本试剂盒用于体【tǐ】外【wài】定量检测【cè】血清、血浆【jiāng】、组织匀浆及相关液体【tǐ】样本中鸡生长激【jī】素(GH)的含【hán】量【liàng】。

有效期：6个月

保存条件：9-21℃

鸡生长激素(GH)试剂盒组成：

备注：

1. (96T/48T)打开包装后请及时【shí】检查所有物【wù】品是否【fǒu】齐全【quán】。

2. 标准品浓度依【yī】次为：800、400、200、100、50、25 pg/mL

3. 经【jīng】过大量正常标本检验，标本的正常浓度值均在试剂【jì】盒【hé】提供【gòng】的【de】检测范围【wéi】内，实【shí】验过【guò】程中直【zhí】接取50μL样【yàng】本上样即可。当有【yǒu】部分【fèn】样本值超【chāo】过标【biāo】准品【pǐn】浓度时，可用样本稀释【shì】液将【jiāng】标本进行适当稀释后再进行实验。

检测前准备工作：

1.请提前20分钟从冰箱中取出试剂盒，平衡至室温。

2.从冰箱中【zhōng】取出【chū】的浓缩洗涤液可能【néng】有【yǒu】结晶，属于正【zhèng】常现象；放置室温，轻摇【yáo】均【jun1】匀【yún】，待结晶溶解后再配置洗涤【dí】液。可将20ml浓缩洗【xǐ】涤液【yè】用【yòng】蒸馏水或去离【lí】子水稀【xī】释配置成400ml工作浓度的洗【xǐ】涤液【yè】，未用完的【de】放回4℃

3.20×洗【xǐ】涤缓冲液的【de】稀释：蒸馏水按1：20稀释，即【jí】1份20×洗涤缓冲【chōng】液加19份蒸馏水。

实验原理：

试剂盒采用双抗体一步夹【jiá】心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。往【wǎng】预【yù】先【xiān】包被鸡生长激素(GH)捕【bǔ】获抗【kàng】体的包被微孔中【zhōng】，依次加【jiā】入标本、标准品【pǐn】、HRP标【biāo】记的检测抗体，经过温育并洗涤【dí】。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催【cuī】化下转化成蓝色，并在酸的作用下转【zhuǎn】化成的【de】。颜【yán】色【sè】的深浅和样品中的鸡生长激素【sù】(GH)呈【chéng】正相关。用【yòng】酶标【biāo】仪在【zài】450nm 波【bō】长【zhǎng】下测定吸光度【dù】(OD 值)，计算样品浓度。

实验所需自备试验器材：

1.酶标仪(450nm)

2.高【gāo】精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3.37℃恒温箱

4.蒸馏水或去离子水

样本处理及要求：

1.血清：将【jiāng】收集【jí】于血清分【fèn】离管的全血标本在【zài】室温【wēn】放置2小【xiǎo】时或4℃过夜，然后1000×g离心【xīn】20 分钟，取上清即可，或【huò】将【jiāng】上清置于-20℃或-80℃保【bǎo】存，但应避【bì】免反复冻融。

2.血浆：用EDTA或肝素作为抗凝剂采集【jí】标本，并将标【biāo】本在采集后的30分钟内于9-21℃ 1000×g离【lí】心【xīn】15分【fèn】钟，取上清即可检测，或将上【shàng】清置于【yú】-20℃或-80℃保【bǎo】存，但应避【bì】免【miǎn】反复冻融。

3.组织匀【yún】浆：用【yòng】预【yù】冷【lěng】的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织，去除【chú】残留血液(匀浆中裂解的红细胞会影响测量【liàng】结果)，称重后将组织剪碎。将剪碎【suì】的组织与【yǔ】对应体积的PBS(一般按1:9的重量体积比，比【bǐ】如1g的【de】组织【zhī】样【yàng】品对应【yīng】9mL的PBS，具体【tǐ】体积可根据实验【yàn】需要适当【dāng】调【diào】整，并做好记录【lù】。推荐【jiàn】在PBS中加入蛋白酶抑制剂)加【jiā】入玻璃匀浆器【qì】中，于冰上充分研磨【mó】。为了进一步裂解组织【zhī】细胞，可以对匀浆液【yè】进行【háng】超声破碎，或反复冻融【róng】。将匀浆【jiāng】液【yè】于5000×g离心5~10分钟，取上【shàng】清检测。

4.细胞培养物【wù】上清：请1000×g离心20分钟，取上清即可【kě】检测【cè】，或将上清置【zhì】于-20℃或-80℃保存，但应避【bì】免反复冻【dòng】融【róng】。

5.其它生物标本：1000×g离心20分钟，取上清即可检测。

6.样品外观：样品应清澈透明，悬浮物应离心去除。

7.样【yàng】品保存：样品收集【jí】后若在1周【zhōu】内进行检测的可保存【cún】于4℃，若不能及时检测，请按一次使用量分【fèn】装，冻存于-20℃(1个月【yuè】内【nèi】检测)，或-80℃(6个月内检测)，避免反复冻融，标本【běn】溶【róng】血会影【yǐng】响【xiǎng】检【jiǎn】测【cè】结果，因此溶血标本不宜进行此项【xiàng】检测。

