本试【shì】剂盒【hé】用于体【tǐ】外【wài】定量检测血清、血浆、组织匀浆【jiāng】及相关液体样本【běn】中鸡皮质酮【tóng】(CORT)的含量。

有效期：6个月

保存条件：9-21℃

鸡皮质酮(CORT)试剂盒组成：

备注：

1. (96T/48T)打开包装后请及【jí】时检查所有物【wù】品是否齐【qí】全【quán】。

2. 标准品浓度依次【cì】为：800、400、200、100、50、25 pg/mL

3. 经过大量正常标本【běn】检验【yàn】，标本的【de】正常【cháng】浓度值均在【zài】试剂盒提供的检测范围内，实验过程中【zhōng】直接【jiē】取50μL样【yàng】本上样即可。当【dāng】有部分样【yàng】本值超过大标准品浓度【dù】时，可用样本【běn】稀释液将标本进【jìn】行适当【dāng】稀释后再进【jìn】行实验。

检测前准备工作：

1.请提前20分钟从冰箱中取出试剂盒，平衡至室温。

2.从冰箱【xiāng】中取出的浓缩洗涤液可能有结晶，属于正【zhèng】常【cháng】现象；放置室温，轻摇均【jun1】匀，待结晶【jīng】溶解后再配置洗涤液。可将20ml浓缩【suō】洗涤【dí】液用蒸【zhēng】馏【liú】水【shuǐ】或去【qù】离子水稀释配置成400ml工【gōng】作浓度的洗涤液【yè】，未【wèi】用完的放回4℃

3.20×洗涤缓冲液【yè】的【de】稀释：蒸馏【liú】水【shuǐ】按1：20稀释，即1份20×洗涤缓冲液加19份蒸馏水。

实验原理：

试剂盒采用双抗体【tǐ】一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。往预先包被鸡皮质【zhì】酮 (CORT)捕获抗体的包被微【wēi】孔中，依【yī】次加入标本、标准品、HRP标记【jì】的检测抗体，经过【guò】温育并【bìng】洗涤。用底【dǐ】物【wù】TMB显色，TMB在过氧化物酶【méi】的催化下【xià】转化成【chéng】蓝色【sè】，并在酸的【de】作【zuò】用下【xià】转化成终的。颜色的深浅和样品【pǐn】中的鸡【jī】皮质酮 (CORT)呈正相关。用酶标【biāo】仪在450nm 波长【zhǎng】下【xià】测定【dìng】吸光度【dù】(OD 值【zhí】)，计算样品浓度【dù】。

实验所需自备试验器材：

1.酶标仪(450nm)

2.高精【jīng】度加样器及【jí】枪头【tóu】：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3.37℃恒温箱

4.蒸馏水或去离子水

样本处理及要求：

1.血清：将收集于血【xuè】清【qīng】分离管【guǎn】的【de】全血标本在【zài】室温放【fàng】置2小时或4℃过夜，然后【hòu】1000×g离心20 分钟，取上清即可【kě】，或【huò】将上清置于-20℃或-80℃保存，但应【yīng】避【bì】免反复冻融。

2.血浆：用EDTA或肝素作为抗凝剂采【cǎi】集标本，并将标本在采集后的30分钟【zhōng】内于【yú】9-21℃ 1000×g离心【xīn】15分钟，取【qǔ】上清即【jí】可检测，或将【jiāng】上【shàng】清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反【fǎn】复冻融。

3.组织【zhī】匀【yún】浆：用预冷【lěng】的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组【zǔ】织【zhī】，去除残留【liú】血液(匀浆【jiāng】中裂解【jiě】的红细胞【bāo】会【huì】影响测量结果)，称重后将组织剪【jiǎn】碎。将剪【jiǎn】碎的组织与对应体积的【de】PBS(一般【bān】按【àn】1:9的重量体积比，比如1g的组【zǔ】织样品对应9mL的【de】PBS，具体体积可根据【jù】实验需要适当调整，并做好记录。推荐【jiàn】在PBS中加入蛋白酶抑制【zhì】剂)加【jiā】入玻璃匀浆器中【zhōng】，于【yú】冰上充分研【yán】磨。为了进一步裂解组【zǔ】织细【xì】胞【bāo】，可【kě】以对【duì】匀浆液【yè】进【jìn】行超【chāo】声破碎，或反复冻融。后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟，取上清检测。

4.细胞【bāo】培养物上清【qīng】：请1000×g离心20分钟，取上【shàng】清即可检测，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避【bì】免反复冻融【róng】。

5.其它生物标本：1000×g离心20分钟，取上清即可检测。

6.样品外观：样品应清澈透明，悬浮物应离心去除。

7.样品保存：样品收【shōu】集后若【ruò】在1周内进行【háng】检测的【de】可【kě】保存于4℃，若【ruò】不【bú】能及时检测，请按一次使用量分装，冻存于【yú】-20℃(1个月【yuè】内检测)，或-80℃(6个月内检测)，避免反【fǎn】复冻融【róng】，标本溶血会影响后检测结果，因此溶血标本不宜进行【háng】此项检测。

