本【běn】试剂盒用于体外【wài】定量【liàng】检测血清、血浆、组【zǔ】织匀浆及相关【guān】液体样本中猴【hóu】γ干扰素(IFN-γ)的含量。

有效期：6个月

保存条件：9-22℃

猴γ干扰素(IFN-γ)试剂盒组成：

备注：

1. (96T/48T)打开包装后请及时检查所有物品是【shì】否【fǒu】齐全【quán】。

2. 标【biāo】准品浓度依次为【wéi】：800、400、200、100、50、25 pg/mL

3. 经过大量正常标本检【jiǎn】验【yàn】，标本的正常浓【nóng】度值【zhí】均在试剂盒提供的检测范围内，实验过程【chéng】中直接取【qǔ】50μL样【yàng】本上样即可。当有部分【fèn】样【yàng】本值【zhí】超【chāo】过大标【biāo】准品浓度时，可用样本稀【xī】释液将标本进行适【shì】当稀释【shì】后再进行实验【yàn】。

检测前准备工作：

1. 请提前20分钟从冰箱中取出试剂盒，平衡至室温。

2. 从冰箱中【zhōng】取【qǔ】出的浓【nóng】缩洗涤【dí】液【yè】可能有结晶，属于正常现象；放【fàng】置室温，轻【qīng】摇均匀，待【dài】结晶【jīng】溶解后再配【pèi】置洗【xǐ】涤液【yè】。可将20ml浓缩洗涤【dí】液【yè】用蒸馏【liú】水或去离子水稀释配置成400ml工作浓度的洗涤液，未用完的放回4℃

3. 20×洗涤缓【huǎn】冲液的稀释：蒸馏水【shuǐ】按1：20稀【xī】释，即1份20×洗涤缓【huǎn】冲液【yè】加【jiā】19份蒸馏水。

实验原理：

试剂盒采用双抗体一【yī】步夹【jiá】心法酶联免【miǎn】疫吸附【fù】试【shì】验(ELISA)。往预先包被【bèi】猴γ干扰素(IFN-γ)捕获抗体的【de】包被微孔中，依次【cì】加入标本、标准品、HRP标记的【de】检测抗体，经【jīng】过温育并洗【xǐ】涤。用底物TMB显【xiǎn】色，TMB在过氧【yǎng】化物酶【méi】的催化下转化成蓝【lán】色，并在酸的作用下转化成终的【de】。颜色【sè】的【de】深浅和样品中【zhōng】的猴γ干扰素(IFN-γ)呈正相关【guān】。用【yòng】酶标仪在450nm 波长下测定【dìng】吸光度(OD 值)，计算样品浓【nóng】度。

实验所需自备试验器材：

1. 酶标仪(450nm)

2. 高精度加【jiā】样【yàng】器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3. 37℃恒温箱

4. 蒸馏水或去离子水

样本处理及要求：

1. 血清【qīng】：将收集于血清分离管【guǎn】的【de】全血标本在【zài】室【shì】温放置2小时或4℃过夜，然后1000×g离心20 分钟【zhōng】，取上【shàng】清即可【kě】，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

2. 血浆【jiāng】：用【yòng】EDTA或【huò】肝素作为抗【kàng】凝剂采集标本【běn】，并【bìng】将标本【běn】在采集后的30分钟内于9-22℃ 1000×g离心15分【fèn】钟【zhōng】，取上清即可检测，或将上【shàng】清置于-20℃或-80℃保存，但应避【bì】免反复冻融。

3. 组织匀浆：用【yòng】预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织【zhī】，去【qù】除残【cán】留血【xuè】液【yè】(匀浆中裂解的红细胞会【huì】影响【xiǎng】测量结果)，称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS(一【yī】般按【àn】1:9的重量体积【jī】比，比如1g的组织样品对应【yīng】9mL的PBS，具体体【tǐ】积【jī】可根据【jù】实验【yàn】需要适【shì】当【dāng】调整，并做好记【jì】录。推荐在PBS中【zhōng】加入蛋白酶抑制剂)加入玻璃匀浆器中，于冰上充分研磨【mó】。为【wéi】了进一步裂解组织细胞【bāo】，可【kě】以对匀浆【jiāng】液进行超【chāo】声破碎【suì】，或【huò】反复冻融。后【hòu】将匀浆液于5000×g离心5~10分钟，取上【shàng】清检【jiǎn】测。

4. 细胞培养物上清：请1000×g离心20分钟，取上【shàng】清即可检测，或将上【shàng】清【qīng】置于-20℃或-80℃保存，但应避【bì】免反复冻【dòng】融。

5. 其它生【shēng】物标【biāo】本：1000×g离心【xīn】20分钟【zhōng】，取上清即可检测。

6. 样品外观：样品应清澈透明，悬浮物应离心去除。

7. 样品【pǐn】保存：样品【pǐn】收集后若在1周【zhōu】内【nèi】进行【háng】检测的可保存于4℃，若不能及时检测，请按一【yī】次使用量分装，冻存于【yú】-20℃(1个月内检测)，或-80℃(6个月【yuè】内检测)，避免反复冻融，标本溶血会影响后检测结果，因此【cǐ】溶血标【biāo】本【běn】不【bú】宜进行此【cǐ】项检测。

