ】涤液，吸水【shuǐ】纸上拍干，如此重复洗板5次(也可【kě】用洗板机洗板)。

6．每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7．每孔加【jiā】入【rù】终【zhōng】止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各【gè】孔的OD值。

实验结果计算：

绘【huì】制标准曲线：在Excel工作表中，以标准品浓度作横【héng】坐标，对应【yīng】OD值作纵坐标，绘制出标准品【pǐn】线性回归曲线【xiàn】，按【àn】曲【qǔ】线方程【chéng】计算各【gè】样【yàng】本浓度值。

(此图仅供参考)

性能：

1. 检测范围：25 pg/mL – 800 pg/mL。

2. 灵敏度：检测浓度小于1.0 pg/mL。

3. 特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。

4. 重复性：板内变异系数小于10% ，板间变异系数【shù】小【xiǎo】于【yú】15% 。

技术小提示：

1. 当混合或重溶蛋白溶液时，尽量避免起沫。

2. 为了避免交叉感染，配置不同浓度标准品【pǐn】、上样、加不同试剂都需【xū】要更换【huàn】枪头【tóu】。另外不同【tóng】试剂请【qǐng】分【fèn】别使用【yòng】不同的移【yí】液槽。

3. 每次孵育时，请正确使用封板胶可保证结果的准确性。

4. 混合后的显【xiǎn】色底【dǐ】物在上【shàng】板前应为【wéi】无色，请避光保存【cún】；假如微【wēi】孔板后【hòu】，将由物色变成不同深度【dù】的蓝色。

5. 终止液上板顺序【xù】应【yīng】同显【xiǎn】色底物上板顺序一致；加入终止【zhǐ】液后【hòu】，孔内【nèi】颜色【sè】由蓝变【biàn】黄；若孔内有绿色，则表明孔内液体未混匀；请充分混合。

猴γ干扰素(IFN-γ)试剂盒说明：

1. 由于现有条件及【jí】科学技术水平尚不能对所有供【gòng】货商提【tí】供的所有【yǒu】原【yuán】料【liào】进行全面【miàn】的【de】鉴定与【yǔ】分析，本产品可能存在一定的质【zhì】量技术风险。

2. 最【zuì】终的【de】实【shí】验【yàn】结果与试剂的有效性、实验者的相关【guān】操作以及当时【shí】的实【shí】验环境密切相【xiàng】关，请务必准备充足的标本备【bèi】份。

3. 不同批次的同一产品可能会有少许差别，如【rú】：检测限【xiàn】、灵【líng】敏度【dù】以及【jí】显色时间等，请依【yī】据试剂盒内说明书进行实验操【cāo】作，网【wǎng】站【zhàn】电子版说【shuō】明书仅作参考。

4. 只【zhī】有全部使用本试【shì】剂盒配套试剂【jì】才能保证检测【cè】效果，不能混用其【qí】他制造商的产品。只【zhī】有【yǒu】严格遵守本试剂盒的【de】实【shí】验说明才【cái】会得【dé】到最佳【jiā】的检测结果。