本【běn】试剂盒用于体外定量检测血清、血【xuè】浆、组织匀【yún】浆及相关液体【tǐ】样本中猴白细胞【bāo】介素2(IL-2)的含量【liàng】。

有效期：6个月

保存条件：9-21℃

猴白细胞介素2(IL-2)试剂盒组成：

备注：

1. (96T/48T)打【dǎ】开包装【zhuāng】后请及时【shí】检查所有物品是否齐全。

2. 标【biāo】准品浓【nóng】度依次为：800、400、200、100、50、25 pg/mL

3. 经过大【dà】量正常【cháng】标【biāo】本检验，标本【běn】的【de】正常浓度值均在试剂盒提供【gòng】的【de】检测范围内【nèi】，实验【yàn】过程中直接取【qǔ】50μL样本上样即可。当【dāng】有部分样本值【zhí】超过【guò】标准品浓度时，可用【yòng】样本稀释液将【jiāng】标本进行适当稀【xī】释后【hòu】再进行实验。

检测前准备工作：

1.请提前20分钟从冰箱中取出试剂盒，平衡至室温。

2.从冰箱中取出的浓缩洗涤液可能有【yǒu】结【jié】晶，属于正常现象；放置室温，轻摇均匀，待结【jié】晶溶【róng】解【jiě】后再配【pèi】置洗涤液。可将【jiāng】20ml浓缩洗涤液用蒸【zhēng】馏水【shuǐ】或去【qù】离子水稀释【shì】配置成400ml工作浓【nóng】度的【de】洗涤液，未用完的放回4℃

3.20×洗涤缓冲液的【de】稀释【shì】：蒸馏水按1：20稀释，即【jí】1份【fèn】20×洗涤缓冲液加19份蒸馏水【shuǐ】。

实验原理：

试【shì】剂盒采用【yòng】双抗体【tǐ】一【yī】步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。往预【yù】先包【bāo】被【bèi】猴白细胞【bāo】介素2(IL-2)捕【bǔ】获抗体【tǐ】的包被微孔中，依【yī】次加入标本、标准【zhǔn】品【pǐn】、HRP标【biāo】记【jì】的检测抗体【tǐ】，经过温【wēn】育并洗涤。用底物TMB显【xiǎn】色，TMB在【zài】过氧化物酶【méi】的催化下转化【huà】成蓝色，并在【zài】酸的作用下转【zhuǎn】化成的。颜色【sè】的深浅和样品中的猴白细胞介素2(IL-2)呈正相【xiàng】关。用酶标仪在450nm 波【bō】长下测定吸光度(OD 值)，计算样品浓度。

实验所需自备试验器材：

1.酶标仪(450nm)

2.高精度加样器及枪头【tóu】：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3.37℃恒温箱

4.蒸馏水或去离子水

样本处理及要求：

‍

1.血【xuè】清：将收集于血清分离【lí】管的全血标本在【zài】室温放置2小时或【huò】4℃过夜，然后1000×g离【lí】心20 分钟，取上清即【jí】可，或将上清置于-20℃或【huò】-80℃保存，但应避免反【fǎn】复冻融【róng】。

2.血浆：用【yòng】EDTA或肝素作为抗【kàng】凝剂采集标【biāo】本，并将标本在【zài】采集后的30分钟内于9-21℃ 1000×g离心15分钟，取上【shàng】清即可【kě】检【jiǎn】测，或将上【shàng】清置于-20℃或-80℃保存，但应避【bì】免反复冻融。

3.组织匀浆：用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织，去除残留血【xuè】液(匀浆中裂解的红细胞会影【yǐng】响测量结果)，称重【chóng】后【hòu】将组织剪【jiǎn】碎。将剪碎的组织【zhī】与对应体积的PBS(一般按【àn】1:9的重量体积【jī】比，比如1g的【de】组织【zhī】样品对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当【dāng】调整，并做好记录【lù】。推荐在PBS中加入【rù】蛋白【bái】酶抑制剂【jì】)加【jiā】入玻璃匀浆器中，于冰上充分【fèn】研磨。为了进【jìn】一【yī】步裂解组织细胞【bāo】，可以对匀【yún】浆液【yè】进行【háng】超声【shēng】破碎【suì】，或反【fǎn】复【fù】冻融。将匀浆液于5000×g离心【xīn】5~10分钟，取【qǔ】上清检测。

4.细胞培【péi】养物上清：请【qǐng】1000×g离心20分钟，取上【shàng】清即可检测，或将上【shàng】清置【zhì】于【yú】-20℃或-80℃保存，但应避免反复【fù】冻融【róng】。

5.其它生物标本：1000×g离心20分钟，取上清即可检测。

6.样品外观：样品应清澈透明，悬浮物应离心去除。

7.样品保存【cún】：样品收集【jí】后若【ruò】在1周内进行【háng】检【jiǎn】测的【de】可保存于4℃，若不能【néng】及时检测，请【qǐng】按一次使用量分装，冻存【cún】于-20℃(1个月内检测)，或【huò】-80℃(6个月内检测)，避免【miǎn】反复冻融，标本【běn】溶血会影响检测结果，因此【cǐ】溶血标本【běn】不宜进行此【cǐ】项检测。

