本试剂【jì】盒用于体【tǐ】外【wài】定【dìng】量【liàng】检测血清、血浆、组织匀浆及相关液体样本中人α干扰素(IFN-α)的【de】含量【liàng】。

有效期：6个月

保存条件：9-20℃

人α干扰素(IFN-α)试剂盒组成：

备注：

1. (96T/48T)打【dǎ】开包装后请及时检查所【suǒ】有【yǒu】物品【pǐn】是否齐全。

2. 标【biāo】准品【pǐn】浓度依次为：800、400、200、100、50、25 pg/mL

3. 经过大量正【zhèng】常标本【běn】检验【yàn】，标本的正常浓度【dù】值均在试剂盒提【tí】供的检测范围内，实验过程【chéng】中【zhōng】直接取50μL样本上样即可。当有【yǒu】部分样【yàng】本值【zhí】超过大标准品浓度时，可【kě】用【yòng】样本稀释液将标本进【jìn】行适当稀【xī】释后再进行实【shí】验。

检测前准备工作：

1.请提前20分钟从冰箱中取出试剂盒，平衡至室温。

2.从冰箱中【zhōng】取出的浓缩洗涤液可能有结【jié】晶，属于正常【cháng】现象；放置室温，轻【qīng】摇均匀，待结晶溶解后再配【pèi】置洗涤液。可将20ml浓【nóng】缩洗涤液用蒸【zhēng】馏水或【huò】去离子水稀释配置【zhì】成【chéng】400ml工作浓【nóng】度的洗涤液，未用【yòng】完的放回4℃

3.20×洗涤缓冲液的【de】稀释：蒸馏水按1：20稀【xī】释，即1份20×洗涤缓冲【chōng】液【yè】加【jiā】19份蒸馏水。

实验原理：

试剂盒采【cǎi】用双抗体一步夹心法酶联免疫【yì】吸【xī】附试【shì】验(ELISA)。往预【yù】先包【bāo】被人α干扰素(IFN-α)捕【bǔ】获抗体的包被微孔中，依【yī】次加【jiā】入标【biāo】本、标准品【pǐn】、HRP标记的检【jiǎn】测抗体，经过温育并【bìng】洗涤。用底物TMB显【xiǎn】色，TMB在过氧化物酶【méi】的催化下转化成【chéng】蓝色，并在酸的作【zuò】用下转化成的。颜【yán】色的【de】深浅和【hé】样品中的人α干扰【rǎo】素(IFN-α)呈正相【xiàng】关【guān】。用酶标【biāo】仪在450nm 波【bō】长下测定吸光【guāng】度(OD 值)，计算样【yàng】品【pǐn】浓度。

实验所需自备试验器材：

1.酶标仪(450nm)

2.高【gāo】精度加样【yàng】器及枪头【tóu】：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3.37℃恒温箱

4.蒸馏水或去离子水

样本处理及要求：

1.血清【qīng】：将收集于血清分离【lí】管的全血标【biāo】本在室【shì】温放置2小【xiǎo】时【shí】或4℃过夜，然后【hòu】1000×g离心20 分钟，取上【shàng】清即可，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免【miǎn】反复冻融。

2.血浆：用EDTA或肝素作为抗凝剂采集标【biāo】本【běn】，并【bìng】将标【biāo】本在采【cǎi】集后的30分钟内于【yú】9-20℃ 1000×g离心【xīn】15分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免【miǎn】反复冻融。

3.组织匀浆【jiāng】：用【yòng】预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织，去除残留血液(匀【yún】浆中裂解的红细胞会【huì】影响测【cè】量结果)，称重后将【jiāng】组【zǔ】织剪碎。将【jiāng】剪碎的组织与【yǔ】对应体积【jī】的PBS(一般按1:9的重量体积比，比如1g的【de】组织样品对应9mL的PBS，具体【tǐ】体积可根据实验需要适当调【diào】整，并做好记录。推【tuī】荐在【zài】PBS中加【jiā】入蛋【dàn】白酶【méi】抑制剂)加入玻璃匀浆器【qì】中，于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细【xì】胞，可以对匀浆液进行超声破碎，或【huò】反【fǎn】复冻融。将匀浆液于5000×g离心5~10分【fèn】钟，取上【shàng】清检【jiǎn】测。

4.细胞培养物上【shàng】清【qīng】：请1000×g离【lí】心20分钟【zhōng】，取上清即可【kě】检测，或将上清置【zhì】于-20℃或-80℃保存，但应避免【miǎn】反复冻融。

5.其它生物标本：1000×g离心20分钟，取上清即可检测。

6.样品外观：样品应清澈透明，悬浮物应离心去除。

7.样品保存：样品收【shōu】集后若在1周内进行检测的可保存于4℃，若不能【néng】及时检测，请按【àn】一次使用量分装，冻【dòng】存于-20℃(1个月【yuè】内【nèi】检测)，或-80℃(6个月内检测)，避免【miǎn】反复冻融，标本溶血会【huì】影【yǐng】响检测【cè】结果，因此【cǐ】溶血标本不宜进行【háng】此项检测【cè】。

