本试剂盒用【yòng】于【yú】体外定【dìng】量检测血清、血浆、组织匀浆及【jí】相关【guān】液体样【yàng】本中小【xiǎo】鼠Ⅰ型前【qián】胶原C末端肽(CICP)的含量。

有效期：6个月

保存条件：9-21℃

小鼠Ⅰ型前胶原C末端肽(CICP)试剂盒组成：

备注：

1.（96T/48T）打开包装后请及时检查所有物品是否齐全。

2. 标准品浓度【dù】依次为：800、400、200、100、50、25 pg/mL

3. 经过大量【liàng】正常标本检验，标本【běn】的【de】正常浓度值【zhí】均在试剂盒提供的检【jiǎn】测范【fàn】围内【nèi】，实验过【guò】程中直【zhí】接取50μL样本【běn】上样即可。当有部分【fèn】样本值超过【guò】标准品浓度时【shí】，可【kě】用样本稀释液将【jiāng】标本进行适【shì】当稀释后再【zài】进行实验。

检测前准备工作：

1.请提前20分钟从冰箱中取出试剂盒，平衡至室温。

2.从冰箱中取出的【de】浓缩洗涤液【yè】可能有结晶，属于正常【cháng】现象；放置室温，轻【qīng】摇均匀，待结晶溶解【jiě】后【hòu】再配置洗涤液。可将20ml浓缩洗涤【dí】液用蒸【zhēng】馏水或去离子水稀释配置【zhì】成400ml工【gōng】作浓度的洗涤【dí】液，未用完的【de】放回【huí】4℃

3.20×洗涤缓冲液的【de】稀释：蒸馏水按1：20稀释【shì】，即1份20×洗涤缓【huǎn】冲液【yè】加19份蒸【zhēng】馏【liú】水。

实验原理：

试剂【jì】盒采用双抗【kàng】体一步夹【jiá】心法酶联【lián】免疫吸附试【shì】验（ELISA）。往【wǎng】预先【xiān】包被小鼠Ⅰ型前胶原C末端肽【tài】(CICP)捕获抗【kàng】体的包被微【wēi】孔中，依【yī】次加入标本、标【biāo】准品、HRP标记的【de】检测抗体，经【jīng】过【guò】温育并洗涤。用底物TMB显色【sè】，TMB在过氧化物酶的催化【huà】下转化成蓝色，并在酸的作用下【xià】转化【huà】成的【de】。颜【yán】色的深【shēn】浅和样【yàng】品中的小鼠Ⅰ型前胶原C末端肽【tài】(CICP)呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算【suàn】样品【pǐn】浓度。

实验所需自备试验器材：

1.酶标仪（450nm）

2.高精度加样【yàng】器及【jí】枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3.37℃恒温箱

4.蒸馏水或去离子水

样本处理及要求：

1.血清【qīng】：将收集于血清分离管的全血标【biāo】本在室温放【fàng】置【zhì】2小时或4℃过夜，然后1000×g离【lí】心20 分钟，取上【shàng】清【qīng】即【jí】可，或将【jiāng】上【shàng】清置于-20℃或-80℃保存，但应【yīng】避免反复【fù】冻融。

2.血浆【jiāng】：用EDTA或【huò】肝素【sù】作为抗凝【níng】剂采集【jí】标本，并将标本在采集【jí】后的30分钟内于【yú】9-21℃ 1000×g离【lí】心【xīn】15分钟，取【qǔ】上清即可检【jiǎn】测，或将上清置于-20℃或-80℃保【bǎo】存，但应避免反复冻融。

3.组织匀浆：用预【yù】冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲【chōng】洗组织【zhī】，去除残留血【xuè】液【yè】（匀【yún】浆中裂解的红细胞会影响测量【liàng】结果），称重后【hòu】将组织剪碎。将剪碎【suì】的组织与对应【yīng】体积的【de】PBS（一般按1:9的重量体【tǐ】积比【bǐ】，比如1g的组织样【yàng】品对应9mL的【de】PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好【hǎo】记【jì】录。推荐在PBS中【zhōng】加入蛋白酶抑制剂）加入玻璃匀浆【jiāng】器中，于冰上充分研【yán】磨【mó】。为了【le】进一步【bù】裂解组织【zhī】细【xì】胞，可以对匀浆液进行超声破碎【suì】，或反复冻融。将匀浆液于【yú】5000×g离心5~10分钟，取【qǔ】上清【qīng】检【jiǎn】测【cè】。

4.细胞【bāo】培养物上清：请1000×g离心【xīn】20分【fèn】钟，取上清【qīng】即可【kě】检测，或将上清【qīng】置于-20℃或-80℃保存，但应避免【miǎn】反复冻融。

5.其它生物标本：1000×g离心20分钟，取上清即可检测。

6.样品外观：样品应清澈透明，悬浮物应离心去除。

7.样【yàng】品保存：样品收集【jí】后若【ruò】在1周【zhōu】内进【jìn】行检测的【de】可保【bǎo】存于【yú】4℃，若不能及时检【jiǎn】测，请【qǐng】按一【yī】次使用【yòng】量分装，冻存于-20℃（1个月内检测），或-80℃（6个月内检测），避【bì】免反复冻融，标本溶血会影响检测【cè】结果，因此溶血标本不【bú】宜进行此项检测【cè】。