注意事项：

1.严格按照规定的时间和温度【dù】进行【háng】温育以【yǐ】保证【zhèng】准确结果。所有试剂都必【bì】须在使用前达到【dào】室温9-21℃。使用后立即【jí】冷【lěng】藏保存【cún】试剂。

2.洗板不正确可以导致【zhì】不【bú】准【zhǔn】确的结【jié】果。在加入【rù】底物【wù】前确保尽量吸干孔内【nèi】液体。温育过程【chéng】中不要让微孔干【gàn】燥掉。

3.消除板底残留的液体和手指印，否则影响OD值。

4.底物【wù】显色液应呈【chéng】无【wú】色或很浅的【de】颜色【sè】，已【yǐ】经变蓝的底物液不能使用。

5.避免试剂和标本的交叉污染以免造成错误结果。

6.在储存和温育时避免强光直接照射。

7.平衡至室温后再打开密封袋以防水滴凝聚在冷板条上。

8.任何反【fǎn】应试【shì】剂不能接触漂白溶剂或漂白溶剂【jì】所散发的强【qiáng】烈气体【tǐ】。任何漂白成分都会破坏试剂【jì】盒中【zhōng】反应试【shì】剂的【de】生物活性。

9.不能使用过期产品。

10.如果可能传【chuán】播疾病，所有【yǒu】的样品都【dōu】应管理好【hǎo】，按【àn】照规定的程序处理【lǐ】样【yàng】品和检测装置。

猴白细胞介素2(IL-2)试剂盒操作步骤：

1．从【cóng】室温平衡60min后的铝箔【bó】袋中取出所需板条【tiáo】，剩余板条用【yòng】自封袋【dài】密封放回【huí】4℃。

2．设置标准品孔和样本孔，标准【zhǔn】品孔各【gè】加不同浓度【dù】的标准品50μL。

3．样本孔中a加入待测样本50μL；空白孔不加。

4．除空白【bái】孔外【wài】，标准品孔和样本孔中每孔【kǒng】加入辣根【gēn】过氧【yǎng】化物酶(HRP)标【biāo】记【jì】的检测抗体100μL，用封【fēng】板膜封【fēng】住反应孔，37℃水浴锅或恒【héng】温箱温育60min。

5．弃去液体，吸水纸【zhǐ】上拍干，每孔【kǒng】加满【mǎn】洗涤液(350μL)，静置1min，甩去洗【xǐ】涤液，吸水纸【zhǐ】上拍干，如此重复【fù】洗板5次(也可用【yòng】洗板机洗【xǐ】板)。

6．每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7．每孔【kǒng】加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔【kǒng】的OD值。

实验结果计算：

绘制标【biāo】准曲线：在Excel工作表中，以标【biāo】准品浓【nóng】度作横坐标【biāo】，对应OD值作纵【zòng】坐标，绘制【zhì】出标准品【pǐn】线【xiàn】性【xìng】回归【guī】曲线，按曲线方程计算各样本浓度值【zhí】。

(此图仅供参考)

性能：

1. 检测范围：25 pg/mL – 800 pg/mL。

2.灵敏度：检测浓度小于1.0 pg/mL。

3.特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。

4.重复性：板【bǎn】内变【biàn】异系【xì】数【shù】小于10% ，板间变异【yì】系数小于15% 。

技术小提示：

1.当混合或重溶蛋白溶液时，尽量避免起沫。

2.为了避免交叉感染，配置不同浓度标准品、上样、加不同【tóng】试剂都需要【yào】更【gèng】换枪头。另外不同试【shì】剂【jì】请分别使用【yòng】不【bú】同的移液【yè】槽。

3.每次孵育时，请正确使用封板胶可保证结果的准确性。

4.混合【hé】后的【de】显色【sè】底物在上板前应为无色，请【qǐng】避【bì】光保存；假如【rú】微孔板后，将由物色【sè】变成不同深度的蓝色。

5.终止液上板【bǎn】顺【shùn】序应同显色【sè】底物上板顺序一致【zhì】；加【jiā】入终止液【yè】后，孔内颜色【sè】由蓝变【biàn】黄；若孔内有【yǒu】绿色，则【zé】表明孔【kǒng】内液体未混匀；请充分混合。

说明：

1.由于现有条件及科学技术水【shuǐ】平尚不能【néng】对【duì】所有供货商提供的所【suǒ】有原料【liào】进行全面【miàn】的鉴【jiàn】定与分析【xī】，本产品可能存在一定的质量技术风【fēng】险。

2.的【de】实验结【jié】果【guǒ】与试剂的有效【xiào】性、实【shí】验者的相关操作以及当时的实验环境密【mì】切相关【guān】，请务必准备充足的标本【běn】备份。

3.不同批【pī】次的同一【yī】产品可能【néng】会有少许差别，如：检测限【xiàn】、灵敏【mǐn】度以【yǐ】及【jí】显色时间等，请依据试剂盒内说明书进行【háng】实验操作，网【wǎng】站电【diàn】子版说明书仅作参【cān】考。

4.只有全部使【shǐ】用本试剂盒配套试剂才能保证检测效果【guǒ】，不能【néng】混【hún】用其他商的产品。只【zhī】有【yǒu】严格【gé】遵守【shǒu】本【běn】试剂盒的【de】实验【yàn】说明才会得到的检测结果。