注意事项：

1.严【yán】格按照规【guī】定的时间和【hé】温度进行温育以保证准确结果【guǒ】。所有试剂都必须在使用前达到【dào】室温【wēn】9-20℃。使【shǐ】用后立即冷藏保存【cún】试【shì】剂【jì】。

2.洗板不正确可以导致不准【zhǔn】确的结果。在加【jiā】入底物前确保【bǎo】尽量【liàng】吸【xī】干孔内液【yè】体。温育过程中不【bú】要让微【wēi】孔干燥掉【diào】。

3.消除板底残留的液体和手指印，否则影响OD值。

4.底物显色液【yè】应呈【chéng】无色或很浅的颜色，已【yǐ】经变蓝的底物液不【bú】能使【shǐ】用。

5.避免试剂和标本的交叉污染以免造成错误结果。

6.在储存和温育时避免强光直接照射。

7.平衡至室温后再打开密封袋以防水滴凝聚在冷板条上。

8.任何【hé】反应试剂【jì】不能接触漂白溶剂或【huò】漂【piāo】白溶剂所【suǒ】散发的【de】强烈气体。任何漂白成【chéng】分都会【huì】破坏试【shì】剂盒中反应试剂的生物活性。

9.不能使用过期产品。

10.如果可能传播【bō】疾病，所有的样品都应【yīng】管【guǎn】理好【hǎo】，按照【zhào】规定的程序处理样品和【hé】检测装置。

人α干扰素(IFN-α)试剂盒操作步骤：

1．从室温平衡60min后的铝箔【bó】袋【dài】中【zhōng】取出所需板条，剩【shèng】余板【bǎn】条用【yòng】自封袋密封放回【huí】4℃。

2．设【shè】置标准【zhǔn】品孔和样本孔，标准品孔各加【jiā】不同浓度的标【biāo】准品50μL。

3．样本孔中a加入待测样本50μL；空白孔不加。

4．除【chú】空白孔【kǒng】外，标准品孔【kǒng】和样本孔中【zhōng】每孔加入辣根过【guò】氧化物【wù】酶(HRP)标记【jì】的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔【kǒng】，37℃水浴锅或恒温箱温育【yù】60min。

5．弃去液【yè】体，吸水【shuǐ】纸上【shàng】拍干，每孔加【jiā】满洗涤【dí】液(350μL)，静置【zhì】1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次【cì】(也可【kě】用洗板机【jī】洗板【bǎn】)。

6．每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7．每孔【kǒng】加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测【cè】定各孔的OD值。

实验结果计算：

绘制标准曲线：在Excel工作表中【zhōng】，以标准品浓度作【zuò】横【héng】坐标，对应OD值作【zuò】纵坐【zuò】标，绘【huì】制出标准品线性【xìng】回归曲线，按曲线方【fāng】程计【jì】算各样【yàng】本浓度值。

(此图仅供参考)

性能：

1. 检测范围：25 pg/mL – 800 pg/mL。

2.灵敏度：检测浓度小于1.0 pg/mL。

3.特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。

4.重复性：板内变异系数小于【yú】10% ，板间【jiān】变异系【xì】数【shù】小于15% 。

技术小提示：

1.当混合或重溶蛋白溶液时，尽量避免起沫。

2.为了避免交叉感染，配置不同浓【nóng】度标准【zhǔn】品【pǐn】、上样【yàng】、加【jiā】不同试剂都需要更换枪【qiāng】头。另【lìng】外不同试剂请分别使用【yòng】不同的【de】移液槽。

3.每次孵育时，请正确使用封板胶可保证结果的准确性。

4.混合后的【de】显色底物在【zài】上板前应为无色，请【qǐng】避光保存；假如微孔【kǒng】板后，将由物【wù】色变成不【bú】同深【shēn】度的蓝【lán】色。

5.终【zhōng】止液【yè】上板【bǎn】顺序应同显色底【dǐ】物上板顺序一致；加入终止液后，孔内【nèi】颜色由【yóu】蓝【lán】变黄；若孔内【nèi】有绿色，则表明孔内液体【tǐ】未混匀；请充分混合【hé】。

说明：

1.由于现有条件及【jí】科【kē】学技【jì】术【shù】水平尚不能对所有供货商提【tí】供【gòng】的所有原料【liào】进行全面的鉴定与分析，本产品【pǐn】可能存在一定的质量技【jì】术【shù】风险【xiǎn】。

2.的实验结果与试剂的【de】有效【xiào】性、实验者的相【xiàng】关操作以【yǐ】及当时的【de】实验【yàn】环境密切相关，请【qǐng】务必准备充足的标本备份。

3.不同批次的【de】同【tóng】一产品【pǐn】可能会【huì】有少许差别，如：检测【cè】限、灵【líng】敏度【dù】以及显色时间等，请依据试剂盒内说明书进行实验【yàn】操【cāo】作，网站电子版【bǎn】说明书仅作参【cān】考。

4.只有全部使【shǐ】用本【běn】试剂盒配套试剂才【cái】能【néng】保证【zhèng】检测效果，不能混用其【qí】他制造商【shāng】的产品。只有严格遵守【shǒu】本试剂盒的实验说明【míng】才会得到的检【jiǎn】测结【jié】果。