注意事项：

1.严格按照规定【dìng】的时间【jiān】和温【wēn】度【dù】进【jìn】行温育以保证【zhèng】准确结果。所有试剂【jì】都必须在使用前达到室温9-21℃。使【shǐ】用后【hòu】立即冷藏保存试剂。

2.洗板不正确【què】可以导致不准确的结【jié】果。在加入底物前确保尽【jìn】量吸干孔内【nèi】液【yè】体。温育【yù】过程中不要【yào】让【ràng】微孔干燥掉。

3.消除板底残留的液体和手指印，否则影响OD值。

4.底物显色液应呈无【wú】色或很浅【qiǎn】的颜色【sè】，已经变蓝【lán】的底物液【yè】不能使用。

5.避免试剂和标本的交叉污染以免造成错误结果。

6.在储存和温育时避免强光直接照射。

7.平衡至室温后再打开密封袋以防水滴凝聚在冷板条上。

8.任何反应试【shì】剂【jì】不能接触漂白溶【róng】剂或漂白【bái】溶【róng】剂所散发的强【qiáng】烈气体。任何漂白成分都会破坏试剂盒中【zhōng】反应试【shì】剂【jì】的生【shēng】物活性。

9.不能使用过期产品。

10.如果可能【néng】传播疾【jí】病，所有的【de】样【yàng】品都应管理【lǐ】好，按照规定的程序【xù】处理样品和【hé】检测装置。

小鼠Ⅰ型前胶原C末端肽(CICP)试剂盒操作步骤：

1．从室温平衡60min后的铝箔袋中【zhōng】取出所【suǒ】需板【bǎn】条，剩余板【bǎn】条用自封袋【dài】密封放回4℃。

2．设【shè】置标准品孔和样本【běn】孔，标准品孔【kǒng】各加不【bú】同浓度的标【biāo】准品50μL。

3．样本孔中a加入待测样本50μL；空白孔不加。

4．除空【kōng】白孔外【wài】，标准品孔和样本【běn】孔中每【měi】孔加入辣根过氧【yǎng】化物酶（HRP）标记的【de】检测抗体【tǐ】100μL，用封板【bǎn】膜封住【zhù】反应【yīng】孔，37℃水浴锅或恒温箱温育【yù】60min。

5．弃去液体，吸水纸上拍【pāi】干，每孔加【jiā】满洗涤【dí】液（350μL），静置1min，甩去洗涤液，吸【xī】水【shuǐ】纸上拍干【gàn】，如此重复洗板【bǎn】5次（也可用洗板机洗板）。

6．每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7．每孔加入终止【zhǐ】液50μL，15min内，在450nm波长处【chù】测定【dìng】各【gè】孔的OD值。

实验结果计算：

绘制标准曲线：在Excel工作表中，以标准品浓度作横坐【zuò】标【biāo】，对应【yīng】OD值作纵坐【zuò】标，绘制【zhì】出标准品【pǐn】线性回归【guī】曲线，按曲线方程计【jì】算各样本【běn】浓度值。

（此图仅供参考）

性能：

1. 检测范围：25 pg/mL – 800 pg/mL。

2.灵敏度：检测浓度小于1.0 pg/mL。

3.特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。

4.重复性：板内变异系【xì】数【shù】小【xiǎo】于10% ，板间变异系【xì】数小于【yú】15% 。

技术小提示：

1.当混合或重溶蛋白溶液时，尽量避免起沫。

2.为了避【bì】免交叉【chā】感染，配置不同浓度标准品、上【shàng】样、加【jiā】不同试剂都需【xū】要更换枪【qiāng】头。另外不同试【shì】剂请分别使用不同【tóng】的【de】移液槽。

3.每次孵育时，请正确使用封板胶可保证结果的准确性。

4.混合后的【de】显色底物在上板前应为无【wú】色【sè】，请避光保存；假如微孔板【bǎn】后，将由物色【sè】变成【chéng】不【bú】同深度【dù】的蓝色。

5.终止液上板【bǎn】顺序应同显色底【dǐ】物上板顺序一致；加入终止液【yè】后，孔内颜色由【yóu】蓝【lán】变【biàn】黄；若【ruò】孔内【nèi】有绿色，则表明孔内【nèi】液体未混【hún】匀；请充分混合。

说明：

1.由于现有条【tiáo】件及【jí】科【kē】学技术水平【píng】尚不能【néng】对所有【yǒu】供货商提供的所有原料进【jìn】行全面的【de】鉴定与【yǔ】分析，本产品可能存在一定的【de】质量技术风险。

2.的实【shí】验结果与试剂【jì】的【de】有效性、实验者的相关操作【zuò】以及当时的实验环【huán】境密切相关，请务【wù】必准备【bèi】充足的标【biāo】本备份。

3.不同批次的同一产品可能【néng】会有少许差别，如：检测限、灵敏度以【yǐ】及显色时间等【děng】，请【qǐng】依据试【shì】剂盒内【nèi】说明书进行实验操【cāo】作，网站电子版说【shuō】明【míng】书仅【jǐn】作参【cān】考。

4.只有全部使用本试剂盒配套试【shì】剂才能保证检【jiǎn】测【cè】效果【guǒ】，不能【néng】混用其他【tā】制造商【shāng】的产品。只【zhī】有严格遵【zūn】守本试剂盒的实验【yàn】说明【míng】才会得到的检测结果【guǒ】。