注意事项：

1. 严【yán】格按照规定【dìng】的时间和温度【dù】进行温【wēn】育以【yǐ】保证准确结果。所有试剂都必须【xū】在使用【yòng】前达到室温9-22℃。使用后【hòu】立即冷藏保存试剂。

2. 洗【xǐ】板不正【zhèng】确【què】可以导致【zhì】不准确的结果。在加入底【dǐ】物前确保尽量吸【xī】干孔内液体【tǐ】。温育过程中不要让【ràng】微【wēi】孔干燥掉。

3. 消除板底残留的液体和手指印，否则影响OD值。

4. 底物显【xiǎn】色液应呈无色或很【hěn】浅【qiǎn】的【de】颜色，已经变【biàn】蓝的底物液不能使用。

5. 避免试剂和标本的交叉污染以免造成错误结果。

6. 在储存和温育时避免强光直接照射。

7. 平衡至室温后再打开密封袋以防水滴凝聚在冷板条上。

8. 任何【hé】反应试剂不能接【jiē】触漂【piāo】白【bái】溶【róng】剂或漂白溶【róng】剂所散发的强烈气体。任【rèn】何漂白成分都会破【pò】坏试剂盒中反应试剂的生物活【huó】性。

9. 不能使用过期产品。

10. 如果【guǒ】可能【néng】传播疾病【bìng】，所【suǒ】有的样【yàng】品都应管理好，按照规定的程序处【chù】理样【yàng】品和检测装置。

猴γ干扰素(IFN-γ)试剂盒操作步骤：

1．从室温【wēn】平衡60min后的铝【lǚ】箔袋中取出所需板条，剩【shèng】余板条用自封袋密封放回【huí】4℃。

2．设置标准品【pǐn】孔和样本孔，标准【zhǔn】品孔各加不同浓度的【de】标准【zhǔn】品50μL。

3．样本孔中a加入待测样本50μL；空白孔不加。

4．除空白孔外，标【biāo】准品【pǐn】孔和样本孔中【zhōng】每孔【kǒng】加入辣根过氧化物酶(HRP)标【biāo】记【jì】的检测【cè】抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水【shuǐ】浴锅或恒温箱温育60min。

5．弃去液【yè】体，吸水【shuǐ】纸上拍干，每孔【kǒng】加满洗涤液(350μL)，静【jìng】置1min，甩去洗涤液【yè】，吸水【shuǐ】纸上【shàng】拍干，如此重复洗板5次【cì】(也可用洗板机洗板【bǎn】)。

6．每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7．每孔加【jiā】入终【zhōng】止【zhǐ】液50μL，15min内【nèi】，在450nm波长【zhǎng】处测定各孔的OD值。

实验结果计算：

绘【huì】制标准曲线：在【zài】Excel工作表中，以标【biāo】准【zhǔn】品浓度作横坐【zuò】标，对应OD值作纵坐标【biāo】，绘制出标准品线性回归曲线，按曲线方程计【jì】算各样本【běn】浓【nóng】度【dù】值。

(此图仅供参考)

性能：

1. 检测范围：25 pg/mL – 800 pg/mL。

2. 灵敏度：检测浓度小于1.0 pg/mL。

3. 特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。

4. 重【chóng】复性：板内变异系数小于10% ，板【bǎn】间变异系数小于15% 。

技术小提示：

1. 当混合或重溶蛋白溶液时，尽量避免起沫。

2. 为【wéi】了避免交叉感【gǎn】染，配置不同浓度标准品【pǐn】、上样【yàng】、加不同试剂都【dōu】需要【yào】更【gèng】换枪头。另【lìng】外不【bú】同试剂请分别使用不同的移液槽【cáo】。

3. 每次孵育时，请正确使用封板胶可保证结果的准确性。

4. 混合【hé】后的显色底【dǐ】物在上板前应为无色，请避光保【bǎo】存【cún】；假如【rú】微孔板后，将由物【wù】色变成【chéng】不同深度的蓝色【sè】。

5. 终【zhōng】止液上板顺序应同【tóng】显色底物【wù】上板顺【shùn】序一致；加入终止液后【hòu】，孔【kǒng】内颜色由蓝【lán】变黄；若【ruò】孔内有绿色【sè】，则表明孔内液体未混匀；请充【chōng】分混合。

说明：

1. 由【yóu】于现有【yǒu】条件及科学技【jì】术【shù】水【shuǐ】平尚不【bú】能对【duì】所【suǒ】有供货商【shāng】提供的所有原料进行全面【miàn】的鉴定与分析，本产品可能存在一定的质量技术风险。

2. 终的实验结果【guǒ】与试剂的有效性【xìng】、实验者的相关【guān】操【cāo】作以及当时的实验环【huán】境【jìng】密切相关，请务必【bì】准备充足的标本备份。

3. 不同【tóng】批次的同一产品可能【néng】会有少许差别，如：检测限【xiàn】、灵敏【mǐn】度以及显【xiǎn】色时【shí】间等，请依据试【shì】剂盒内说明书进行【háng】实验操作，网站【zhàn】电子版说明书仅【jǐn】作【zuò】参考。

4. 只有全部使用本试【shì】剂盒配套【tào】试剂才能【néng】保【bǎo】证检测效果，不能混用【yòng】其他商的产【chǎn】品。只有【yǒu】严格遵【zūn】守本试剂盒的【de】实验说明才会得到佳的【de】检测结果。