注意事项：

1.严格【gé】按照【zhào】规定的时【shí】间和温【wēn】度进行【háng】温育以保【bǎo】证准确结果【guǒ】。所【suǒ】有试剂都必须在使用前达到室温9-21℃。使用后【hòu】立即冷藏保存试剂。

2.洗板不正确可以【yǐ】导【dǎo】致不准【zhǔn】确的结果。在【zài】加入底物前确保尽【jìn】量吸干孔内【nèi】液体。温育【yù】过程中不要【yào】让微【wēi】孔干燥掉。

3.消除板底残留的液体和手指印，否则影响OD值。

4.底【dǐ】物显色【sè】液应呈无【wú】色或很【hěn】浅的颜【yán】色，已经变蓝的【de】底物液不能使用。

5.避免试剂和标本的交叉污染以免造成错误结果。

6.在储存和温育时避免强光直接照射。

7.平衡至室温后再打开密封袋以防水滴凝聚在冷板条上。

8.任何反应试剂【jì】不能接触漂【piāo】白溶【róng】剂或漂白溶剂【jì】所【suǒ】散发的强烈气体【tǐ】。任何漂白成分都会【huì】破【pò】坏试剂盒中反【fǎn】应试剂的生物活性【xìng】。

9.不能使用过期产品。

10.如果可能传播疾病，所【suǒ】有【yǒu】的样【yàng】品都应管理好【hǎo】，按照【zhào】规定的程序处理样品和检【jiǎn】测装置【zhì】。

鸡生长激素(GH)试剂盒操作步骤：

1．从【cóng】室【shì】温平衡60min后的铝【lǚ】箔袋中取出所【suǒ】需板条，剩余【yú】板条用自封袋密【mì】封放【fàng】回4℃。

2．设置标准品孔【kǒng】和样本孔，标【biāo】准品孔各加不同浓【nóng】度的【de】标准品【pǐn】50μL。

3．样本孔中a加入待测样本50μL；空白孔不加。

4．除【chú】空白孔外，标准品孔和样本【běn】孔中每孔加入辣【là】根过氧化【huà】物酶(HRP)标记的检测抗体【tǐ】100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴【yù】锅或恒【héng】温箱温【wēn】育60min。

5．弃去液体，吸水纸上【shàng】拍干，每孔加【jiā】满洗涤液(350μL)，静【jìng】置【zhì】1min，甩【shuǎi】去洗【xǐ】涤液，吸水纸上拍干，如【rú】此重复洗板5次(也【yě】可用洗【xǐ】板机洗板)。

6．每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7．每孔加入【rù】终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔【kǒng】的【de】OD值。

实验结果计算：

绘制标准曲线：在Excel工【gōng】作表中，以标准【zhǔn】品【pǐn】浓度【dù】作横坐标，对应OD值作纵【zòng】坐标，绘【huì】制出【chū】标【biāo】准品线性回【huí】归曲线，按曲线方程计算各样【yàng】本浓度值。

(此图仅供参考)

性能：

1. 检测范围：25 pg/mL – 800 pg/mL。

2.灵敏度：检测浓度小于1.0 pg/mL。

3.特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。

4.重复性：板内变异系【xì】数小【xiǎo】于【yú】10% ，板间【jiān】变异系数小于15% 。

技术小提示：

1.当混合或重溶蛋白溶液时，尽量避免起沫。

2.为【wéi】了避免【miǎn】交【jiāo】叉感染，配置不同【tóng】浓【nóng】度标准品、上样、加不同试剂【jì】都需要更【gèng】换【huàn】枪头【tóu】。另外不同试剂请分别使用不同的移液槽【cáo】。

3.每次孵育时，请正确使用封板胶可保证结果的准确性。

4.混【hún】合【hé】后的显【xiǎn】色底物在上板前应为无色，请避光【guāng】保存【cún】；假如微孔板后，将由物色变【biàn】成不【bú】同深度【dù】的蓝色【sè】。

5.终止液上板顺序【xù】应【yīng】同显色底物上板【bǎn】顺序一【yī】致【zhì】；加入【rù】终止液后，孔内【nèi】颜【yán】色由蓝变黄；若孔内有绿【lǜ】色，则表明孔内液体未混匀；请充分混【hún】合。

说明：

1.由于现有条件及科学技术水平尚【shàng】不能对所有【yǒu】供货商提供的所有原【yuán】料【liào】进【jìn】行【háng】全面的鉴定与【yǔ】分【fèn】析【xī】，本产品可能存在【zài】一定的质量【liàng】技术风险。

2的【de】实验结果与【yǔ】试剂的有效性、实验【yàn】者的相【xiàng】关操作以及当时的实验环境【jìng】密切相关【guān】，请务必准备【bèi】充【chōng】足的标本备份【fèn】。

3.不【bú】同批次的同一产品【pǐn】可能【néng】会有少【shǎo】许差别，如【rú】：检测限【xiàn】、灵敏度以及显色时间等，请【qǐng】依【yī】据试剂盒内说【shuō】明书进行实验操作，网站电子版说明书【shū】仅作参考。

4.只有全【quán】部使用本试剂盒配套【tào】试剂才能保证【zhèng】检测效果，不能【néng】混用其他商的产品。只有严格遵守【shǒu】本【běn】试【shì】剂盒的实验说【shuō】明才会得到的检测结【jié】果。