注意事项：

1.严【yán】格按照规【guī】定【dìng】的时间和温度进行温育以保证准确结果。所有试【shì】剂都必【bì】须在使【shǐ】用前达到室温【wēn】9-21℃。使用后立即冷藏保【bǎo】存试剂。

2.洗【xǐ】板不正确可以【yǐ】导致【zhì】不准确的结果。在加入底【dǐ】物前确保尽量吸干孔【kǒng】内液体。温育过程【chéng】中不要让微孔干燥掉。

3.消除板底残留的液体和手指印，否则影响OD值。

4.底物显色液【yè】应【yīng】呈无色或很浅【qiǎn】的颜色，已经变蓝的底物液不能使【shǐ】用【yòng】。

5.避免试剂和标本的交叉污染以免造成错误结果。

6.在储存和温育时避免强光直接照射。

7.平衡至室温后再打开密封袋以防水滴凝聚在冷板条上。

8.任【rèn】何反应试剂【jì】不能接触漂白溶剂或【huò】漂白溶剂所【suǒ】散【sàn】发的强烈【liè】气体。任何漂【piāo】白成分都【dōu】会破坏试剂盒中反【fǎn】应【yīng】试剂的生物活性。

9.不能使用过期产品。

10.如【rú】果可能传播疾病，所有的样品都应管理好，按【àn】照【zhào】规定的程序处理样品【pǐn】和检【jiǎn】测装置。

鸡皮质酮(CORT)试剂盒操作步骤：

1．从【cóng】室【shì】温平衡【héng】60min后的【de】铝箔袋中取出所需板条，剩余【yú】板条用自封袋密封放回4℃。

2．设【shè】置【zhì】标准品孔和样【yàng】本孔，标准品【pǐn】孔各加不同浓度的标准品50μL。

3．样本孔中a加入待测样本50μL；空白孔不加。

4．除空白【bái】孔外，标准品孔和【hé】样本孔【kǒng】中每孔加【jiā】入辣根【gēn】过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴【yù】锅或恒【héng】温箱【xiāng】温育60min。

5．弃去液体，吸【xī】水纸上拍干【gàn】，每孔加满洗【xǐ】涤液【yè】(350μL)，静置1min，甩去洗涤【dí】液【yè】，吸水纸上【shàng】拍干，如此【cǐ】重复【fù】洗板5次(也可用洗板机洗板)。

6．每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7．每孔加入终【zhōng】止液50μL，15min内，在450nm波长处【chù】测定各孔【kǒng】的OD值。

实验结果计算：

绘【huì】制标准曲线：在【zài】Excel工作表中【zhōng】，以标准【zhǔn】品浓【nóng】度作横坐标【biāo】，对应OD值作纵坐【zuò】标，绘制出标准品【pǐn】线性回归【guī】曲线，按曲线【xiàn】方程计算各样本浓度值。

(此图仅供参考)

性能：

1. 检测范围：25 pg/mL – 800 pg/mL。

2.灵敏度：检测浓度小于1.0 pg/mL。

3.特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。

4.重复性【xìng】：板内变【biàn】异【yì】系数【shù】小于【yú】10% ，板间变异系数小于15% 。

技术小提示：

1.当混合或重溶蛋白溶液时，尽量避免起沫。

2.为了避免交叉【chā】感【gǎn】染【rǎn】，配置【zhì】不【bú】同浓度标准品、上样、加不同试剂都需要【yào】更换枪【qiāng】头。另外不同试剂请分别使用【yòng】不【bú】同的【de】移液槽。

3.每次孵育时，请正确使用封板胶可保证结果的准确性。

4.混【hún】合后【hòu】的显色底物在上板前【qián】应为无色，请避光【guāng】保存；假如【rú】微孔板后，将【jiāng】由物【wù】色变成不同【tóng】深度的蓝色。

5.终止液【yè】上板顺【shùn】序应【yīng】同显色【sè】底物【wù】上板顺序一致；加入终止液后，孔内颜色【sè】由蓝变【biàn】黄；若孔【kǒng】内有绿色，则表明孔内液体未混匀；请【qǐng】充分混合。

说明：

1.由于现有条件及【jí】科学技【jì】术【shù】水平尚不能【néng】对【duì】所有供【gòng】货【huò】商提供的所有原料进行全面的【de】鉴定与分析，本产品可能存【cún】在【zài】一定的【de】质量技术风险。

2.终的实验结果与试剂【jì】的有效性、实【shí】验者的相关【guān】操作以及当时的实验环境【jìng】密切相关，请【qǐng】务必准备【bèi】充足的【de】标本备份。

3.不【bú】同【tóng】批次【cì】的同【tóng】一产品可能会有【yǒu】少许差别，如：检【jiǎn】测限、灵敏【mǐn】度以及显色时间等，请【qǐng】依据试剂盒内说明【míng】书进行实验操作，网站电子版【bǎn】说明书仅作参【cān】考。

4.只有全部使【shǐ】用本试剂盒【hé】配【pèi】套试【shì】剂才能保证检测效果，不【bú】能混【hún】用其他商的产品。只有严格遵守【shǒu】本试剂盒的实【shí】验说明才【cái】会【huì】得到佳的检测结果。